Methodenartikel

Methoden te karakteriseren Spontane en Schrik-geïnduceerde Locomotion in een-Rotenon geïnduceerde Parkinson's Disease Model van

DOI:

10.3791/51625

⸱

17 augustus 2014

 ,  , 
1Department of Biology, Colby College

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ziekte van Parkinson is een neurodegeneratieve aandoening die resulteert uit de degeneratie van dopaminerge neuronen in het centrale zenuwstelsel, waardoor voortbeweging defecten. Rotenone modellen ziekte van Parkinson in Drosophila. In dit document worden twee testen die zowel spontaan en schrikken geïnduceerde motoriek gebreken veroorzaakt door rotenon karakteriseren.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ziekte van Parkinson is een neurodegeneratieve aandoening die resulteert uit de degeneratie van dopaminerge neuronen in het centrale zenuwstelsel, vooral in de substantia nigra. De ziekte veroorzaakt motorische gebreken, die presenteren als stijfheid, trillingen en dementie bij mensen. Rotenone is een insecticide dat oxidatieve schade veroorzaakt door remming van de functie van de elektronen transportketen in mitochondria. Het wordt ook gebruikt voor het modelleren ziekte van Parkinson bij de Drosophila. Vliegen hebben een inherent negatieve geotactic reactie, die dwingt hen om naar boven te klimmen na te zijn geschrokken. Vastgesteld is dat rotenon veroorzaakt vroegtijdige sterfte en motoriek gebreken die de vliegen "klimvermogen nadat ze neerwaarts afgetapt verstoren. Echter, het effect van rotenon op spontane beweging niet goed gedocumenteerd. Deze studie schetst twee gevoelige, reproduceerbare en high throughput assays om-rotenone geïnduceerde deficiënties karakteriserenkortlopende schrikreacties-geïnduceerde motoriek en langdurige spontane motoriek in Drosophila. Deze testen kunnen gemakkelijk worden aangepast aan andere Drosophila modellen van beweging gebreken en efficiëntie van therapeutische middelen te karakteriseren.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Locomotion gebreken een belangrijk symptoom van de ziekte van Parkinson en worden grotendeels veroorzaakt door aantasting van dopaminerge neuronen van de substantia nigra 1. Rotenon is een ketonradicaal insecticide dat is uitgebreid onderzocht aan motorische stoornissen Parkinson modelleren in Drosophila 2-6. Rotenone oxidatieve schade veroorzaakt door het blokkeren van de oxidatieve fosforylering route, die uiteindelijk leidt tot celdood 7. Dopaminerge neuronen zijn meer vatbaar voor toxiciteit rotenon, waardoor de effecten van de chemische voornamelijk motor gebaseerd 2,7. Door het induceren van symptomen van de ....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1 Drosophila Startle-geïnduceerde Locomotion Assay

  1. Drug Treatment
    1. Bezadigde om gewenste nummer te immobiliseren (ongeveer 8-12) van 1-3 dagen oude man vliegt met behulp van CO 2 en het transporteren naar flesjes die de drug aangevuld voedsel. Opmerking: ander anestheticum bijvoorbeeld ether of ijs kan worden gebruikt om vliegen te tellen verdoven en behandeling mogelijk.
    2. Laten vliegen om te herstellen van sedatie gedurende 20 minuten (of tot herstel) met de flacon in een horizontale positie (om vliegen te voorkomen dat vast komen te zitten op levensmiddelen) en leg dan de flacon rechtop in een 12 uur donker, ....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Drosophila Startle-geïnduceerde Locomotion Assay

Wildtype Canton-S, vliegen toonde een sterke negatieve geotactic reactie slechts ongeveer 88% en 5% van de vliegen in de bovenste en onderste gedeelten respectievelijk van een dubbele-injectieflacon inrichting na 30 seconden (Figuur 1). Vliegen blootgesteld aan 125 pM en 250 pM rotenon gedurende 3 dagen een lichte daling van het aantal vliegen in het bovenste gedeelte en een lichte toename va.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In deze studie beschrijven we twee procedures voor het meten van zowel de lange-termijn spontane motoriek en korte-termijn-schrik veroorzaakte motoriek in een-rotenone geïnduceerde Drosophila model van de ziekte van Parkinson. Men kan ook maatregel die locomotie kenmerken vliegen blootstelling aan andere farmacologische middelen bekend model Parkinson bijvoorbeeld paraquat 14, genetische modellen van de ziekte van Parkinson bijvoorbeeld alfa-synucleine mutanten 15 en ande.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs willen graag Qiuli Wang, Taal Resource Center, Colby College bedanken voor technische bijstand met videoverwerking en Eric Thomas, afdeling muziek, Colby College, voor het verstrekken van de achtergrondmuziek. Dit project werd ondersteund door subsidies van het National Center for Research Resources, INBRE (P20RR016463-12), het Nationaal Instituut voor de General Medical Sciences (P20 GM103423-12), Nationals Institutes of Health and Science Division Grant, Colby College (STA). JL en LWM werden ondersteund door subsidies van de Zomer Scholar Fonds, Colby College.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Standard narrow vialsGenesee Scientific32-120
RotenoneSigmaR8875Bewaar in de vriezer, maak vers voor elk experiment
Dimethyl Sulfoxide (DMSO)SigmaD8418Solvent voor rotenone
Instant Drosophila mediumCarolina Biological Formule 4-24
Drosophila activity monitor (DAM)TrikineticsDAM2trikinetics.com
DAM tubesTrikineticsTubes 5 X 65 mm
Recept voor Rotenone + voedsel (125 mM dosis)Maak 62,5 mM rotenone stamoplossing in DMSO door 25 mg rotenone op te lossen in 1 ml DMSO; Voor 125 mM dosis, voeg 10 mM rotenone stam in DMSO toe aan 5 ml water.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Olanow, C. W., Tatton, W. G. Etiology and pathogenesis of Parkinson's disease. Annual review of neuroscience. 22, 123-144 (1999).
  2. Coulom, H., Birman, S. Chronic exposure to rotenone mod....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Locomotie bij DrosophilaRotenonmodelSchrikreactie assaySpontane LocomotieDubbelbuisapparaatDrosophila activiteitsmonitorKoolstofdioxidesedatieRotenon gesupplementeerd voederGeotactische ResponsLocomotiedefecten

Gerelateerde artikelen