Dit protocol beschrijft de isolatie van vet-afgeleide stromale cellen van lipoaspirate en de oprichting van een 4 mm kritische grootte calvarial defect aan het skelet regeneratie te evalueren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Reparatie van een kritische grootte Calvarial Defect Model Met behulp van Adipose-afgeleide stromale cellen geoogst uit Lipoaspirate
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Craniofaciale skelet herstel en regeneratie biedt de belofte van de novo weefselvorming door een cel benadering gebruik stamcellen. Vet-afgeleide stromale cellen (ASC's) hebben bewezen een rijke bron van multipotente stamcellen kunnen ondergaan osteogene, chondrogene, adipogene en myogene differentiatie. Vele studies hebben onderzocht de osteogene potentieel van deze cellen in vivo met gebruik van steigers verschillende biomaterialen voor cellulaire levering. Het is aangetoond dat door gebruik van een osteoconductief, hydroxyapatiet beklede poly (melkzuur-co-glycolzuur) (PLGA-HA) scaffold gezaaid met ASC, een kritische grootte calvarial defect, een defect dat wordt gedefinieerd door de onmogelijkheid om ondergaan spontane genezing gedurende de levensduur van het dier, kan effectief worden tonen robuuste ossale regeneratie. Dit in vivo model toont basis van translationele werkwijzen om het botweefsel regenereren - de cellulairecomponent en biologische matrix. Deze werkwijze dient als model voor de uiteindelijke klinische toepassing van een progenitor cel naar de reparatie van een specifiek weefsel defect.
Protocol
1. Cell Isolatie en Expansie
- Alle toestemming van de patiënt en de experimentele protocollen werden beoordeeld en goedgekeurd door Stanford University Institutional Review Board (Protocol # 2188 en # 9999).
- Zorg voor menselijk onderhuids vetweefsel van electieve lipoaspiratie ingreep onder plaatselijke / algemene verdoving.
- Er zullen twee lagen in de lipoaspirate (Figuur 1A). De supernatant bevat het overgrote deel van de verwerkte celmateriaal. De onderste laag wordt meestal geïnjecteerd zoutoplossing. Adipose-afgeleide stromale cellen kunnen worden geoogst uit beide lagen, maar de opbrengst is veel groter uit ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Aangezien de isolatie van vet-afgeleide stromacellen 2 van lipoaspirate zijn deze cellen gedifferentieerd zijn in een grote verscheidenheid van cellulaire lijnen. Vetweefsel is van mesodermale oorsprong en daarom multipotente vetweefsel-afgeleide stromale cellen zullen waarschijnlijk het meest effectief met toepassing naar een mesodermale afstamming. De mogelijkheid om skeletweefsel genereren is vooral van belang gezien het tekort aan donor sites voor een autotransplantaat en de inherente beperkingen van synt.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
We willen graag Dr George Commons en Dr Dean Vistnes bedanken voor hun steun en medewerking van ons onderzoek. Dit werk wordt ondersteund door National Institute of Dental en Craniofaciale Onderzoek vergoedingen 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 en RC2 DE020771-02, de Oak Foundation en Hagey Laboratorium voor Pediatrische regeneratieve geneeskunde voor de MTL Dr Hyun wordt ondersteund door de Saint Joseph Mercy Hospital GME .
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Naam van het reagens: | Vennootschap | Catalogusnummer | Opmerkingen (optioneel) |
| Lipoaspirate Harvest | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Balanced Salt Hank's oplossing | Cellgro | 21-023-CV | |
| Collagenase | Sigma | C6885-500MG | |
| Mobiele Zeef 100 um | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-top 500 ml 0,22 pm filter | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial Defect | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Circular Mes 4,0 mm | Xemax Chirurgische | CK40 |
Referenties
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
