$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
* Alle materialen samen met de respectieve fabrikanten en / of leveranciers worden onder het protocol.
1. Montage van Implant
- Een mengsel van warmte hardbare epoxy glasvezel door toevoeging van 100 mg verharder 1 g hars.
- Meet en snijd ongeveer 35 mm van 125 urn glasvezel met 100 micrometer kern door het scoren van het met een wig-tip carbide schrijver. Plaats de schrijver loodrecht op de glasvezel en de score in een enkele, unidirectionele beweging. Het snijden van de vezels volledig beschadigt de vezel kern.
- Plaats een LC keramische ferrule met een 127 micrometer boren zich in de bankschroef, bolle zijde naar beneden gericht.
- Plaats de glasvezel in de ferrule. De glasvezel moet schuiven soepel en marginaal voorbij het convexe einde van de ferrule (figuur 1a).
- Breng een druppel van warmte-uithardende glasvezel epoxy aan het platte uiteinde en warmte met warmte kanon tot epoxy wordt zwart. De epoxy moetVul de ring als het wordt verwarmd voor huidvorming. De epoxy moet genezen binnen ~ 1 min van constante warmte applicatie.
- Verwijder alle epoxy langs de zijden van de ferrule, omdat het zal verhinderen interfacing met de koppeling.
- Polish de bolle kant van de klemring met een LC glasvezel polijstschijf (FOPD) op aluminiumoxide hard vellen op het polijstkussen (figuur 1b). Maak cirkelvormige rotatie patronen en polijsten op vier cijfers in de volgende volgorde: 5, 3, 1 0,3 micrometer grit.
- Snijd de glasvezel aan het platte uiteinde op de juiste lengte zodanig dat het gebied van belang gericht. De lengte kan worden bepaald met de stereotactische atlas.
- Test het implantaat door deze op de laser via het snoer van hieronder beschreven. De gepolijste uiteinde van het implantaat in de huls van de koppeling en moet direct contact met de tegenoverliggende ferrule. Het implantaat moet kunnen 10 mW van lichtopbrengst behouden gemeten bij de punt van ee implantaat vezels. Een slechte implantaat een zwak brandpunt nabij het uiteinde van de glasvezel.
- Bewaar de afgewerkte implantaten (figuur 1c) in schuim tot gebruik.
2. Montage van Fiber Optic Koppeling Cord
- Een mengsel van warmte hardbare epoxy glasvezel als hierboven.
- Meet en knip de juiste lengte van 220 micrometer glasvezel met 200 pm kern door het scoren van het met een wig-tip carbide schrijver. De lengte van de vezel moet toelaten de muis vrij bewegen de behuizing maar laat de muis te kauwen door de vezel.
- Plaats de glasvezel in een lengte van furcatie slang iets langer dan de optische lengte. De buis moet een binnendiameter iets groter dan de glasvezel.
- Strip ~ 25mm aan de ene kant van de glasvezel en plaats deze in het metalen uiteinde van een multimode FC MM Huls Vergadering met 230 micrometer droeg totdat deze stopt. De glasvezel moet steken door de Ferrule uiteinde (figuur 2a).
- Bevestig de verbinding met cyanoacrylaat (super lijm) aan het metalen uiteinde. Bedek de verbinding met een connector Boot en polijst de ferrule eindigen met een FC FOPD. Maak cirkelvormige rotatie patronen en polish op vier cijfers in de volgende volgorde: 5, 3, 1, 0,3 um grit (Figuur 2b).
- Strippen en het andere uiteinde van de glasvezel in een LC keramische ring (230 pm id boring) met de bolle kant distale. Breng een druppel epoxy op het platte uiteinde en verhit tot genezen.
- Polish de bolle kant van de klemring met een FC FOPD op aluminiumoxide polijsten platen zoals hierboven beschreven.
- Schuif een LC ferrule huls over de bolle kant van de ferrule tot halverwege de huls.
- Plaats Krimpkous over de furcatie buis en mof en warmte te beveiligen en beschermen van de verbinding (figuur 2c).
- Test de koppeling door deze op de laserbron en het meten van de lichtopbrengstut door de koppeling met een spectrofotometer. Het licht verlies tussen de laser output en de gemeten koppeling uitgang mag niet meer dan 30%.
3. Chirurgische implantatie
* Dit is een tips-only procedure. Instrumenten zijn steriel maar handschoenen hoeven niet te wijten zijn aan een constante manipulatie tussen de instrumenten en apparatuur.
- Verdoven de muis met een intraperitoneale injectie Ketamine / Xylazine mengsel 100 en 10 mg / kg met een 30-gauge naald.
- Scheer de hoofdhuid met tondeuse. Veeg de hoofdhuid met 70% isopropylalcohol, gevolgd door Betasept (4% Chloorhexidine-oplossing) schoonmaken voor twee minuten, eenmaal te herhalen.
- Plaats de muis in de sterotaxic rig en zet het hoofd, ervoor te zorgen dat de schedel niveau. Breng oogzalf voor de ogen tot droog en postoperatieve pijn te voorkomen. Behoud anesthesie met isofluraan vervluchtigde (1-3% verdund met zuurstof, afhankelijk van de fysiologische toestand van de mouse, die voortdurend moet worden gecontroleerd door reactie op een staart knijpen).
- Maak een insnijding door de middellijn van de hoofdhuid, waardoor de schedel uit het oog banen te lambda. Verdringen bindweefsel nodig.
- Gebruik Serafin klemmen te leggen dat de huid en onderhouden van een toegang tot de schedel (figuur 3a).
- Etch een geruit patroon over het gehele oppervlak van de schedel met een tandheelkundige pick. Weg te wassen puin met een steriele zoutoplossing. Goed afdrogen.
- Breng waterstofperoxide (3%) om de blootgestelde schedel met een wattenstaafje voor ~ 2-3 seconden aan microporiën maken. Was meerdere malen en afdrogen. Als alternatief kunnen ankers worden geschroefd in de schedel, zoals beschreven in Sparta et al.. (2012).
- Nogmaals, etsen een geruit patroon in de schedel met een tandheelkundige pick en weg te spoelen vuil met een zoutoplossing. Goed afdrogen.
- Met een draaiend gereedschap, een kleine boorgat craniotomie (<1 mm in diameter) met een steriele boor(Geautoclaveerd) boven het gebied van belang, bepaald door de stereotactische atlas gekalibreerd bregma en lambda. Zorg ervoor dat u de dura breken of beschadigt weefsel. Wegspoelen puin en afdrogen.
- Plaats de glasvezel ferrule (implantaat) in de probe houder en sluit de stereotactische arm.
- Plaats het implantaat op zijn plaats direct boven het gebied van belang met het stereotactische arm (figuur 3b). Als u de optische vezel in het hersenweefsel, moet de vezel langzaam voortbewogen met een snelheid van ~ 2 mm / min. De ferrule moet rusten op de resterende schedel.
- Maak een mengsel van tandheelkundig cement. Het mengsel moet een voldoende lage viscositeit om gemakkelijk passen in de schedel. Mengsel bruikbaar voor 2-4 minuten.
- Met een steriele tandenstoker een dunne, gelijkmatige laag tandheelkundig cement in de schedel en op het onderste gedeelte van het implantaat. De basislaag van tandheelkundig cement omvat ten zoveel oppervlakte op de schedel alsmogelijk. Laat de tandheelkundig cement in contact komen met de huid van de muis. Dit zal leiden tot meer problemen bij het hechten en irritatie van de muis. Als het tandheelkundig cement in contact komt met de huid, laat het gedeeltelijk drogen zodat de gehele laag cement kan worden afgepeld voor setting.
- Laat het dan volledig opdrogen.
- Breng ook lagen van tandheelkundig cement om een kleine verhoging vormen over de schedel en rond het implantaat, waardoor elke laag volledig laten drogen (Figuur 3c). Laat ~ 3-5 mm van de bolle kant van de ferrule schoon van cement, zodat een gladde, vrij verbinding.
- Hechten de hoofdhuid over de heuvel van tandheelkundige cement en rond het implantaat met steriele, voor eenmalig gebruik zijde gevlochten hechtdraad (6-0) met een C22 naald. Verwijder na 7 dagen. Optioneel: Gebruik Vet Bond voor extra binding na het hechten. Zorg ervoor dat u minimaal Vet Bond te gebruiken. Teveel kan leiden tot ernstige beschadiging van de huid als gevolg van krabben.
- ONMIDDELLIJKy na de operatie moet muis subcutaan worden geïnjecteerd met Ketprophen (5 mg / kg) om postoperatieve pijn te verminderen. Dit zou 24 uur later herhaald. Topische toepassing analgetica (Bupivicaine) en antibiotica (Neosporin) gehecht aan de huid en rond de basis van het implantaat.
- Plaats de muis in een kooi boven een verwarming deken voor het herstel van anesthesie. Plaats de muis in een steriele, postoperatief herstel kooi. Het herstel kooi mogen geen beddengoed om de temperatuur te behouden en stikken. De muis kan worden teruggegeven aan de oorspronkelijke kooi of een nieuwe kooi een keer wakker.
Juiste assemblage van de optische implantaat en koppeling resulteert in een minimale foton verlies tussen de lichtbron en het einde van de glasvezel in het gebied van belang. Goed gepolijste glasvezel moet zenden licht in een uniform, concentrische cirkel (figuur 2d). Met een zorgvuldige implantatie en hechten, het implantaat veroorzaakt geen zichtbare irritatie aande muis en kan ter plaatse blijven voor langdurige studies (figuur 3d,> 1 maand ongepubliceerde waarnemingen) zonder significante afbraak van de glasvezel of de hoeveelheid doorgelaten licht. Onjuiste implantatie of hechten kan irritatie en kan resulteren in de muis krassen door de hoofdhuid, waardoor de tandheelkundig cement, of breuk van de flensbus van de tandheelkundig cement door persistent manipulatie. Een schematisch diagram van het samengestelde systeem kan worden gezien in figuur 4.
Figuur 1. Montage van implanteerbare glasvezel. (A) De glasvezel wordt in de ferrule, iets uitsteekt voorbij de bolle kant aangegeven door de pijlpunt. (B) de bolle kant van de ring wordt gepolijst met een FOPD op steeds fijnere soorten vellen polijsten. (C) De afgewerkte implanteerbare vezel optic. Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .
Figuur 2. Montage van glasvezel koppeling gebruikt om de ketting glasvezel afdichting aan het implantaat. (A) Glasvezel steken door de ferrule montage. (B) De ferrule zijde van het samenstel wordt ingebracht in de FOPD en gepolijst met steeds fijnere soorten polijstpapier. (C) De ferrule huls is aangebracht over de ferrule en vastgezet met krimpkous. (D) De afgewerkte glasvezel koppeling moet produceren een concentrische licht met minimale foton verlies.
Figuur 3. Chirurgische implantatie van de glasvezel. (A) Het gehele oppervlak van de cranium wordt blootgesteld en bindweefsel wordt gewist. (B) De glasvezel implantaat in positie wordt gehouden met de stereotactische arm. (C) Dental cement wordt toegepast vaststelling van de glasvezel implantaat aan de schedel. (D)> 1 maand na implantatie, is de huid genezen is rond het implantaat en er zijn geen tekenen van irritatie.
Figuur 4. Schematische weergave van de functionele systeem