Methodenartikel

Multimodale optische microscopie methoden Reveal Poliep Tissue morfologie en structuur in het Caribisch gebied Reef Building Koralen

DOI:

10.3791/51824

⸱

5 september 2014

 ,  ,  , 
1Institute for Genomic Biology, University of Illinois at Urbana-Champaign, 2Department of Geology, University of Illinois at Urbana-Champaign, 3Department of Microbiology, University of Illinois at Urbana-Champaign

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een geïntegreerde suite van beeldvormende technieken is toegepast op poliep morfologie en weefselstructuur in het Caribisch gebied koralen Montastraea annularis en M. te bepalen faveolata. Fluorescentie, serieblok gezicht, en twee-foton confocale laser scanning microscopie hebben lobbige structuur, poliep muren, en de geschatte chromatophore en zoöxanthellen dichtheid en uitkeringen geïdentificeerd.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een geïntegreerde suite van beeldvormende technieken is toegepast op de driedimensionale (3D) morfologie en celstructuur van poliep weefsel omvattende het Caribische rif vormende koralen Montastraea annularis en M. bepalen faveolata. Deze benaderingen omvatten fluorescentiemicroscopie (FM), serieblok gezicht imaging (SBFI), en twee-foton confocale laser scanning microscopie (TPLSM). SBFI biedt deep tissue imaging na lichamelijke snijden; worden de details van het oppervlak weefsel textuur en 3D-visualisatie om weefsel diepten van meer dan 2 mm. Complementaire FM en TPLSM opbrengst ultra-hoge resolutie beelden van het weefsel cellulaire structuur. Resultaten zijn: (1) geïdentificeerd eerder gemeld lobbige weefsel morfologie op de buitenwand van de individuele koraalpoliepen en (2) creëerde het eerste oppervlak kaarten van de 3D ​​distributie en weefsel dichtheid van chromatoforen en algen-achtige dinoflagellaten zooxanthellae endosymbionts. Spectrale absorptie erwtks van 500 nm en 675 nm, respectievelijk, suggereren dat M. annularis en M. faveolata bevatten gelijkaardige soorten chlorofyl en chromatophores. Echter, M. annularis en M. faveolata vertonen grote verschillen in dichtheid en 3D weefsel verdeling van deze belangrijke cellulaire componenten. Deze studie gericht op beeldvorming methoden geeft aan dat SBFI is uiterst nuttig voor de analyse van grote mm-schaal monsters van ontkalkt koraal weefsels. Gratis FM en TPLSM onthullen subtiele submillimeter schaal veranderingen in de cellulaire distributie en dichtheid in nondecalcified koraal weefselmonsters. De TPLSM techniek verschaft: (1) minimaal invasieve monstervoorbereiding, (2) superieure optische sectie vermogen, en (3) minimaal licht absorptie en verstrooiing, terwijl het toelaat deep tissue imaging.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opwarming van de aarde en de bijbehorende veranderingen in het milieu zijn directe gevolgen voor de gezondheid en de verspreiding van tropische mariene koralen 1-4. Meerdere effecten worden waargenomen, waaronder verbleking van koraal en de opkomst van infectieziekten 5-6. Echter, meer nauwkeurige voorspelling van de toekomstige koraal antwoord op deze bedreigingen voor het milieu vereisen dat een histologische "basislijn" worden opgericht, waardoor weefsel morfologie en cel samenstelling en distributie definieert voor "ogenschijnlijk gezonde" koralen. Op zijn beurt, "impact" koralen dan kwantitatief worden vergeleken. Voorts dient deze basislijn worden vastgesteld voor ogenschijnlijk gezonde koralen onder een scala van milieuomstandigheden, zodat "gezonde reactie" kan ook worden gemeten over milieu-gradiënten. Als een eerste stap in de richting van het opstellen van deze basislijn, heeft een hoge resolutie 3D-studie is uitgevoerd van hoe ogenschijnlijk gezonde koraalpoliep weefselmorfologie en cellulaire samenstelling reageert op toename van de waterdiepte (WD) en de bijbehorende afname van zonlicht instraling. De resultaten kunnen dan gebruikt worden om een ​​uitgebreidere mechanistisch begrip van koraal aanpassing te bepalen en om inzicht in koraal-symbiont ontwikkeling en verbetering van light harvesting krijgen.

Steenkoralen (Scleractinia) zijn koloniale mariene ongewervelde dieren die gastheer spelen om een complexe verzameling van andere micro-organismen, gezamenlijk aangeduid als het koraal holobiont 7-10. Het onderzoek dat in de huidige studie tracht een suite van geavanceerde imaging technologieën gebruiken om tegelijkertijd veranderingen met toenemende waterdiepte in het weefsel pigmenten en symbiotische zoöxanthellen van ogenschijnlijk gezonde gastheer koralen volgen. Dit zal de nodige vergelijkende weefselcel "basislijn" op te richten over een bathymetrische gradiënt voor ogenschijnlijk gezonde koralen en fungeren als indicatoren van koraal heaLTH 10. Koraal pigmenten, genaamd chromatoforen, handelen om te absorberen, te reflecteren, scatter, breken, afbuigen of anderszins interfereren met de invallende zonnestraling 11. De zoöxanthellen-chromatophore endosymbiotic relatie is de co-evolutie van strategisch gunstige light-harvesting optimalisatie en groei van het skelet strategieën, evenals trofische plasticiteit (het verschuiven voerstrategieën heen-en-weer van de autotrofe tot heterotrofie) voor het koraal dier 12 ingeschakeld.

De zuidelijke Caribische eiland natie van Curaçao (voorheen onderdeel van de Nederlandse Antillen) ligt op ongeveer 65 km ten noorden van Venezuela in de oost-west trending Aruba-La Blanquilla archipel (figuur 1A). De 70 km lange zuidkust van Curaçao bevat een doorlopende moderne en Mioceen-Plioceen-Pleistoceen-Holoceen oude fringing koraalrif darmkanaal 13,14. Gemiddelde jaarlijkse SST op Curaçao varieert van ongeveer 3 ° C eenlijks, variërend van een minimum van 26 ° C in eind januari tot een maximum van 29 ° C in het begin van september, met een gemiddelde jaartemperatuur van 27,5 ± 0,5 ° C (NOAA SST datasets 2000-2010). Het koraalrif bij Playa Kalki (12 ° 22'31.63 "N, 69 ° 09'29.62" W), liggen in de buurt van de noordwestelijke puntje van Curaçao (figuur 1A), werd gekozen voor bemonstering, omdat het eerder goed bestudeerde en het is geweest mariene ecosysteem op deze locatie wordt badend in verse nonpolluted zeewater 7,15-19. . Twee nauwverwante scleractinian koralen, M. annularis en M faveolata, werden in deze studie gekozen voor experimenten en analyses omdat elke species: (1) vertoont duidelijk verschillend en overlappende bathymetrische verdelingen op het rif tract ten opzichte van de plank te maken met het geassocieerd carbonaat sedimentaire afzettingsmilieus (M. annularis range = 0-10 m WD; M. faveolatarange = 10-20 m WD 20; Figuren 1B, 2A en 2B); (2) is een veel voorkomende koraalrif kader bouwer gedurende de Caribische Zee 21; en (3) heeft een goed bestudeerde ecologische, fysiologische, en evolutionaire relaties 22.

Veld bemonstering voor de huidige studie werd uitgevoerd met behulp van standaard duiken technieken kust van Playa Kalki op Curaçao. Een ondiepe-tot-diep water bathymetrische transect werd vastgesteld dat liep over de plank, op de plank breken, en in het diepe water voorgrond rif omgevingen. Ogenschijnlijk gezonde koralen werden vervolgens geïdentificeerd voor de bemonstering langs deze bathymetrische transect, waaronder: (1) drie individuele ~ 1 m diameter koraal hoofden van M. annularis, die allemaal op 5 m waterdiepte (WD); en (2) drie individuele ~ 1 m diameter koraal hoofden van M. faveolata, die allemaal op 12 m van WD. Fotosynthetische actieve straling (PAR) werd gemeten als 33-36% PAR op 5 m WD en 18-22% PAR op 10 m van WD. Bemonstering werd uitgevoerd in januari wanneer de SST was 26 ° C aan de waterdieptes van zowel de 5 m en 12 m. Elk van deze zes koralen werd bemonsterd in drievoud bij equivalente ruimtelijke posities (dwz., Ongeveer 45 ° noorderbreedte op elk van de zes halfronde koralen). Elk individueel monster bestond uit een 2,5 cm diameter koraal weefsel-skelet kern biopsie die werd verzameld met een gereinigd boog punch. Drie koraal weefsel-skelet biopten werden bemonsterd op standaard SCUBA met handschoenen uit elk van de koralen (9 van M. annularis kolonies op 5 m WD en 9 van M. faveolata op 12 m WD). Onmiddellijk na verzameling op diepte, werd elke biopsie kernmonster in een steriele 50 ml polypropyleen centrifugebuis gebracht, schroefdop afgesloten en teruggebracht naar de oppervlakte. Het zeewater werd gedecanteerd van elke centrifugebuis en elk monster werd vervolgens ondergedompeld biopsie, opgeslagen en in 4% paraformaldehyde getransporteerd.

SBFI imaging eerder is uitgevoerd op diverse biologische monsters, waaronder hele hersenen en het gehele hart menselijke weefsels intact muizenembryo's, zebravis embryo, en meerdere soorten dieren monsters met intacte botten 23-30. De meeste van deze studies gebruikt optische / lichtmicroscopie met ofwel fluorescentie of heldere veld technieken. Echter, zijn de studies uitgevoerd in ultra-hoge vergrotingen behulp van scanning electron serieblok gezicht beeldvorming in het verleden 31. In de onderhavige studie werd een gemodificeerd SBFI protocol ontwikkeld voor en toegepast op koralen voor de eerste keer. Omdat M. annularis en M. faveolata koraalpoliepen zijn 1-2 mm in dikte, zou geen van de routine lichtmicroscopie technieken kunnen doordringen van de gehele dikte van koraalpoliep weefsel. Daarom hebben we SBFI monstervoorbereiding protocol speciaal ontworpen voor koraal monsters. Daarnaast hebben we op maat ontworpen een stereomicroscoop houder, Die gemotoriseerd bewegen in zowel x en y richtingen. Deze inrichting neemt beelden van het blok van het monster dan verzamelen de gedeelten met bijvoorbeeld een microtoom voor de microscoop. We introduceerden ook een ander niet-lineaire optische twee-foton microscopische techniek op de foto dezelfde koraalpoliepen over de hele dikte van het koraal weefsel. Dit overwint de door SBFI gesteld wat ontkalking en de mogelijkheid van veranderingen in weefsel morfologie en volume (krimp) die kan worden geïnduceerd door monstervoorbereiding (dehydratie) en verwerkingsprotocollen beperkingen. Bovendien werden de emissie-profielen uit de koralen spectraal opgelost om hun piek uitstoot en variaties tussen de chromatoforen en de fotosynthetische zoöxanthellen identificeren. Deze resultaten werden in het kader van de methode en de individuele voordelen inzake acquisitie tijd, analysetijd en het vermogen om fijne structurele details lossen zonder afbreuk str geëvalueerductural integriteit van het koraal weefsel.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

OPMERKING: Reagentia om voorbereid te zijn Serial Block Gezicht Imaging van Coral Monsters

1 Preinfiltration Wax

  1. Smelt in een bekerglas 3,6 g stearine flakes. Meng goed op een hete plaat (60-70 ° C).
  2. Voeg 400 mg van Sudan IV (wax achtergrond fluorescentie te minimaliseren). Meng goed en wacht tot er een rode doorschijnende oplossing wordt bereikt.
  3. Voeg 96 ml hete gesmolten paraffine (100%) en meng goed.

1.2) Embedding Wax

  1. Smelt 7,2 g stearine flakes in een bekerglas en meng goed op een hete plaat (60-70 ° C).
  2. Voeg 0,8 g van Sudan IV. Meng goed en wacht tot er een rode doorschijnende oplossing wordt bereikt.
  3. Voeg paraffine granules (162 g) en meng tot paraffine smelt volledig.
  4. Voeg 30 g witte granulaire Vybar en smelt volledig in dezelfde beker; eenmaal gesmolten, meng.
  5. Losjes sluit de glazen fles met een deksel. Plaats de glazen fles in een 60 ° C convectie oven de ingrediënten in een vloeibare toestand te houden. Voeren alle infiltraties in deze oven.
  6. Splits het totale volume van de 200 ml rode lak in twee glazen flessen van elk 100 ml. Gebruik een aliquot voor infiltratie en de andere voor de definitieve inbedding.

1.3) Embedding Coral Tissues voor Serial Block Gezicht Imaging

  1. Was de koraalpoliepen in het veld (SI Video 1) verzameld en opgeslagen (3-6 maanden bij 4-5 ° C in paraformaldehyde) in fosfaat gebufferde zoutoplossing (3x 5 min) en ontkalken wanneer je klaar bent om te worden afgebeeld. Ontkalken de poliepen in Excal oplossing gedurende 24 uur of totdat de poliepen zijn totaal verstoken van CaCO 3. Incubeer verscheidene ontkalkte koraalpoliepen als een blok in een 25, 50, 75, en 100% ethanol serie, gevolgd door 1x xyleen vervanging voor de monsters dehydrateren.
  2. Het bewerkte poliepen in een voorverwarmde oven 65 ° C met 100% xyleen vervangen. Incubeer gedurende 30 minuten twee keer per changing tot verse oplossing. Richt de poliepen zodanig dat de bovenkant van de poliepen naar beneden en de bovenzijde zo vlak mogelijk.
  3. Maak oplossingen van 2: 1, 1: 1 en 1: 2, xyleen vervangen en preinfiltration was (stap 1.1) in 50 ml Falcon buizen.
  4. Incubeer koraalpoliepen met deze drie toenemende concentraties van preinfiltration was, gevolgd door 3x incubatie in 100% preinfiltration wax voor 30-60 minuten per keer.
  5. Opmerking: Afhankelijk van de dikte van de monsters, stappen 1.3.1-1.3.5 kan worden verhoogd met een langere periode van tijd.
  6. Beweeg de monsters naar het inbedden van wax (zie stap 1.2.6) na 3x incubatie in 100% preinfiltration wax.
  7. Verwijder de inbedding was na 30 min. Vervang met verse inbedding was en verder incuberen gedurende ten minste 4 uur bij 65 ° C.

1.4) Inbedding in Red Wax

  1. 's Het blok (de roestvrijstalen plaat waar de witte was geplaatst en waar bovenop het sample wordt geplaatst). Dit is noodzakelijk omdat zodra ingebed in de was, zal de locatie van het monster onzichtbaar naarmate de inbedding rode wax is ondoorzichtig.
  2. Plaats kleine druppels hoog smeltpunt was rond de nieuwe voorverwarmde roestvrijstalen inbedding vorm en laat afkoelen. Giet een kleine hoeveelheid vers gesmolten was inbedden van tweede houder zoals in stap 1.2.6.
  3. Plaats de koraalpoliep naar beneden snel over de witte was stip, plaats dan een plastic monster houder op de roestvrijstalen plaat en giet meer inbedding wax zodat de was komt aan het oppervlak van de kunststof mal.
  4. Neem de volledige setup van de 65 ° C oven en laat hem afkoelen op een bankje of een koel oppervlak tot de was volledig verhardt.
  5. Dit kan 6 uur tot dag of twee duren. Plaats het blok gedroogd in een koelkast bij 4 ° C, beschermd tegen licht, voor langdurige opslag.

1.5) Snijden in de Serial Block Gezicht Setup

  1. Trim het blok en snijd 1 micrometer secties met behulp van een microtoom. Niet verzamelen de delen als ze als poeder zal worden. Vergeet niet, we zijn het afbeelden alleen het blok gezicht. Het monster wordt als de witte was begint te verdwijnen.
  2. Maak foto's van de gladde blok gezicht dat het monster telkens een sectie wordt verwijderd bevat. Ga door tot de koraalpoliep verdwijnt in SI Video 2.
  3. Opnemen / vastleggen van de beelden met een monochrome camera met behulp van een fluorescerende FITC filter te halen de auto-fluorescentie van de chromatoforen / koraalpoliep. Afbeelding 3-4 ontkalkt kernen van elke soort.

2 Imaging Koralen Onder twee-foton fluorescentie microscopie

  1. Fix koraalpoliep kernen, elk met ongeveer 10-12 poliepen ongeveer een centimeter in diameter, in 4% paraformaldehyde op de plaats van inzameling (kust), zodra ze worden geoogst onder water.
  2. Houd monsters bij 4 ° C tot beeldvorming. Gewassen kernen zijn in th geplaatste dezelfde oplossing ondersteboven in een afdekglas onderste schaal (0,17 mm dik).
  3. Met behulp van een twee foton laser bij 780 nm excitatie, afbeelding 3-4 poliepen op twee verschillende vergrotingen (digitale zoom) met behulp van een 10X (0,3 NA) doelstelling. De koraalpoliep vorm en hoogte varieert tussen de monsters (meestal 1-2 mm) en de beeldvorming diepte wordt ook beperkt door werkafstand van de doelstelling van de beeldvorming.
  4. Gebruik de modus tegel scan ongeveer 25-100 (5 x 5 of 10 x 10 tegels) beelden per focal plane in xy en 50-100 beelden via de z-as te verzamelen op 10 of 20 pm interval, in totaal zo'n 5.000-10.000 images / koraalpoliep.
  5. Afbeelding 3-4 poliep gebieden om een ​​kern en koraalsoorten te vertegenwoordigen. OPMERKING: Beeldacquisitie varieert tussen 2-5 uur / poliep gebied.
  6. Bewaar alle beelden in raw data-formaat op de harde schijf van het systeem als LSM 5 Render 3D op een 3D-beeld analyse en rendering software.

3 3D Volume Rendering en Visualization van SBFI en twee-foton Spectral Fluorescentie Gegevens

  1. Gewas de 2D-gegevens om de bestandsgrootte te verkleinen door zich te richten op een enkele poliep met het plein bijsnijden in het programma en compileren als een tiff-bestand (het verminderen van de bestandsgrootte ook door het bestand in 8 bit-formaat) in de aanschaf van software.
  2. Open de verzamelde bestanden van de SBFI data (in stap 1.5.1 verzameld) of de betegelde meerdere z-stapels van twee foton optische secties (in stap 2.1.4 verzameld) in het programma Imaris Overtref module onder de volume-algoritme.
  3. Projecteer de SBFI gegevens weergegeven in 3D met behulp van een schaduw projectie. Maak een isosurface modus waarbij de voxels worden thresholded aan een vast oppervlak patroon (SI Video 3) te creëren.
  4. Visualiseer de 3D-projecties met behulp van een clipping plane algoritme op xy, xz en yz orthogonale modi om 3D-structuur en de vorm van koralen te onthullen.
  5. Animeren de projecties met behulp van een key frame animatie module in dezelfde Imaris programma (SI Videos 3-7).
  6. Genereer videobestanden op 5% compressie en het genereren van een filmclips in avi-formaat met behulp van volume (SI's 4 en 6), 3D en isosurface modaliteiten (SI's 5 en 7).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een op maat ontworpen SBFI apparaat (speciaal gefabriceerd voor de huidige studie; Figuur 3) produceerde de eerste gedetailleerde 3D ​​digitale hoogte kaarten (DEMs) van het buitenste oppervlak structuur en morfologie van de M. annularis en M. faveolature koraalpoliepen (figuur 4 en SI's 1-2). Dit leverde beelden van eerder beschreven gestapelde lobben van koraal weefsel concentrisch naar buiten straalt vanuit het midden van elke poliep (fi...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Koraalrif onderzoek is een sterk interdisciplinair onderzoek inspanning, waarbij de analyse van de gelijktijdige fysieke, chemische en biologische verschijnselen die actief zijn in het mariene milieu. De studie van complexe ecosystemen van het koraalrif is daarom het beste binnen een 'Powers of Ten' contextueel kader (figuur 10). Deze grafische compilatie illustreert dat het koraal ecosysteem omvat een breed scala van ruimtelijke dimensies (10 -9 tot 10 5 m). Bovendien is d...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren geen belangenconflict te hebben.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wij danken Donna Epps, histoloog aan het Institute for Genomic Biology, University of Illinois Urbana-Champaign (UIUC), voor haar bekwame technische assistentie bij monstervoorbereiding en doorsnijden. Dit werk werd ondersteund door een onderzoekssubsidie aan B.W. Fouke van het Office of Naval Research (N00014-00-1-0609). Daarnaast ontving C.A.H. Miller subsidies van de UIUC Department of Geology Wanless Fellowship, UIUC Department of Geology Leighton fund en UIUC Department of Geology Roscoe Jackson veldwerkfonds. De interpretaties gepresenteerd in dit manuscript zijn die van de auteurs en vertegenwoordigen niet noodzakelijk die van de financierende instellingen. We danken ook het Caribbean Research and Management of Biodiversity (Carmabi) laboratorium op Curaçao voor hun steun en samenwerking bij het verzamelen van de koraalweefselbiopsiemonsters. We danken Claudia Lutz, IGB Media Communication Specialist voor haar bekwame taalcorrectie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Coral Tissue Skeleton2.5 cm Biopsie uit natuurlijke habitat
Arch Punch Coring DeviceC.S. Osborne and CompanyNo. 149Voor het verzamelen van koraalbiopsieën
ParaformaldehydeElectron Microscopy SciencesRT 1570016% Voorverdund
Histoclear/Safeclear IIElectron Microscopy SciencesRT 64111-04Niet-toxische alternatief voor Xyleen, Dehydratie en Deparafinisering
Xyleen en EthanolFisher ScientificDehydratie
ParaffinewasRichard Allen ScientificType H REF 8338Infiltratieoplossing
VybarThe Candle MakerOnderdeel van rode was
StearineThe Candle MakerOnderdeel van rode was
Sudan IVFisher ChemicalS667-25Rode was - Opake achtergrond
Wheat Germ Agglutinin (WGA)Life TechnologiesW32466Voor het labelen van korale slijmvlies
Prolong GoldLife TechnologiesP36095Anti-vervagende montagemedia
Fluoro DishWorld Precision InstrumentsFD-35-100Voor twee-foton beeldvorming
XY Motor, Driver en ControllerLin Engineering211-13-01R0, R325, R256-ROXY Translationele beweging
Hot PlateCorningDC-220Het smelten van alle was
ConvectieovenYamatoDX-600Infiltratie en inbedding
WeefselprocessorLeicaASP 300Dehydratie, Infiltratie
MicrotoomLeicaRM2055Wegwerpmessen
StereomicroscoopCarl ZeissStereolumar V 121.5x (30 mm WD) Objectief
Fluorescentiemicroscoop met ApoTomeCarl ZeissAxiovert M 200, ApoTome I SysteemBeeldvorming van dunne sectie van een poliep: Zooxanthellae
Axiocam cameraCarl ZeissMRmMonochrome camera 1388x1040 pixels
Axiovision SoftwareCarl ZeissVersie 4.8Beeldverwervingsprogramma
Twee-foton laserSpectraphysicsMaitai eHP, gepulseerde laser (70 fs)Met DeepSee module
LaserscanningmicroscoopCarl ZeissLSM 710 met Spectraal Detector34 kanaals PMT detectie
Zen SoftwareCarl Zeiss2010 of hogervoor twee-foton en spectraal beeldverwerving
Imaris Suite SoftwareBitplane, Inc.,Versie 7.0 of hoger3D Volume, Iso-oppervlakte rendering, Visualisatie
```

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Climate Change 2013: The Physical Science Basis. Contribution of Working Group I to the Fifth Assessment Report of the Intergovernmental Panel on Climate Change. Stocker, T. F., Qin, D., Plattner, G. -K., Tignor, M., Allen, S. K., Boschung, J., Nauels, A., Xia, Y., Bex, V., Midgley, P. M. , Cambridge University Press. 1535(2013).
  2. Buddemeir, R. W., Kleypas, J. A., Aronson, R. B. Coral Reefs & Global Climate Change: Potential Contributions of Climate Change to Stresses on Coral Reef Ecosystems). 46, Pew Center on Global Climate Change. (2004).
  3. Wilkinson, C. Status of coral reefs of the world. , Australian Institute of Marine Science. Townsville. 1-2 (2004).
  4. Lough, J. M. Climate records from corals. WIREs Clim. Chang. 1, 318-331 (2010).
  5. Harvell, C. D., et al. Tropical Archaea: diversity associated with the surface microlayer of corals. Mar. Ecol. Prog. Ser. 273, 81-88 (2004).
  6. Coral Health and Disease. Rosenberg, E., Loya, Y. , Springer. (2004).
  7. Rohwer, F., Breitbart, M., Jara, J., Azam, F., Knowlton, N. Diversity of bacteria associated with the Caribbean coral Montastrea franksi. Coral Reefs. 20, 85-91 (2001).
  8. Frias-Lopez, J., Zerkle, A. L., Bonheyo, G. T., Fouke, B. W. Partitioning of bacterial communities between seawater and healthy, black band diseased, and dead coral surfaces. Appl. Environ. Microbiol. 68, 2214-2228 (2002).
  9. Stanley, G. D. Jr The evolution of modern corals and their early history. Earth Sci. Rev. 60, 195-225 (2003).
  10. Piggot, A. M., Fouke, B. W., Sivaguru, M., Sanford, R., Gaskins, H. R. Change in zooxanthellae and mucocyte tissue density as an adaptive response to environmental stress by the coral Montastraea annularis. Mar. Biol. 156, 2379-2389 (2009).
  11. Stanley, G. D. Jr Photosymbiosis and the evolution of modern coral reefs. Evolution. 1, 3(2006).
  12. Gordon, B. R., Leggat, W. Symbiodinium—Invertebrate Symbioses and the Role of Metabolomics. Mar. Drugs. 8, 2546-2568 (2010).
  13. Schlichter, D., Weber, W., Fricke, H. W. A chromatophore system in the hermatypic, deep-water coral Leptoseris fragilis (Anthozoa: Hexacorallia). Marine Biology. 89, 143-147 (1994).
  14. Fouke, B. W., Meyers, W. J., Hanson, G. N., Beets, C. J. Chronostratigraphy and dolomitization of the Seroe Domi Formation, Curacao, Netherlands Antilles. Facies. 35, 293-320 (1996).
  15. Frias-Lopez, J., Bonheyo, G. T., Jin, Q., Fouke, B. W. Cyanobacteria associated with coral black band disease in Caribbean and Indo-Pacific reefs. Appl. Environ. Microbiol. 69, 2409-2413 (2003).
  16. Frias-Lopez, J., Klaus, J., Bonheyo, G. T., Fouke, B. W. The bacterial community associated with black band disease in corals. Appl. Environ. Microbiol. 70, 5055-5062 (2004).
  17. Frias-Lopez, J., Bonheyo, G. T., Fouke, B. W. Identification of differential gene expression in bacteria associated with coral black band disease using RNA-arbitrarily primed PCR. Appl. Environ. Microbiol. 70, 3687-3694 (2004).
  18. Klaus, J. S., Frias-Lopez, J., Bonheyo, G. T., Heikoop, J. M., Fouke, B. W. Bacterial communities inhabiting the healthy tissues of two Caribbean reef corals: interspecific and spatial variation. Coral Reefs. 24, 129-137 (2005).
  19. Klaus, J., Janse, I., Sandford, R., Fouke, B. W. Coral microbial communities, zooxanthellae, and mucus along gradients of seawater depth and coastal pollution. Environ. Microbiol. 9, 1291-1305 (2007).
  20. van Duyl, F. C. Atlas of the living reefs of Curacao and Bonaire (Netherlands Antilles). , Diss. Vrije Universiteit. Amsterdam. (1985).
  21. Carricart-Ganivet, J. P. Sea surface temperature and the growth of the West Atlantic reef building coral Montastraea annularis. J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 302, 249-260 (2004).
  22. Barnes, D. J., Lough, J. M. Coral skeletons: Storage and recovery of environmental information. Global Chang. Biol. 2, 569-582 (1996).
  23. Mohun, T. J., Weninger, W. J. Generation of volume data by episcopic three-dimensional imaging of embryos. Cold Spring Harbor Protocols. 6, 069591(2012).
  24. Mohun, T. J., Weninger, W. J. Imaging heart development using high-resolution episcopic microscopy. Curr. Opin. Genet. Dev. 21, 573-578 (2011).
  25. Mohun, T. J., Weninger, W. J. Embedding embryos for episcopic fluorescence image capturing (EFIC). Cold Spring Harb. Protoc. 6, 069575(2012).
  26. Rosenthal, J., et al. Rapid high resolution three dimensional reconstruction of embryos with episcopic fluorescence image capture. Birth Defects Res. C: Embryo Today: Rev. 72, 213-223 (2004).
  27. Slyfield, C. R., et al. Three-dimensional surface texture visualization of bone tissue through epifluorescence-based serial block face imaging. J. Microsc. 236, 52-59 (2009).
  28. Weninger, W., Mohun, T. Phenotyping transgenic embryos: a rapid 3-D screening method based on episcopic fluorescence image capturing. Nat. Genet. 30, 59-65 (2001).
  29. Weninger, W., Mohun, T. Three-dimensional analysis of molecular signals with episcopic imaging techniques. Reporter Genes. , Humana Press. 35-46 (2007).
  30. Gerneke, D. A., et al. Surface imaging microscopy using an ultramiller for large volume 3D reconstruction of wax-and resin-embedded tissues. Microsc. Res. Tech. 70, 886-894 (2007).
  31. Denk, W., Horstmann, H. Serial block-face scanning electron microscopy to reconstruct three-dimensional tissue nanostructure. PLoS Biol. 2, e329(2004).
  32. Salih, A., Larkum, A., Cox, G., Kühl, M., Hoegh-Guldberg, O. Fluorescent pigments in corals are photoprotective. Nature. 408, 850-853 (2000).
  33. Sivaguru, M., Mander, L., Fried, G., Punyasena, S. W. Capturing the surface texture and shape of pollen: A comparison of microscopy techniques. PloS one. 7 (6), (2012).
  34. Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat. Methods. 2, 932-940 (2005).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Beeldvorming van koraalpoliepenserial block face imagingtweefotonmicroscopiefluorescentiemicroscopieanalyse van weefselmorfologiedistributie van chromatoforenlokalisatie van zooxanthellengedecalcificeerd koraalweefselinbeddingstechniek met wasmicrotoomsectie

Gerelateerde artikelen