Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4

16.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/52533

⸱

21 april 2015

 ,  , 
1Center for Gastrointestinal Biology and Disease, University of North Carolina at Chapel Hill, 2Department of Microbiology and Immunology, University of North Carolina at Chapel Hill, 3Department of Genetics, University of North Carolina at Chapel Hill, 4Curriculum in Genetics and Molecular Biology, University of North Carolina at Chapel Hill

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol om colonontsteking bij muizen te induceren door adoptieve overdracht van syngeneïsche CD4+CD45RBhigh T-cellen naar ontvangers zonder T- en B-cellen. Klinische en histopathologische kenmerken bootsen inflammatoire darmziekten bij mensen na. Deze methode maakt de studie van de initiatie van colonontsteking en de progressie van de ziekte mogelijk.

Samenvatting

Er zijn veel verschillende dierlijke modellen voor het bestuderen van de pathogenese van menselijke inflammatoire darmziekten (IBD), elk met zijn eigen voor- en nadelen. We beschrijven hier een experimentele colitis model dat wordt geïnitieerd door adoptieve overdracht van syngenetische milt CD4 + CD45RB- hoge T-cellen in de T- en B-cel deficiënte muizen ontvanger. De CD4 + CD45RB high T-celpopulatie die grotendeels uit naïeve effectorcellen kan induceren chronische darmontsteking, sterk lijken belangrijke aspecten van menselijke IBD. Deze methode kan worden gemanipuleerd om aspecten van de ziekte ontstaan ​​en de progressie bestuderen. Daarnaast kan het worden gebruikt om de functie van aangeboren, adaptief en regelgevende immuuncel populaties en de rol van milieurisico's, dwz de microbiota in intestinale inflammatie bestuderen. In dit artikel tonen we de methode voor het induceren van colitis met een stap-voor-stap protocol. Dit includes een video demonstratie van de belangrijkste technische aspecten die nodig zijn om succesvol te ontwikkelen dit muizenmodel van experimentele colitis voor onderzoeksdoeleinden.

Inleiding

De inflammatoire darmziekten (IBD) Crohn’s ziekte en colitis ulcerosa ontstaan door een niet volledig gedefinieerde en complexe interactie tussen gastheer immuunreacties, genetische vatbaarheid, omgevingsfactoren en de enterische luminale inhoud1. Recente genoombrede associatiestudies rapporteren associaties tussen immuuncel regulerende genen en IBD-gevoeligheid2,3. Zowel intrinsieke genen van aangeboren als adaptieve immuuncellen zijn vertegenwoordigd in deze studies, wat wijst op een centrale rol voor deze celpopulaties in IBD-pathogenese.

Er bestaan momenteel meer dan 50 diermodellen van menselijke IBD. Hoewel geen enkel model de menselijke IBD perfect fenokopyeert, zijn veel nuttig voor het bestuderen van verschillende aspecten van de menselijke ziekte, inclusief ziekte-onset en progressie en de wondgenezingsrespons. In de hier beschreven methode wordt intestinale ontsteking geïnitieerd met syngeneïsche splenische CD4+CD45RBhigh T-cel adoptieve overdracht in T- en B-cel-deficiënte ontvangermuizen4. De CD4+CD45RBhigh T-celpopulatie bevat voornamelijk naïeve T-cellen geprimed voor activering die in staat zijn om chronische ontsteking van de dunne darm en dikke darm te induceren. Deze methode stelt de onderzoeker in staat om belangrijke experimentele variabelen te wijzigen, inclusief zowel aangeboren als adaptieve immuuncelpopulaties, om biologisch relevante vragen met betrekking tot ziekte-pathogenese te beantwoorden. Bovendien biedt deze methode een nauwkeurige initiatie van ziekte-onset en een goed gekarakteriseerd experimenteel tijdsverloop. Dit maakt de kinetische studie van klinische kenmerken van ziekteprogressie bij muizen mogelijk. Intestinale ontsteking geïnduceerd door deze methode vertoont veel kenmerken van menselijke IBD, inclusief chronische transmurale ontsteking van dikke en dunne darm, pathogenese aangedreven door cytokinen zoals TNF en IL-12, en systemische symptomen zoals vermagering5. Daarom is het een ideaal modelsysteem voor het bestuderen van de pathogenese van menselijke IBD.

De methode hier beschrijft in detail het protocol voor het induceren van experimentele colitis door adoptieve overdracht van CD4+CD45RBhigh T-cellen in Rag1-/- muizen. We bespreken belangrijke technische stappen, verwachte resultaten, optimalisatie en probleemoplossing. We behandelen de vereiste elementen voor de succesvolle ontwikkeling van dit muismodel van intestinale ontsteking voor onderzoeksdoeleinden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: Zorg ervoor dat alle dieren protocollen worden goedgekeurd door en in overeenstemming met de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) regelgeving en Gids van de National Research Council voor de zorg en het gebruik van proefdieren. Donormuizen kan mannelijk of vrouwelijk zijn, maar de ontvanger muizen moet mannelijk zijn. Als vrouwelijke ontvangers worden gebruikt, moet de donor muizen vrouwelijke 5 zijn. Onderhouden kolonies met behulp van reguliere, niet-steriele beddengoed en niet-aangezuurd water, omdat deze de darmflora beïnvloeden, en dus de colitis fenotype van de muizen 5,6.

1. Experimentele Voorbereiding

  1. Gebruik ijskoude media en buffers. Blijf cellen op ijs gedurende het experiment.
  2. Voeren het experiment in steriele biohazard kap met behulp van steriele techniek.

2. Isolatie van milt T-cellen

  1. Euthanaseren donor muis / muizen in CO 2 kamer gevolgd door cervicale dislocation. Spray buik met 70% ethanol.
  2. Maak een horizontale snede in de buik en afpellen huid buikvlies bloot. Houd peritoneum uit de interne organen van de tang en een insnijding in de linker buik buikvlies bloot te leggen en uitsnijden van de milt.
  3. Plaats de milt in 10 ml compleet medium in een petrischaal. Verwijderen en overtollige weefsel gooi uit de milt.
  4. Gebruik 2 gesteriliseerde glazen dia's te verpletteren en plagen elkaar milt in single-celsuspensie. Filter celsuspensie door een 70 urn zeef in een 50 ml conische buis en spoel zeef met 5 ml compleet medium. Plaats tot 5 milt in een 50 ml conische buis.
  5. Centrifugeer cellen bij 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door het gieten uit of door vacuüm zuigen in afvalcontainer.
  6. Voorzichtig hersuspenderen cellen in 5 ml per milt lysisbuffer rode bloedcellen lyseren gedurende 10 min bij kamertemperatuur. Voeg een gelijk volume compleet medium (5 ml per milt) op de buis.
  7. Centrifugeer cellen bij 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door het gieten uit of door vacuüm zuigen in afvalcontainer.
  8. Voorzichtig resuspendeer cellen in 10 ml Labeling Buffer.
  9. Tellen cellen door trypan blauw exclusie.
    1. Verwijder 20 ul van celsuspensie en toe te voegen aan 180 ul trypaanblauw een microfugebuis en meng. Na 5 min, voeg 10 ul gelabelde cellen hemocytometer tellen niet blauwe cellen onder de microscoop. Bepaal het totale aantal levensvatbare cellen. Gooi cel / trypaanblauw mix.
  10. Centrifugeer cellen in 10 ml Labeling Buffer bij 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door het gieten uit of door vacuüm zuigen in afvalcontainer.

3. Verrijking van CD4 + T-cellen

OPMERKING: Volg de instructies van de fabrikant voor specifieke producten die gebruikt worden in deze sectie.

  1. Voorzichtig resuspendeer cellen om een eencellige suspensie van 20 x 10 6 cellen / ml in koude Labeling Buffer.
  2. Voeg 5 ul per 1 x 10 6 cellen van gebiotinyleerde CD4 T-cel verrijking antilichamen. Incubeer cellen op ijs gedurende 15 min.
  3. Voeg 10x volume van Labeling Buffer. Centrifugeer cellen bij 450 x g gedurende 7 min. Zuig al het supernatant met behulp van vacuüm zuigen in afvalcontainer zorgvuldig.
  4. Grondig vortex streptavidine-geconjugeerde magnetische deeltjes. Voeg 5 ul van deeltjes per 1 x 10 6 cellen.
  5. Meng grondig, maar voorzichtig. Houd mengsel bij 6-12 ° C gedurende 30 min.
  6. Voeg Labeling Buffer tot een concentratie van 20-80 x 10 6 cellen / ml. Transfer tot 1,0 ml gelabelde cellen per 12 x 75 mm rondbodem reageerbuis (hierna de "positieve fractie tube").
  7. Plaats elke positieve-fractie buis op magneet voor 6-8 min.
  8. Met de positieve-fractie buizen nog steeds op de magneet, zorgvuldig supernatant overbrengen van positieve-fractie buis met glazen Pasteur pipet om een ​​nieuwe steriele 50 ml conische buis (Referred "de verrijkte fractie"). Deze verrijkte fractie bevat CD4 + T-cellen. Wees voorzichtig dat u de gelabelde cellen aangetrokken door de magneet te verstoren.
  9. Resuspendeer cellen nog in de positieve fractie buizen dezelfde hoeveelheid Labeling buffer als in stap 3.6 op en neer te pipetteren krachtig. Plaats positieve-fractie buis terug op magneet voor 6-8 min.
  10. Met positieve-fractie buizen nog steeds op de magneet, zorgvuldig overdragen supernatant (verrijkte fractie, CD4 +) van de positieve-fractie buis met glazen Pasteur pipet 50 ml steriel conische buis vanaf stap 3.8 zonder verstoring van de cellen verbonden aan de magneet.
  11. Herhaal stap 3,9-3,10 de opbrengst van CD4 + T-cellen verkregen verhogen. Verder protocol met verrijkte fractie (CD4 + cellen).

4. Etikettering en sorteren Cellen 7

  1. Centrifugeer verrijkte cellen bij 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door het gieten uit of vacuum Zuignap Houderion in de afvalcontainer.
  2. Resuspendeer cellen in 1 ml Labeling Buffer. Verwijder monster van cellen te tellen en te beoordelen voor levensvatbaarheid van de cellen door trypanblauwexclusie zoals in stap 2.9.
  3. Voeg een volume van Labeling Buffer tot 10 x 10 6 cellen / ml; Als cellen zijn reeds <10 x 10 6, centrifuge bij 450 xg gedurende 7 minuten, verwijder het supernatant door het gieten uit of vacuüm zuigen in afvalcontainer, en voeg volume van Labeling Buffer tot 10 x 10 6 cellen / ml.
    1. Het opzetten van aparte porties van ongeveer 5-10 x 10 5 cellen elk voor ongekleurd, isotype- gekleurd, en single-gekleurde controle cellen in microfugebuisjes.
  4. Voeg 5 ug / ml CD4-FITC en 1 ug / ml CD45RB-PE aan cellen. Voeg isotype controle vlekken en enkele vlekken op dezelfde concentratie monsters in microfugebuizen passende. Meng goed maar voorzichtig en incubeer op ijs beschermd tegen licht gedurende 30 min.
  5. Voeg 10x volume van Labeling Buffer aan cellen en controles. Centrifugeer 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door afzuiging in afvalcontainer.
  6. Resuspendeer in Labeling Buffer om het volume in stap 4.5. Centrifugeer 450 xg gedurende 7 min. Gooi supernatant door afzuiging in afvalcontainer.
  7. Resuspendeer in Labeling Buffer tot 10 x 10 6 cellen / ml. Passeren cellen door 70 micrometer zeef in FACS buis. Houd op ijs beschermd tegen licht tot klaar voor FACS.
  8. Opzetten en bepalen passende vergoeding aan de celsorteerder met ongekleurde cellen en single-gekleurd controles.
  9. Uitsluiten levensvatbare cellen met forward en side-scatter venstertijd (Figuur 1A). Opgezet venstertijd voor CD4 + en CD45RB + cellen met isotype- gekleurd controles. Gate cellen op CD4 + populatie.
  10. Sorteer CD4 + cellen in CD45RB hoog en CD45RB lage populaties met een eenvoudige histogram voor PE gekleurde cellen in buisjes met 2 ml compleet medium. De CD45RB hoog populatie vertegenwoordigt de hoogste 40% van CD4 + CD45RB + cellen (CD45RB hoog), en de CD45RB lage bevolking is de laagste 20% van CD4 + CD45RB + cellen (CD45RB laag Figuur 1B).

figure-protocol-1
Figuur 1: Representatieve flowcytometrie stukken CD4 + CD45RB T cel populaties in FACS-analyse (A - C) CD4 FITC en PE CD45RB-gekleurde splenocyten van donor C57BL / 6 muizen werden gesorteerd door FACS in CD4 + CD45RB hoog en CD4 +. CD45RB lage T-cel populaties. (A) Doublet evenementen werden uitgesloten op de forward scatter plot. (B) lymfocyten werden gated in de voorwaartse en zijwaartse verstrooiing plot. (C) CD4 + T-cellen werden gated, en (D) CD4 + CD45RB + T-cellen werden op een PE versus Events histogram uitgezet. CD4 + CD45RB laag cellen werden beschouwd als de laagste 20% van CD45RB + cellen. CD4 + CD45RB high cellen werden gedefinieerd als de hoogste 40% van CD45RB + cellen.

  1. Voer een aliquot van elke celpopulatie op de FACS machine zuiverheid van de bevolking te schatten.
  2. Centrifugeer gesorteerde cellen bij 450 xg gedurende 7 min. Resuspendeer in 1 ml PBS. Verwijder monster van cellen te tellen en te beoordelen voor levensvatbaarheid van de cellen door trypanblauwexclusie zoals in stap 2.9.

5. Injectie van cellen in Ontvangers

  1. Resuspendeer gesorteerde cellen tot 4 x 10 6 cellen / ml (CD45RB- hoog) of 2 x 10 6 cellen / ml (CD45RB laag) in PBS.
  2. Transfer 100 ul van CD45RB hoge cellen per ontvanger om nieuwe steriele buis. Voeg 100 ul van PBS perontvanger om deze buis. Zo totale injectie volume per dier is 200 pi, en de totale hoeveelheid cellen per ontvanger is 4 x 10 5 CD4 + CD45RB- hoge naïeve T-cellen.
  3. Als de experimentele groep die regulatoire T cellen gewenst is, 100 ul van CD45RB hoge cellen per ontvanger om nieuwe steriele buis. Voeg 100 ul van CD45RB laag cellen per ontvanger aan dezelfde buis. Totale injectie volume per dier is 200 pl; verhouding van CD45RB hoog: CD45RB- laag cellen is 2: 1.
  4. Injecteer 100 ui CD45RB hoog of CD45RB hoog / CD45RB lage CD4 + cellen intraperitoneaal in de rechter en linker zijde van de buik (totaal 200 pl) van elke ontvanger.

6. Toezicht op de progressie van de ziekte in Ontvanger Dieren

  1. De klinische toestand van de ontvangende dieren beoordelen toewijzen totale klinische scores voor de volgende parameters 8 op de dag van de injectie, daarna wekelijks, en op het moment van het offer:
    1. Bepaal verspillen door het meten van het gewichtsverlies: 0 - geen gewichtsverlies; 1 - 0,1-10% verlies van het oorspronkelijke lichaamsgewicht; 2 - meer dan 10% verlies van de oorspronkelijke lichaamsgewicht (figuur 2A).

figure-protocol-2
Figuur 2: Klinische en bruto pathologische tekenen van ontsteking optreden na overdracht van de wild-type CD4 + CD45RB- hoge T-cellen in RAG1 - / - en NRDKO ontvanger muizen 11 (A) NRDKO ontvangers verloren gemiddeld 10% van hun oorspronkelijke lichaamsgewicht door 5. weken na de overdracht, terwijl RAG1- / - Ontvangers geen klinische ziektesymptomen vertonen op dit moment. Elk punt vertegenwoordigt het gemiddelde percentage oorspronkelijke lichaamsgewicht van de cohort ± SEM. **, P <0.005. (B) Een aantal muizen ontwikkelden ernstige intestinale inflammatie, zoals blijkt uit de aanwezigheid van rectale prolaps. Dit is een representatief beeld van rectale prolaps in een NRDKO ontvangende muis. (C) In grote trekken, dubbele punten uit beide RAG1 - / - en NRDKO ontvanger muizen worden ingedikt en verkort in vergelijking met dubbele punten van RAG1 - / - en NRDKO muizen zonder T-cel adoptieve overdracht. Dubbele punten uit NRDKO ontvangende muizen ernstige ontsteking en verhoogde colon gewichten (gegevens niet getoond). Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

    1. Bepaal de kwaliteit van de ontlasting door het plaatsen van dieren in een schone container, totdat het voorbij iskrukje: 0 - geen; 1 - zachte ontlasting; 2 - waterig en / of bloederige ontlasting.
    2. Bepaal de algemene gezondheid van de dieren door de aanwezigheid van de volgende symptomen van de ziekte: 0 - geen gebogen houding, haren bont, of huidletsels; 1 - een van de volgende aanwezig: gebogen houding, haren bont, of huidletsels.
    3. Bepaal aanwezigheid van rectale prolaps: 0 - afwezig; 1 - heden (Figuur 2B).
  2. Offeren dieren door CO 2 inademing, gevolgd door cervicale dislocatie als ze 20% van hun startpositie lichaamsgewicht hebben verloren of op gewenst tijdstip, wat het eerst komt. Klinische ziekte is meestal zichtbaar vanaf week 5 post-repletie.
  3. Beoordelen voor ernst van de ziekte, zoals eerder beschreven 5,7.
    1. Wijs klinische scores als in stap 6.1 8.
    2. Meet colon lengte en gewicht (Figuur 2C).
    3. Voer histologische analyse van ontsteking5.
    4. Bepaal spontane cytokine expressie in darmweefsel explantkweken 9, mesenteriale lymfeklieren 10 en / of 11 serum.
      1. Kortom, voor explantkweken 9, verwijder dubbele punten na offer, geopend in de lengte, en schoon met PBS. Incubeer zuilen op een orbitale schudder bij 250 rpm in compleet medium gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur.
      2. Hak weefsel in kleine stukjes en geïncubeerd bij 37 ° C in compleet medium gedurende 24 uur. Verzamel de bovenstaande vloeistof en gebruik voor kwantificering van cytokines per 100 mg weefsel door ELISA.
    5. Voer ex vivo karakterisering van T cel fenotypes en / of functie 10.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Ongeveer 10 x 10 6 CD4 + CD45RB- hoge T-cellen van 10 milt van volwassen C57BL / 6 donormuizen zijn betrouwbaar geïsoleerd. Dit aantal zal variëren afhankelijk van de leeftijd en het type van de donor muis en de vaardigheid van de onderzoeker. Wanneer 4 x 10 5 C57BL / 6 CD4 + CD45RB- hoge T-cellen worden overgebracht naar C57BL / 6 RAG1 - / - ontvanger muizen, klinische ziekteverschijnselen ontstaan ​​rond week 5 post-repletie of eerde...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Hier beschrijven we een stap-voor-stap protocol inducerende darm ontsteking bij muizen door adoptieve overdracht van CD4 + CD45RB + T-cellen in immuun deficiënte muizen. We gebruikten C57BL / 6 donor milt en syngene RAG1 - / - ontvangende muizen, hoewel andere stammen (zoals BALB / c, 129S6 / SvEv, non-obese diabetische (NOD)) en genetische modellen van immunodeficiëntie (bijvoorbeeld SCID, RAG2 - / -) kan ook worden gebruikt 4,14-16.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de Amerikaanse Gastroenterological Association (AGA) Onderzoek Scholars Award en de Crohn en Colitis Foundation of America (CCFA) Career Development Award (tot SZS), NIH NIDDK F30 DK089692 (ECS), en de Universiteit van North Carolina Centrum voor Gastro-intestinale Biologie en de ziekte van Grant P30 DK34987 (histologie Core). De UNC flowcytometrie Core Facility wordt gedeeltelijk ondersteund door een NCI Center Core ondersteuning Grant (P30CA016086) aan de UNC Lineberger Comprehensive Cancer Center. Wij danken Luke B. Borst uit North Carolina State University College of Veterinary Medicine voor zijn hulp met histopathologische analyse en immunohistochemie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Naam van Reagens/ApparatuurBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen/Beschrijving
10x PBSGibco14200075
12 mm x 75 mm rondbodembuisFalcon352052
15 ml kegelvormigCorning430790
26 G x 3/8 NaaldBD Biosciences305110
50 ml kegelvormigCorning430828
70 μm Cel ZeefFisherbrand22363548
BD IMagnetBD Biosciences552311
β-mercaptoethanolThermo Scientific35602
CD4-FITC IgG2beBioscience11-0041
CD45RB-PE IgG2aBD Pharminogen553101
Volledig MediaRPMI-1640, 1% Pen/Strep, 10% FBS, 0,0004% β-ME
FACS buis + zeefBD Falcon352235
Glazen MicroscoopglazenFisherbrand12550A3
Verwarmd ingeactiveerd FBSGemini100-106
Labeling Buffer1x PBS, 0,5% BSA, 2 mM EDTA
Lysis Buffer0,08% NH4Cl, 0,1% KHCO3, 1 mM EDTA
MoFlo XDPBeckman Coulter
Muis CD4 T-lymfocyt Verrijkingsset - DMBD Biosciences558131
Muis IgG2a-PEBD Pharminogen553457
Muis IgG2b-FITCeBioscience11-4732
Pasteur PipetFisherbrand13-678-20D
Penicilline-Streptomycine Oplossing, 100XCorning Cellgro30-002-CI
[header]
PetrischaalFisherbrand875713
Pure Ethanol 200 ProofDecon Labs2705-HC
RPMI-1640Gibco11-875-093
SpuitBD Biosciences309597
Trypan blauwCorning Cellgro25-900-CI
Was MediaRPMI-1640, 1% Pen/Strep, 0,0004% β-ME

Referenties

  1. Xavier, R. J., Podolsky, D. K. Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).
  2. Cho, J. H., Brant, S. R. Recent insights into the genetics of inflammatory bowel disease. Gastroenterology. 140 (6), 1704-1712 (2011).
  3. Jostins, L., et al. Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease. Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).
  4. Powrie, F., Leach, M. W., Mauze, S., Caddle, L. B., Coffman, R. L. Phenotypically distinct subsets of CD4+ T cells induce or protect from chronic intestinal inflammation in C. B-17 scid mice. Int Immunol. 5 (11), 1461-1471 (1993).
  5. Ostanin, D. V., et al. T cell transfer model of chronic colitis: concepts, considerations, and tricks of the trade. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296 (2), 135-146 (2009).
  6. Ma, B. W., et al. Routine habitat change: a source of unrecognized transient alteration of intestinal microbiota in laboratory mice. PLoS One. 7 (10), e47416(2012).
  7. Read, S., Powrie, F. Induction of inflammatory bowel disease in immunodeficient mice by depletion of regulatory T cells. Curr Protoc Immunol. Chapter 15 (Unit 15 13), (1999).
  8. Maillard, M. H., et al. The Wiskott-Aldrich syndrome protein is required for the function of CD4(+)CD25(+)Foxp3(+) regulatory T cells. J Exp Med. 204 (2), 381-391 (2007).
  9. Hegazi, R. A., et al. Carbon monoxide ameliorates chronic murine colitis through a heme oxygenase 1-dependent pathway. J Exp Med. 202 (12), 1703-1713 (2005).
  10. Kole, A., et al. Type I IFNs regulate effector and regulatory T cell accumulation and anti-inflammatory cytokine production during T cell-mediated colitis. J Immunol. 191 (5), 2771-2779 (2013).
  11. Kobayashi, T., et al. NFIL3-deficient mice develop microbiota-dependent, IL-12/23-driven spontaneous colitis. J Immunol. 192 (4), 1918-1927 (2014).
  12. Steinbach, E. C., et al. Innate PI3K p110delta Regulates Th1/Th17 Development and Microbiota-Dependent Colitis. J Immunol. 192 (8), 3958-3968 (2014).
  13. Kobayashi, T., et al. NFIL3 is a regulator of IL-12 p40 in macrophages and mucosal immunity. J Immunol. 186 (8), 4649-4655 (2011).
  14. Leach, M. W., Bean, A. G., Mauze, S., Coffman, R. L., Powrie, F. Inflammatory bowel disease in C.B-17 scid mice reconstituted with the CD45RBhigh subset of CD4+ T cells. Am J Pathol. 148 (5), 1503-1515 (1996).
  15. Powrie, F., et al. Inhibition of Th1 responses prevents inflammatory bowel disease in scid mice reconstituted with CD45RBhi CD4. T cells. Immunity. 1 (7), 553-562 (1994).
  16. Read, S., Malmstrom, V., Powrie, F. Cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 plays an essential role in the function of CD25(+)CD4(+) regulatory cells that control intestinal inflammation. J Exp Med. 192 (2), 295-302 (2000).
  17. Rogers, G. B., et al. Functional divergence in gastrointestinal microbiota in physically-separated genetically identical mice. Sci Rep. 4, 5437(2014).
  18. Fukata, M., et al. The myeloid differentiation factor 88 (MyD88) is required for CD4+ T cell effector function in a murine model of inflammatory bowel disease. J Immunol. 180 (3), 1886-1894 (2008).
  19. Kurtz, C. C., et al. Extracellular adenosine regulates colitis through effects on lymphoid and nonlymphoid cells. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 307 (3), 338-346 (2014).
  20. Naganuma, M., et al. Cutting edge: Critical role for A2A adenosine receptors in the T cell-mediated regulation of colitis. J Immunol. 177 (5), 2765-2769 (2006).
  21. Ranatunga, D. C., et al. A protective role for human IL-10-expressing CD4+ T cells in colitis. J Immunol. 189 (3), 1243-1252 (2012).
  22. Srikrishna, G., et al. Carboxylated glycans mediate colitis through activation of NF-kappa. B. J Immunol. 175 (8), 5412-5422 (2005).
  23. Wang, F., et al. IFN-gamma-induced TNFR2 expression is required for TNF-dependent intestinal epithelial barrier dysfunction. Gastroenterology. 131 (4), 1153-1163 (2006).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Adoptieve T celtransferisolatie van miltcellenfluorescerende antilichaambelvellingfluorescentie geactiveerde cel sorteringintraperitoneale celinjectieexperimenteel colitismodelinflammatoire darmziekte
Inductie van Muriene darmontsteking door adoptieve overdracht van effector CD4
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.