Dithranol als een matrix voor Matrix Assisted Laser desorptie / ionisatie Imaging op een Fourier transform ion cyclotron resonantie spectrometrie

Summary

Dithranol (DT, 1,8-dihydroxy-9 ,10-dihydroanthracen-9-on) is eerder gerapporteerd als een MALDI matrix voor weefsel beeldvorming van kleine moleculen, protocollen voor het gebruik van DT voor de MALDI beeldvorming van endogene lipiden op de oppervlak van het weefsel secties door positieve-ion MALDI-MS op een ultrahoge resolutie quadrupool-FTICR instrument worden hier gegeven.

Abstract

Massaspectrometrie imaging (MSI) bepaalt de ruimtelijke lokalisatie en verspreidingspatroon van verbindingen op het oppervlak van een weefselsectie, meestal via MALDI (matrix-assisted laser desorptie / ionisatie) gebaseerde analytische technieken. Nieuwe matrices voor kleine moleculen MSI, die de analyse van laag molecuulgewicht (MW) verbindingen verbeteren nodig. Deze matrices moeten verhoogde analyt signalen te bieden, terwijl het verminderen van MALDI achtergrond signalen. Bovendien, het gebruik van ultrahoge resolutie instrumenten, zoals Fourier transform ion cyclotron resonantie (FTICR) massaspectrometers, heeft de mogelijkheid om analyt signalen lossen van matrix signalen, en dit kan deels veel problemen in verband met de achtergrond afkomstig van de MALDI overwinnen matrix. De verlaging van de intensiteiten van de metastabiele matrix clusters door FTICR MS kan ook helpen om een ​​deel van de storingen in verband met matrix pieken op andere instrumenten te overwinnen. Hoge-resolutieinstrumenten zoals de FTICR massaspectrometers zijn voordelig omdat ze het verspreidingspatroon van veel stoffen tegelijk kan produceren, terwijl het toch het vertrouwen in de chemische identificaties. Dithranol (DT, 1,8-dihydroxy-9 ,10-dihydroanthracen-9-on) is eerder gerapporteerd als een MALDI matrix voor weefsel beeldvorming. In dit werk, een protocol voor het gebruik van DT voor MALDI beeldvorming van endogene lipiden uit de oppervlakken van weefsel van zoogdieren secties, door positieve-ion MALDI-MS, op een ultrahoge resolutie hybride quadrupool FTICR instrument is verstrekt.

Introduction

Massaspectrometrie imaging (MSI) is een analytische techniek die de ruimtelijke lokalisatie en verspreidingspatroon van verbindingen op het oppervlak van een weefselsectie ^1,2. Matrix-assisted laser desorptie / ionisatie (MALDI) MSI voor de analyse van peptiden en eiwitten is gebruikt voor meer dan een decennium en zijn er grote verbeteringen in methoden voor monstervoorbereiding, detectie gevoeligheid, ruimtelijke resolutie, reproduceerbaarheid en dataverwerking ^3,4 geweest. Door informatie uit histologisch gekleurde coupes en MSI experimenten pathologen kunnen de verdelingen van specifieke verbindingen correleren met pathofysiologisch interess....

Protocol

1. Tissue Snijden

1. Flash-vries de specimens probleem, eenmaal geoogst, met behulp van vloeibare stikstof, versturen ze op droog ijs (of de scheepvaart nodig is), en bewaar ze bij -80 ° C tot weefsel snijden. (Als commerciële monsters worden gebruikt, zodat de monsters worden op deze manier bereid.)
2. Snijd organen bij een beheersbare omvang van de MALDI doelgroep passen. Snij ongewenste delen van het orgel. Voor deze studie hier beschreven, zouden runder kalf lenzen decapsulated met behulp van een eerder beschreven procedure ³⁵ voor weefsel snijden.
3. Verwijder gehele organen uit de -80 ° C vriezer en zet ze op een cryogene weefse....

Results

Weefselmonsters die coupes en dooi gemonteerd op de ITO gecoat glas dia's moeten intact zijn, zonder zichtbare scheuren. Voor veel weefsels, directe weefsel dooi montage op een ITO gecoat glas dia is aanvaardbaar. Voor sommige specifieke weefsels zoals runderen lens, wordt uitgebreid scheuren van het weefsel vaak gezien als directe dooi montage wordt gebruikt (figuur 1a). Voorcoating van de ITO glasplaatje met ethanol of mierenzuur (figuur 1b) helpt om de integriteit van de we.......

Discussion

De belangrijkste overwegingen voor een succesvolle MALDI MSI zijn: 1) de voorbereiding weefsel, 2) matrix keuze; 3) matrix toepassing, en 4) interpretatie van gegevens en analyse. Als het monster en de matrix passende wijze bereid, wordt het MS data acquisitie geautomatiseerd. De gegevensanalyse van dergelijke experimenten is vrij arbeidsintensief.

Geschikte weefsels voorbereiding is cruciaal voor een succesvolle MALDI MSI experimenten. De bron van het weefsel en de behandeling kan een grote.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rat Liver	Pel-Freez Biologicals	56023-2
Bovine Calf Lens	Pel-Freez Biologicals	57114-2	Sample should be decapsulated29 before use
Dithranol (DT)	Sigma-Aldrich	10608	MALDI Matrix
α-Cyano-4-hydroxy-cinnamic Acid (CHCA)	Sigma-Aldrich	70990	MALDI Matrix
2,5-Dihydroxybenzoic Acid (DHB)	Sigma-Aldrich	85707	MALDI Matrix
Reserpine	Sigma-Aldrich	83580
Terfenadine	Sigma-Aldrich	T9652
Formic Acid	Sigma-Aldrich	14265
Ammonium Formate	Sigma-Aldrich	14266
Ammonium Hydroxide	Sigma-Aldrich	320145
Trifluoroacetic Acid (TFA)	Sigma-Aldrich	302031
Water	Sigma-Aldrich	39253
Methanol	Sigma-Aldrich	34860
Acetonitrile	Sigma-Aldrich	34967
Ethyl Acetate	Sigma-Aldrich	34972
Isopropanol	Sigma-Aldrich	34965
Chloroform	Sigma-Aldrich	366927
Acetone	Sigma-Aldrich	34850
Ethanol	Commercial Alcohols		95%
ES Tuning Mix	Agilent Technologies	G2431A
ITO Coated Glass Slides	Hudson Surface Technology	PSI1207000	Ensure that samples are placed on the electrically conductive side
Wite-Out Shake-N-Squeeze Correction Pen	Bic	WOSQP11
Airbrush Sprayer	Iwata	Eclipse HP-CS
ImagePrep	Bruker	249500-LS
MALDI adapter	Bruker	235380