Analyse van vestibulaire haar celfunctie wordt bemoeilijkt door hun locatie diep in het moeilijkste deel van de schedel, de petrous temporale bot. Meest functionele haarcellen studies hebben acuut gebruikt geïsoleerde haarcellen. Hier beschrijven we een semi-intacte bereiding van muis vestibulaire epitheel voor elektrofysiologische en twee-foton microscopie studies.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een Geà ¯ soleerde semi-intacte Voorbereiding van de muis Vestibulaire Sensory epitheel voor elektrofysiologie en hoge-resolutie twee-foton microscopie
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Inzicht vestibulaire haarcellen functioneren onder normale omstandigheden, of hoe trauma, ziekte en veroudering deze te verstoren is een essentiële stap in de ontwikkeling van preventieve benaderingen en / of nieuwe therapeutische strategieën. Toch hebben de meeste studies kijken naar abnormale vestibulaire functie niet op cellulair niveau geweest, maar vooral gericht op gedrags-assays van vestibulaire disfunctie, zoals gang analyses en vestibulo-oculaire reflex prestaties. Hoewel dit werk heeft waardevolle gegevens over wat er gebeurt als er iets misgaat opgeleverd, is weinig informatie die verkregen wordt met betrekking tot de onderliggende oorzaken van disfunctioneren. Van de studies die zich richten op de cellulaire en subcellulaire processen die vestibulaire functie ten grondslag liggen, de meeste hebben zich op acuut geïsoleerd haarcellen, verstoken van hun synaptische verbindingen en ondersteunende cel milieu. Daarom is een grote technische uitdaging toegang tot de uiterst gevoelig vestibulaire haarcellen geweest in een prepreiding, dat is tenminste verstoord, fysiologisch. Hier laten we zien een semi-intacte voorbereiding van de muis vestibulaire sensorische epitheel dat de lokale micro-omgeving behoudt waaronder haarcel / primaire afferente complexen.
Inleiding
Ondanks de belangrijke bijdrage van het evenwichtsorgaan aan ons dagelijks leven, een duidelijk begrip van de processen die verantwoordelijk zijn voor de waargenomen achteruitgang van vestibulaire functie met de leeftijd blijven ongrijpbaar. Een reden voor dit gebrek aan kennis is dat daling van vestibulaire functie is vrijwel uitsluitend werd onderzocht met behulp van gedrags-assays, waaronder de vestibulo-oculaire reflex (VOR), een nauwkeurige indicator van extrinsieke vestibulaire functie, maar biedt beperkte inzicht in de veranderingen van de intrinsieke componenten . Dit is een belangrijke belemmering voor ons begrip van vestibulaire haar cel functie in gezondhe....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Dieren
- Muizen werden verkregen van de Australische Knaagdieren Centre (ARC, Perth, Australië) en hield aan de Universiteit van Sydney Bosch Animal Facility op een normale 12-uur licht / donker cyclus met het milieu verrijking. Alle experimenten beschreven werden goedgekeurd door de Universiteit van Sydney Animal Ethics Committee.
- Mannelijke en vrouwelijke muizen (C57/Bl6) werden gebruikt voor alle experimenten aangezien deze stam wordt gebruikt als achtergrond voor genetische manipulatie, en gelijkwaardige wildtype 8-9 kan worden beschouwd.
2. Tissue Voorbereiding
- Bereid 300 ml ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De elektrofysiologische eigenschappen van vestibulaire haarcellen afhankelijk complex microarchitectuur waarin ze ingebed 7. Figuur 5 toont dat de semi-intacte vestibulaire epitheel preparaat kan worden gebruikt om onderscheid tussen type I haarcellen (figuur 5A), type II haarcellen (figuur 5B) en de kelk primaire afferente (figuur 5C) gebaseerd op eigenschappen gehele cel geleidingen. Deze kenmerken zijn een uitgesproken "sag" tijd.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De mechanismen die ten grondslag liggen aan onze evenwichtsgevoel hebben weinig aandacht gekregen in vergelijking met andere sensorische systemen, zoals de visuele en auditieve systemen. Van de studies die veranderingen in vestibulaire of balans functie hebben onderzocht, de meeste zijn gericht op gedragsmaatregelen waaronder de vestibulo-oculaire reflex, met onvolledige kennis van de fundamentele bouwstenen van de balans-de vestibulaire haarcellen zelf. De studies die hebben zich geconcentreerd op de haarcelle.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.
Dankbetuigingen
Financiering voor dit werk werd geleverd door een Garnett Passe en Rodney Williams Memorial Foundation Project subsidie aan R. Lim en AJ Kamp.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| REAGENTS | |||
| Leibovitz medium L-15 | Sigma Aldrich | L4386-10X1L | |
| BAPTA-1-oregon green | Invitrogen | O6806 | |
| EQUIPMENT | |||
| Stereo microscope | Leica Microsystems | A60S | |
| Upright microscope | Olympus | BX51WI | |
| Two-photon microscope | Olympus/La Vision | BX51WI/ TriMScope II | |
| Dumont #5 SF Forceps | FST | 11252-00 | |
| Friedman-Pearson Rongeurs | FST | 16221-14 | |
| Standard Pattern Scissors | FST | 14001-12 | |
| InstraTECH A-D converter | HEKA | ITC-18 | |
| Sutter Micromanipulator | Sutter | MP-225/M | |
| multiclamp amplifier | Axon Instruments | 700B | |
| Data acquisition software (electrophysiology) | Axograph | N/A | |
| Imspector Data acquisition software (two-photon) | Max Planck innovation | N/A |
Referenties
- Dulon, D., Safieddine, S., Jones, S. M., Petit, C. Otoferlin is critical for a highly sensitive and linear calcium-dependent exocytosis at vestibular hair cell ribbon synapses. J. Neurosci. 29, 10474-10487 (2009).
- Simultaneous pre- and post-synaptic recording from the peripheral vestibular calyx and its included type I hair cell. Highstein, S., Art, J., Holstein, G., Rabbitt, R. 32nd Mid Winter Research M....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
