Methodenartikel
Basistechnieken en verfijningen van freeze-fractuur verwerking van biologische monsters en nanomaterialen voor onderzoek door transmissie elektronenmicroscopie worden beschreven. Deze techniek is een aangewezen methode voor het onthullen ultrastructureel functies en specialisaties van biologische membranen en voor het verkrijgen van Ultrastructureel dimensionale en ruimtelijke gegevens in materials sciences en nanotechnologie producten.
Freeze-fractuur / vries-ets beschrijft een proces waarbij exemplaren, meestal biologisch of nanomateriaal in de natuur, zijn bevroren, gebroken, en gerepliceerd naar een carbon / platinum "cast" bestemd voor onderzoek door transmissie elektronenmicroscopie genereren. Specimens worden onderworpen aan ultrasnelle vriessnelheden, vaak in aanwezigheid van cryoprotectieve middelen voor ijskristalvorming beperken latere breken van het model in vloeibare stikstof gekoelde temperaturen onder hoog vacuüm. De resulterende gebroken oppervlak wordt gerepliceerd en gestabiliseerd door verdamping van koolstof en platina vanuit een hoek die oppervlak verleent driedimensionale detail aan de cast. Deze techniek is bijzonder verhelderend voor het onderzoek van de celmembranen en hun specialisaties bewezen en heeft aanzienlijk bijgedragen aan het begrip van cellulaire vorm aan verwante celfunctie. In dit rapport geven we een overzicht van de eisen instrument en technisch protocol voor het uitvoeren vanbevriezen-breuk, de bijbehorende nomenclatuur en de kenmerken van breukvlakken, variaties op de klassieke procedure en criteria voor de interpretatie van de freeze-fractuur beelden. Deze techniek is op grote schaal gebruikt voor ultrastructurele onderzoek in veel gebieden van de celbiologie en houdt belofte als een opkomende beeldvormende techniek voor moleculaire, nanotechnologie en materiaalkunde studies.
Het concept en de praktische toepassing van freeze-fractuur verwerking van biologische monsters werd een eeuw geleden geïntroduceerd door Steere 1 meer dan de helft. De vroege apparaat toegeëigend ongelijksoortige onderdelen in een werkende zelfstandige unit 1. De oorspronkelijke inrichting werd aangepast en verfijnd tot commercieel beschikbare instrumenten om de kritische behoefte aan externe manipulatie, het onderhoud van hoog vacuüm tegemoet te komen, en de verdamping van koolstof en metalen om een replica geschikt is voor onderzoek door transmissie elektronenmicroscopie (Figuur 1 en Figuur produceren
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
1 Voorbereiding van biologische monsters voor Freeze-fractuur / Freeze-etch
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Het belangrijkste uitgangspunt van freeze-fractuur afbeelding interpretatie is dat breukvlakken passeren de lipide dubbellaag membranen verlenen twee fractuur gezichten, riep volgens afspraak de PF-face (plasma fractuur-face) en EF-face (extracellulaire fractuur-face) (Figuur 3). De PF-face is helft van de membraan lipide dubbellaag grenzend aan het cytoplasma van de cel en de EF-gezicht helft van de membraan lipide dubbellaag naast het extracellulaire milieu. De vries-breuk techniek is bijzonder bruikb.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
In de jaren na de invoering ervan en de commerciële beschikbaarheid, freeze-fractuur / etch procedures werden op grote schaal gebruikt voor het onderzoeken van de biologische membraan structuur. Inderdaad, de beste perspectieven van een aantal van de structurele specialisaties van membranen is verkregen in freeze-fractuur / etch voorbereidingen. Deze studies niet alleen bijdragen tot begrip van de structurele organisatie van de membranen maar ook ontvangen inzichten in structuur en functie zijn verbonden.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteur heeft niets te onthullen.
Deze presentatie werd ondersteund door een Clinical Innovator Award aan JLC van het Flight Attendant Medical Research Institute en door de United States Environmental Protection Agency. Hoewel het onderzoek dat in dit artikel wordt beschreven geheel of gedeeltelijk is gefinancierd door de United States Environmental Protection Agency via een samenwerkingsovereenkomst CR83346301 met het Center for Environmental Medicine, Asthma, and Lung Biology aan de Universiteit van North Carolina in Chapel Hill, is het niet onderworpen aan de vereiste collegiale en beleidsbeoordeling van de Agency en weerspiegelt daarom niet noodzakelijkerwijs de standpunten van de Agency en er ma....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Balzers Freeze-fracture/freeze-etch plant | Balzers | BAF400T | |
| Standaard buffers | diverse leveranciers | ||
| Standaard aldehyde fixatiemiddelen | diverse leveranciers | ||
| Natriumdichromaat | diverse leveranciers | ||
| Zwavelzuur | diverse leveranciers | ||
| Weggebruiksartikelen voor Platinum/Carbon verdamping | Technotrade International | ||
| Vloeibare stikstof | diverse leveranciers | ||
| Propaan | diverse leveranciers | ||
| Weggebruiksartikelen voor elektronenmicroscopie | Electron Microscopy Sciences | ||
| Transmissie-elektronenmicroscoop | Carl Zeiss Inc. |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen