Intravitale Microscopie van de hersenen van muizen microcirculatie met behulp van een gesloten Cranial Window

Summary

Intravitale microscopie om temporele en ruimtelijke hemodynamische en inflammatoire gebeurtenissen in de pial microcirculatie te volgen.

Abstract

Dit experimenteel model werd ontworpen om de muis te pial microcirculatie te beoordelen tijdens acute en chronische, fysiologische en pathofysiologische hemodynamische, inflammatoire en metabolische voorwaarden, met behulp van in vivo fluorescentie microscopie. Een gesloten craniale raam is geplaatst over het linker parietooccipitalis cortex van de muizen. De lokale microcirculatie wordt opgenomen in real time door het venster met behulp van epi en fluorescentie verlichting, en metingen van de schepen diameters en rode bloedcellen (RBC) snelheden worden uitgevoerd. RBC snelheid is gemeten met behulp van real-time cross-correlatie-en / of fluorescent gelabelde erytrocyten. Leukocyten en bloedplaatjes naleving van pial schepen en beoordeling van de perfusie en vasculaire lekkage worden gemaakt met behulp van fluorescentie-label markers zoals albumine-FITC en anti-CD45-antilichamen TXR. Microcirculatie kan herhaaldelijk worden opgenomen video over meerdere dagen. We gebruiken voor de eerste keer dat de venster sluiten hersenen intravitale microscopie aan de pial microcirculatie om dynamische veranderingen volgen in de loop van Plasmodium berghei ANKA infectie bij muizen en laten zien dat de expressie van CM wordt geassocieerd met microcirculatie stoornissen gekenmerkt door vaatvernauwing, sterke afname in het bloed studie flow en uiteindelijk vasculaire instorten.

Protocol

1. Craniotomie

Een craniotomie in 8-tot-10-week oude muizen moet worden uitgevoerd op voorhand zoals eerder beschreven ^een, behalve dat een titanium staaf niet is geplaatst in de kop van het dier. De chronische craniale venster is een stabiele voorbereiding waarmee het onderzoek van de pial microcirculatie, zelfs maanden na de implantatie. Meestal voeren we onze studies 2-3 weken na de craniale venster implantatie.

2. Intravitale microscopie

1. Twee-drie weken na craniotomie, lichaamstemperatuur wordt gecontroleerd en vervolgens de muis is licht verdoofd met isofluraan (4% voor inductie, 1-2% ....

Discussion

De intravitale microscopie hier beschreven methode biedt een unieke en krachtige tool voor gedetailleerde observatie van de pial microcirculatie in de muis. Het staat de afzonderlijke vermelding van de individuele arteriolen en venulen en het meten van veranderingen van een aantal parameters zoals schip diameters, RBC snelheden, de doorbloeding, hechting aan en rollen van leukocyten, bloedplaatjes en andere bloed-elementen, vasculaire lekkage, weefsel pH en pO2 en mogelijk nog vele andere toepassingen. De in vivo

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurane	Baxter Internationl Inc.	FDG9623
Carbocyanine dye Dil	Molecular Probes, Life Technologies	D306
Albumin-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517
P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865