We beschrijven procedures om atherosclerotische laesies in muismodellen te kwantificeren en te karakteriseren door middel van nauwkeurig snijden van de aortasinus en de ascenderende aorta, gecombineerd met histochemische en immunohistochemische analyse.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Kwantitatieve analyse en karakterisering van atherosclerotische laesies in de muis aortasinus
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Atherosclerose is een ziekte van de grote slagaders en een belangrijke onderliggende oorzaak van hartinfarct en beroerte. Er zijn verschillende muismodellen ontwikkeld om het onderzoek naar de moleculaire en cellulaire pathofysiologie van deze ziekte te vergemakkelijken. In dit manuscript beschrijven we specifieke technieken voor de kwantificering en karakterisering van atherosclerotische laesies in de muis aorta sinus en opgaande aorta. Het voordeel van deze procedure is dat het een nauwkeurige meting van de dwarsdoorsnede en het totale volume van de laesie biedt, die kan worden gebruikt om atherosclerotische progressie tussen verschillende behandelingsgroepen te vergelijken. Dit is mogelijk door gebruik te maken van de klepblaadjes als een anatomisch herkenningspunt, samen met een zorgvuldige aanpassing van de snijshoek. We beschrijven ook basiskleuringsmethoden die kunnen worden gebruikt om atherosclerotische progressie te beginnen te karakteriseren. Deze kunnen verder worden aangepast om antigenen van specifiek belang voor de onderzoeker te onderzoeken. De beschreven technieken zijn over het algemeen toepasbaar op een breed scala van bestaande en nieuw gecreëerde voedings- en genetisch-geïnduceerde modellen van atherogenese.
Inleiding
In de afgelopen twee decennia hebben de ontwikkeling en het gebruik van atherosclerose-gevoelige muismodellen door middel van voedings- en/of genetische manipulatie onze kennis van de moleculaire en cellulaire mechanismen die betrokken zijn bij de ontwikkeling van atherosclerotische laesies aanzienlijk verbeterd1-3. Een groot deel van onze kennis en begrip van atherogenese komt uit studies die zijn uitgevoerd bij apolipoproteïne (Apo)-E-deficiënte4 muizen, waarbij atherosclerotische laesies spontaan ontwikkelen en bij lagedichtheids-lipoproteïne-recepto....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
De Animal Research Ethics Board van McMaster University heeft alle hierin beschreven procedures vooraf goedgekeurd.
1. Hart en aorta verzamelen
- Verdoofd de muis en open voorzichtig de borstholte om het hart en de proximale aorta zichtbaar te maken.
- Extracteer het bloed uit de muis door directe punctie van de rechter ventrikel van het hart.
Opmerking: Het bloed kan worden opgeslagen en gebruikt voor de analyse van plasmalipiden en andere bloedfactoren.
- Extracteer het bloed uit de muis door directe punctie van de rechter ventrikel van het hart.
- Dode de muis door cervicale dislocatie.
- Spoel de vaatbundel met 5 ml zoutoplossing.
Opmerking: Dit wordt bereikt door z....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Vijf weken oude LDLR-/- muizen kregen gedurende tien weken een standaarddieet of een vetrijk dieet. De muizen werden geofferd en geperfuseerd met formaline zoals hierboven beschreven. Er werden dwarsdoorsneden van de aortasinus geprepareerd en gekleurd met hematoxyline en eosine om het oppervlak en het volume van de laesies te bepalen (Figuur 4). Wanneer muizen een standaardvoerdieet krijgen, is de atherosclerotische ontwikkeling zeer beperkt en mogelijk niet detecteerbaar op 15-weekse leeftijd. Een vet.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Atherosclerose is een complexe chronische ziekte van de grote spierarteries die een belangrijke onderliggende oorzaak is van myocardinfarct en beroerte. De progressie van de ziekte omvat de interactie van vele verschillende celtypen binnen de arteriële wand, met circulerende bloedcellen, lipoproteïne deeltjes en andere bloed-dragende factoren die we pas beginnen te begrijpen. Veel van onze huidige kennis over de ontwikkeling en progressie van atherosclerose is afkomstig uit studies die zijn uitgevoerd in speciaal ontworp.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
Dit onderzoek werd gefinancierd door een exploitatiesubsidie van de Canadian Institutes of Health Sciences en de Canadian Diabetes Association. DEV wordt ondersteund door een beurs van de Comisión Nacional de Investigación Científica y Tecnológica (CONICYT, Chili).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| LDLR-deficient mice (D2.129S7(B6)-Ldlrtm1Her/J) | The Jackson Laboratory | stock #002207 | |
| Formalin | Sigma-Aldrich | HT5011 | |
| Histology Molds | Ted Pella Inc | 27195 | |
| Paraffin | Paramat | 19286-10 | |
| Coated slides | Fisher | 12-550-15 | |
| Solvent containers | Tissue Tek II | 4457 | |
| Microtome | Leica | RM22S5 | |
| Water bath | VWR | 80086-982 | |
| Microscope | Olympus | BX41TF | |
| Camera | Olympus | DP72 | |
| ImageJ | NIH | www.rsbweb.nih.gov/ij/ | |
| Processor | Sakura Finetek | VIP6-A1 | |
| Processing cassettes | VWR | 18000-134 | |
| Preassure Cooker | Nordic Ware | ||
| Coverslip | Fisher | 12-545-M | |
| PBS | Sigma-Aldrich | P3813 | |
| Microtome blade | Thermo Scientific | 30-518-35 | |
| Antifade mounting medium | Sigma-Aldrich | F-4680 | |
| Xylene mounting medium | Sigma-Aldrich | 44581 | |
| Aquous mounting medium | Sigma-Aldrich | I1161 | |
| Mac-3 anbody | BD Pharmingen | 553322 | |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D9542 | |
| F4/80 antibody | Abcam | Ab6640 | |
| Alpha actin antibody | Santa Cruz Biotechnology | SC-32251 | |
| Mayer’s Hematoxylin | Sigma-Aldrich | E4382 | |
| Eosin Y | Sigma-Aldrich | MHS16 | |
| DAB (3,3'-Diaminobenzidine) | Dako | K3468 |
Referenties
- Zadelaar, S., Kleemann, R., et al. Mouse models for atherosclerosis and pharmaceutical modifiers. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27 (8), 1706-1721 (2007).
- Daugherty, A., Rateri, D. L. Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
