Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Summary

Isolatie van lymfocyten met behulp van de Miltenyi MAC-kit is een betrouwbare manier om cellen van hele lymfeweefsel homogenaten te zuiveren. Cellen gezuiverd met behulp van de Miltenyi systeem zijn meestal ≥ 96% zuiver. Hier tonen we de stappen die zijn genomen om CD4 + T-cellen, een van de vele kits worden aangeboden door Miltenyi isoleren.

Abstract

Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +. Dit protocol wordt gebruikt in combinatie met het protocol Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen gepubliceerd in nummer 7 van Jupiter, voor het zuiveren van T-cellen en andere celtypes te adoptief dragen voor de beeldvorming doeleinden. Hoewel we FACS-analyse niet aan te tonen in dit protocol video, is het sterk aanbevolen om de totale zuiverheid van de geïsoleerde cellen met behulp van de juiste antilichamen via FACS te controleren. Daarnaast tonen we de niet-steriele methode van T-cel isolatie. Als steriele cellen nodig zijn voor uw specifieke end-user applicatie, moet u alle van de aangetoonde procedures in de weefselkweek kap doen onder standaard steriele omstandigheden. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw eigen experimenten!

Protocol

Lees en volg het protocol opgenomen in de Miltenyi kit of online op http://www.miltenyibiotec.com/ .

....

Discussion

Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
MACS Buffer	Reagent	None	None	Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation	Reagent	Miltenyi Biotec	130-090-860	For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Reagent			For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish	Other	Corning	430588	Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer	Tool	BD Biosciences	352350	Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe	Tool	Tyco Healthcare, Covidien	8881516051	Used in the preparation of a single cell suspension.
10x Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS)	Reagent	Invitrogen	14200-075	For use in RBC lysis.
Sterile Water	Reagent	Sigma-Aldrich	W4502	For use in RBC lysis.