High-throughput eiwit expressie Generator Met behulp van een Microfluïdische Platform

Summary

We een microfluïdische benadering voor de expressie van eiwit arrays. De inrichting bestaat uit duizenden reactiekamers gecontroleerd door micro-mechanische kleppen. De microfluïdische apparaat is gekoppeld aan een microarray-gedrukte gen bibliotheek. Deze genen worden vervolgens getranscribeerd en getranslateerd on-chip, resulterend in een eiwit array klaar voor experimenteel gebruik.

Abstract

Snel toenemende velden, zoals systeembiologie, vereisen de ontwikkeling en implementatie van nieuwe technologieën, waardoor high-throughput en high-fidelity metingen van grote systemen. Microfluidics belooft aan veel van deze vereisten, zoals het uitvoeren van high-throughput screening experimenten on-chip, omvattende biochemische, biofysische en cel-gebaseerde testen ^1. Sinds de vroege dagen van microfluidics apparaten is dit gebied sterk ontwikkeld, wat leidt tot de ontwikkeling van microfluïdische grootschalige integratie ^2,3. Deze technologie maakt de integratie van duizenden van micromechanische kleppen op een apparaat met een post-sized footprint (figuur 1). We hebben een high-throughput microfluïdische platform voor het genereren van in vitro expressie van eiwit arrays (Figuur 2) naam PING (eiwitinteractienetwerk Generator). Deze arrays kan dienen als een sjabloon voor veel experimentenzoals eiwit-eiwit ^4, eiwit-RNA ⁵ of eiwit-DNA interacties ^6.

Het apparaat bestaat uit duizenden reactiekamers, die individueel worden geprogrammeerd met behulp van een microarrayer. Uitlijning van de gedrukte microarrays microfluidics apparaten programma elke kamer met een plek tegelijkertijd potentiële verontreiniging of kruisreactiviteit Bovendien genereren microarrays met behulp van standaard technieken microarray spotten is ook zeer modulair, waardoor het rangschikken van eiwitten ^{7, 8} DNA, kleine moleculen en zelfs colloïdale suspensies. De potentiële impact van microfluidics op de biologische wetenschappen is aanzienlijk. Een aantal microfluidics gebaseerde assays zijn reeds nieuwe inzichten in de structuur en functie van biologische systemen en het gebied van microfluidics blijft biologie beïnvloeden.

Protocol

1. Device Fabrication

1. Gekochte DTPA-D SU-8-controle schimmel en SPR220-7 stroom mal van het Stanford Microfluidics Foundry ( www.stanford.edu / groep / gieterij ).
2. Bloot silicone mallen chloortrimethylsilaan (TMCS) gedurende 10 min damp van het elastomeer afgifte bevorderen na het bakken stap ^9.
3. Een mengsel van siliconen elastomeer en uithardingsmiddel (goed mengen) in twee verschillende verhoudingen 5:1 en 20:1 voor de controle en stroom vormen, respectievelijk. De verschillende verhoudingen noodzakelijk voor een goede hechting van meerdere lagen.
4. ....

Discussion

In dit artikel presenteren we een methode voor het genereren eiwitseries in high-throughput met behulp van een microfluïdische platform. De array generatie is gebaseerd op microarray afdrukken van DNA templates en in vitro eiwitexpressie van DNA in de microfluïdische apparaat.

Onze nieuwe microfluïdische platform heeft een aantal belangrijke voordelen ten opzichte van de thans gebruikte methoden, waardoor het een veelbelovende en algemeen instrument voor proteomics. Een voordeel is .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagens / Equipment	Vennootschap	Catalogusnummer
PDMS-Sylgard 184	Dow Corning USA	ESSEX-DC
Chloortrimethylsilaan (TMCS	Sigma-Aldrich	C72854
Epoxy gecoat glas substraten	CEL Associates USA	VePo-25C
Polyethyleen glycolconcentraat (PEG)	Sigma-Aldrich	81260
D-trehalose dihydraat	Sigma-Aldrich	T9531
Gebiotinyleerd-BSA	Doorboren	PIR-29130
Neutravidine	Doorboren	31050
penta-His-biotine	Qiagen	34440
Hepes	Biological Industries	03-025-1B
TNT-T7	Promega	L5540
C-myc antilichaam Cy3	Sigma-Aldrich
Schakelkast	Stanford Microfluidics Foundry
Schimmel	Stanford Microfluidics Foundry
Pin	New England Kleine Buizen Corporation
Tygon microbore buis	Tygon	S-54-HL
Microarrayer	Bio Robotics	MicroGrid 610
Silicone pinnen	Parallel Synproefschrift	SMT-S75