We hebben gesynthetiseerd een nieuwe analoog van pancratistatin met vergelijkbare anti-kanker activiteit als native pancratistatin, interessant, combinatorische behandeling met tamoxifen leverde een drastische verbetering in de apoptotische en autofagocytische inductie door mitochondriale richten met minimale effecten op goedaardige fibroblasten. Zo kon JCTH-4 in combinatie met tamoxifen zorgen voor een veilige anti-kanker therapie.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Verbetering van de apoptotische en autofagocytische Inductie door een nieuwe synthetische C-1-analoog van 7-deoxypancratistatin in de moedermelk Darmkanker en Neuroblastoom Cellen met Tamoxifen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Borstkanker is een van de meest voorkomende vormen van kanker onder vrouwen in Noord-Amerika. Vele huidige antikankerbehandelingen, zoals ioniserende straling, apoptose via DNA-schade. Helaas is een dergelijke behandeling niet-selectief voor kankercellen en produceren soortgelijke toxiciteit in normale cellen. Wij hebben gemeld selectieve inductie van apoptose in kankercellen door de natuurlijke verbinding pancratistatin (PST). Onlangs is een nieuwe PST analoog een C-1 acetoxymethyl derivaat van 7 deoxypancratistatin (JCTH-4), die door de novo synthese en vertoont vergelijkbare selectieve apoptose inducerende activiteit in verscheidene cellijnen. Onlangs heeft autofagie betrokken bij maligniteiten als zowel pro-overleving en pro-dood mechanismen in reactie op chemotherapie. Tamoxifen (TAM) heeft altijd aangetoond inductie van pro-survival autofagie in tal van vormen van kanker. In deze studie werd de effectiviteit van JCTH-4 alleen en in combinatie met TAM om celdood te induceren in de moedermelk Cancer (MCF7) en neuroblastoom (SH-SY5Y) cellen werd geëvalueerd. TAM alleen autofagie veroorzaakt, maar onbeduidend celdood terwijl JCTH-4 alleen al veroorzaakt significante inductie van apoptose met een aantal inductie van autofagie. Interessant is dat de combinatorische behandeling leverde een drastische toename van apoptotische en autofagocytische inductie. We tijdsafhankelijke morfologische veranderingen in MCF7 cellen die door TAM-geïnduceerde autofagie, JCTH-4-geïnduceerde apoptose en autofagie, en versnelde celdood bewaakt met behulp van combinatorische behandeling met behulp van time-lapse microscopie. We hebben aangetoond dat deze verbindingen apoptose / autofagie induceren door mitochondriale targeting in deze kankercellen. Belangrijker is dat deze behandelingen geen invloed op de overleving van goedaardige menselijke fibroblasten. Zo geven deze resultaten aan dat JCTH-4 in combinatie met TAM kunnen worden gebruikt als een veilig en zeer krachtige anti kanker therapie tegen borstkanker en neuroblastoomcellen.
Protocol
Introductie
Apoptosis, of typ ik geprogrammeerde celdood, is een fysiologisch proces dat extrinsiek kunnen werken, via binding van een ligand de dood van een death receptor, of intrinsiek. De intrinsieke route van apoptose is een initiatief van intracellulaire stress, zoals DNA-schade en mitochondriale dysfunctie, dit uiteindelijk leidt tot de permeabilisatie van de mitochondriën, dissipatie van de mitochondriale membraanpotentiaal (MMP), vrijlating van apoptotische factoren uit de mitochondriale intermembrane ruimte, en de daarop volgende uitvoering van apoptose 1.
Autofagie is een proces waarbij een ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
PST en soortgelijke verbindingen is aangetoond om anti-kanker eigenschappen 11-15,21. We hebben eerder gemeld natuurlijke PST om selectief te destabiliseren de mitochondriën in kankercellen, die veroorzaakt daarbij apoptose door het vrijkomen van apoptotische factoren 12,14. Het is zeer waarschijnlijk dat JCTH-4 werkt via hetzelfde werkingsmechanisme heeft; JCTH-4 veroorzaakt MMP ineenstorting van de MCF7 cellen gezien met TMRM kleuring (afb. 5a), en een verhoogde productie van ROS.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Dit werk werd ondersteund door de Ridders van Columbus Hoofdstuk 9671 (Windsor, Ontario), en een CIHR Frederick Banting en Charles Best Canada Graduate Scholarship uitgereikt aan Dennis Ma. Hartelijk dank aan Robert Hodge en Elizabeth Fidalgo da Silva voor hun hulp bij de time-lapse microscopie. Bedankt aan Katie Facecchia voor het bewerken van de time-lapse microscopie video's. Wij zouden ook graag Sudipa juni Chatterjee en Phillip Tremblay bedanken voor de kritische beoordeling van dit manuscript. Dit werk is opgedragen ter nagedachtenis van Kevin Couvillon die zijn strijd tegen kanker verloren in 2010.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Materiaalnaam | Vennootschap | Catalogusnummer | |
| SH-SY5Y cellijn | ATCC | CRL-2266 | |
| Dulbecco's Modified Eagles Medium F-12 HAM | Sigma-Aldrich | 51448C | |
| Foetaal runderserum | Gibco BRL | 16000-044 | |
| MCF7 cellijn | ATCC | HTB-22 | |
| RPMI-1640 medium | Sigma-Aldrich | R 0883 | |
| Blijkbaar normale menselijke foetale fibroblasten cellijn (NFF) | Coriell Instituut voor Medisch Onderzoek | AG04431B | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium, High Glucose medium | Thermo Scientific | SH30022.01 | |
| Tamoxifen citraat zout | Sigma-Aldrich | T9262 | |
| 35 mm met glazen bodem kweekschalen | MatTek | P35G-014-C | |
| Leica DMI6000 B omgekeerde microscoop | Leica Microsystems | N / A | |
| Hoechst 33342 kleurstof | Molecular Probes | H3570 | |
| Leica DM IRB omgekeerd fluorescentiemicroscoop | Leica Microsystems | N / A | |
| Annexine V AlexaFluor-488 | Invitrogen | A13201 | |
| Trypaan blauw oplossing | Sigma-Aldrich | T8154-20ML | |
| Hemocytometer | Fisher Scientific | 267110 | |
| WST-1 reagens | Roche Applied Science | 11644807001 | |
| Wallac Victor 3 1.420 Multilabel Counter | PerkinElmer | 1420-011 | |
| Tetramethylrodamine methyl ester (TMRM) | Gibco BRL | T-668 | |
| Glasvlies molen | Fisher Scientific | K8885300-0002 | |
| BioRad eiwit assay | Bio-Rad Laboratories | 500-0001Bottom van de Vorm | |
| Amplex Red | Invitrogen | A12222 | |
| Mierikswortelperoxidase (HRP) | Sigma-Aldrich | P8125 | |
| SpectraMax Gemini XPS | Molecular Devices | 3126666 | |
| Anti-LC3 antilichaam opgewekt bij konijnen | Novus Biologicals | NB100-2220 | |
| Anti-muis HRP geconjugeerde secundair antilichaam | Abcam | ab6728 | |
| Anti-konijn HRP geconjugeerde secundair antilichaam | Abcam | ab6802 | |
| Chemiluminescentie peroxidasesubstraat | Sigma-Aldrich | CPS160 | |
| Monodansylcadaverine | Sigma-Aldrich | 30432 |
Referenties
- Earnshaw, W. C. Apoptosis. A cellular poison cupboard. Nature. 397, 387-389 (1999).
- Kroemer, G., Mariño, G., Levine, B. Autophagy and the integrated stress response. Mol. Cell. 40, 280-293 (2010).
- Dalby, K. N., Tekedereli, I., Lopez-Berestein, G., Ozpolat, B.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
