Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Oprichting van een Human Multiple Myeloma Xenograft Model in de Chicken tumorgroei, invasie en Angiogenese Studie

12.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/52665

⸱

1 mei 2015

 ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, 2Oncotyrol GmbH, 3Tyrolean Cancer Research Institute, 4Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Human multiple myeloma (MM) cellen vereisen ondersteunende micromilieu van mesenchymale cellen en extracellulaire matrix componenten voor overleving en proliferatie. Wij vestigden een in vivo model van kippenembryo engrafted humane myeloma en mesenchymale cellen effecten van kanker geneesmiddelen op tumorgroei, invasie en angiogenese.

Samenvatting

Multipel myeloom (MM), een kwaadaardige plasmacel ziekte ongeneeslijk blijft en nieuwe medicijnen moeten de prognose voor patiënten te verbeteren. Door het ontbreken van het bot en micro auto / paracriene groeifactoren humane MM cellen zijn moeilijk te kweken. Daarom is er dringend behoefte aan vaststelling adequate in vitro en in vivo kweeksystemen de werking van nieuwe therapieën voor humane MM cellen te bestuderen. Hier presenteren we een model voor humane multiple myeloma cellen groeien in een complexe 3D omgeving in vitro en in vivo. MM cellijnen OPM-2 en RPMI-8226 werden getransfecteerd met het GFP-transgen tot expressie en werden in de aanwezigheid van menselijke mesenchymale cellen en collageen gekweekt type I matrix driedimensionale sferoïden. Daarnaast werden Steroiden geënt op het chorioallantoïsmembraan (CAM) van kippenembryo's en tumorgroei werd gevolgd met stereo fluorescentiemicroscopie. Beide modellen maken de studie van nieuwe therapeutische drugs in een complexe 3D-omgeving en de kwantificering van de tumorcel massa na homogenisering van grafts in een transgen-specifiek GFP-ELISA. Bovendien kan angiogene responsen van de gastheer en invasie van tumorcellen in de onderliggende gastheerweefsel dagelijks gemonitord door een stereomicroscoop en immunohistochemische kleuring tegen humane tumorcellen (Ki-67, CD138, Vimentin) of host mural cellen die bloedvaten geanalyseerd (desmine / ASMA).

Concluderend, het onplant systeem kunnen bestuderen MM celgroei en angiogenese in een complexe 3D-omgeving en maakt screening op nieuwe therapeutische verbindingen gericht overleving en proliferatie van MM cellen.

Inleiding

Multipel myeloom (MM) wordt gekenmerkt door proliferatie van kwaadaardige plasmacellen in het beenmerg, botlaesies en immunodeficiëntie 1. Hoewel nieuwe behandelingsopties zoals proteasoomremmers (bortezomib) en immuunmodulerende geneesmiddelen (pomalidomide en lenalidomide) beschikbaar zijn, blijft MM nog steeds een ongeneeslijke maligniteit met een grimmige prognose 2. De slechte prognose kan worden verklaard door de buitengewone heterogeniteit van MM-celklonen die bijdraagt aan variabele reacties op therapie, in het bijzonder onder langdurige behandeling en selectiedruk van MM-klonen 3.

Preklinisch testen van nieuwe geneesmiddelen en hun combinaties in vitro en in vivo is een kritieke en tijdrovende stap voor toekomstige geneesmiddelontwikkeling. Daarom zijn nuttige in-vivo-modellen van MM nodig om een beter begrip van de biologie van de ziekte te krijgen en om de ontdekking van nieuwe geneesmiddelen mogelijk te maken. Eigenlijk zijn de beste xenotransplantatiemodellen voor hematologische maligniteiten en therapeutischa immuundeficiënte muizen, zoals de ernstig gecombineerde immuundeficiënte (SCID) muizen 4-7, de niet-obese diabetische/SCID (NOD/SCID) muizen 8,9 of de β-microglobuline-knockout NOD/SCID muizen 10,11.

Hoewel muizenmodellen van menselijk MM in sommige aspecten kunnen lijken op het fenotype van de menselijke ziekte, zijn immuundeficiënte muizen ingefokt, daarom simuleren ze slechts één individuele reactie op een geneesmiddel en zijn de kosten zeer hoog. Vanwege immunosuppressie vereisen dieren speciale onderhoudscondities en het aanplanten van menselijk MM in muizen duurt 6 weken tot 2 maanden 9,12, tenzij cellen direct in het beenmerg worden getransplanteerd met behulp van een technisch veeleisende procedure met lagere overlevingspercentages bij dieren 7,13. Daarom zijn nieuwe methoden die gebruikmaken van op stamcellen gebaseerde organoïd-modellen 14, weefselengineering 15 of geavanceerde 3D-celcultuurmodellen 16 ontwikkeld. Ze zullen in de nabije toekomst concurreren met klassieke dierproeven voor preklinische geneesmiddeltesten, maar kunnen geen systeemtoxiciteitstests in levende organismen vervangen.

Het kippenembryo is eerder aangetoond een geschikt organisme te zijn voor xenotransplantatie van menselijke cellen en weefsels vanwege het ontbreken van een adaptieve immuunrespons tot het uitkomen 17-19. Bovendien weerspiegelt elk kippenembryo een individuele reactie op toegepaste geneesmiddelen of tumorcellen vanwege genetische diversiteit binnen de kippenpopulatie. De chorioallantoïsche membraan (CAM) is een goed gevestigd systeem om tumorafhankelijke angiogenesis te bestuderen 20-22. Wanneer vaste tumoren op de CAM worden getransplanteerd, vertonen ze veel kenmerken van kanker in vivo, inclusief proliferatie, invasie, angiogenesis en metastase 23-27.

Op basis van de eerdere ervaring van onze groep met CAM-xenograftmodellen20,26,27, werd een menselijk MM-model opgezet dat het voordeel van een menselijke 3D-kweekmethode combineert met het model van ex ovo ontwikkelende kippenembryo's. Dit MM-modelsysteem maakt real-time monitoring van MM-groeiprogressie, kwantificering van celmassa en preklinische geneesmiddeltesten mogelijk.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Volgens de Oostenrijkse wet, en het Bureau van Laboratory Animal Welfare van de Amerikaanse publieke gezondheidszorg aviaire embryo's worden niet beschouwd als levende gewervelde dieren tot hatching.The NIH Bureau van Laboratory Animal Welfare schriftelijke begeleiding is in dit gebied (http: // www.grants.nih.gov/grants/olaw/references/ilar91.htm en NIH publicatie nr .: 06-4515).

1. Cel Cultuur en Lentivirale transfectie

  1. Culture MM cellijnen OPM-2, RPMI-8226 en menselijke mesenchymale stamcellen uit beenmerg in RPMI 1640 medium, gesupplementeerd met 10% foetaal kalfsserum en 100 IU / ml penicilline, 100 ug / ml streptomycine en 2 mM glutamine in aanwezigheid van 5% CO2 bij 37 ° C.
  2. Transfecteren 5 x 10 6 293FT HEK cellen met virale verpakkingsmix (9 ug) DNA en 3 ug pLenti6 / V5 dest eGFP vector met behulp van 30 pl liposomaal transfectiereagens en transfectie medium (10 ml). Verwijder transfectie medium na 12 uur enVoeg 10 ml DMEM-medium met 10% bovien kalfsserum en 1% niet-essentiële aminozuren (NEAA).
  3. Na 5 dagen, verzamel supernatanten van HEK293FT cellen na centrifugeren van het zwemmen cellen (1.000 x g, 5 min). Bepaal virale titer door real time PCR zoals elders 28 beschreven.
  4. Transfecteren 1 x 10 6 MM cellen met eGFP lentivirale deeltjes (1 x 10 5 deeltjes) in een plaat met 24 putjes in compleet groeimedium. Na 3 dagen, te beginnen selectieproces door toevoeging van 2 ug / ml blasticidine aan het kweekmedium. Voor de commercieel verkrijgbare eGFP lentivirus, gebruikt 500 ug / ml neomycine.
  5. Na 2 weken van de selectie, zal clusters van eGFP uiten MM cellen blijken; cellen te verzamelen door centrifugeren (1000 x g, 5 min) en uit te breiden hen als OPM-2 eGFP en RPMI-8226 eGFP sublijnen voor experimenten (hoofdstuk 2 en 3).

2. 3D-Multiple Myeloma Spheroid Model

  1. Type I Chill collageen-oplossing en 10 x DMEM on ijs.
  2. Meng 1/10 volume van 10 x DMEM medium in collageen matrix; voeg NaOH (0,2 N) met zure collageenoplossing een pH waarde van 7,4 te neutraliseren; store collageen / medium oplossing op het ijs.
  3. Meng transgene MM cellijnen (OPM-2 eGFP of RPMI-8226 eGFP; 250.000 per sferoïde,) met menselijke mesenchymale cellen (50.000 cellen / sferoïde, dat wil zeggen 30 ul druppel).
  4. Centrifuge celmengsel in 15 ml buizen (1000 x g, 5 min), voeg koud bereide collageen mengsel (1 ml) naar de cel pellet en meng goed (met 1000 ul tip).
  5. Onmiddellijk Pipetteer 30 ul van de collageen / celmengsel (met 100 ul tip) in een 24 wells plaat op steriele paraffine film en laat cellen / collageen mengsel polymeriseren gedurende 30 minuten bij 37 ° C (zie figuur 1A).
  6. Overlay MM sferoïden met 1 ml kweekmedium dat 1, 10 en 100 nM bortezomib (zie figuur 1B).
  7. Na 72 uur incubatie bij 37 ° C, document sferoïden doorfluorescentie stereomicroscopie (zie figuur 1C).
  8. Breng elke sferoïde met behulp van forceps met brede platte bekken in een reageerbuis voor het meten van GFP (zie figuur 1D).

3. 3D Multiple Myeloma Xenograft Model in de CAM

  1. Incubeer kippeneieren in een bijzondere incubator vogeleieren bij 37 ° C en 70% luchtvochtigheid gedurende drie dagen.
  2. Daarna geopend eieren en overdracht embryo gesteriliseerd met ethanol, vierkant, 10 cm plastic weegschuitjes met celkweekplaat deksel en incubeer "ex ovo" gedurende zes dagen, waardoor de CAM kan ontwikkelen (zie figuur 2A).
  3. Type-I Chill collageenoplossing en 10 x DMEM op ijs, meng 1/10 volume van 10 x DMEM medium in collageen matrix, Opslaan NaOH (0,2 N) met zure collageenoplossing een pH waarde van 7,4 te neutraliseren; store collageen / medium oplossing op het ijs.
  4. Meng transgene MM cellijnen (OPM-2 eGFP ofRPMI-8226 eGFP; 250.000 per sferoïde,) met menselijke mesenchymale cellen (50.000 cellen / sferoïde).
  5. Centrifuge cellen in 15 ml buizen (1000 xg, 5min, want elke test verbinding 1 flacon), voeg 1 ml koud bereid collageen mengsel met geneesmiddel (op de gewenste werken concentratie) naar de cel pellet en meng goed (met 1000 ul tip).
  6. Plaats collageen druppels (30 pi elk) op parafilm in een 6 goed pate gedurende 30 minuten om polymerisatie van de extracellulaire matrix toe bij 37 ° C.
  7. Transfer "onplants" uit stap 3.6 met behulp van een tang om het onbehandelde oppervlak van de CAM (2 cm van embryo) van 9 dagen oude kippenembryo's (4 onplants per kippenembryo, zie figuur 2B)
  8. Na 5 dagen in vivo in een ei-incubator bij 37 ° C en 70% vochtigheid, document xenotransplantaten door fluorescentie stereomicroscopie (zie figuur 2C). Euthanaseren kippenembryo's van hypothermie bij 4 ° C in de koelkast gedurende 5 uur.
  9. Verwijder xenotransplantaten met onderliggende CAM weefsel door een oogheelkundige schaar en tang met brede platte kaken. Gebruik ze voor het meten van GFP (hoofdstuk 4, zie figuur 2D) of voor immunohistochemische analyse van de bloedvaten en / of binnendringende tumorcellen (hoofdstuk 5).

4. Kwantificering van eGFP eiwit met ELISA

  1. Breng elke MM bolvormige of uitgeschakelde xenograft in 0,5 ml RIPA buffer bevattende 200 ug / ml proteaseremmers.
  2. Homogeniseren sferoïde / xenograft met een tissue homogenisator op ijs.
  3. Voer drie invriezen / ontdooien cycli in vloeibare stikstof en 37 ° C waterbad.
  4. Centrifugeer homogenaat bij 4 ° C gedurende 20 min (12.000 g) en opslaan supernatanten.
  5. Verdun monsters 1:20 in assaybuffer (200 ul) van de ELISA-kit. Meet GFP-niveaus door een commerciële ELISA kit GFP via gebiotinyleerd anti-GFP antilichamen volgens het protocol van de fabrikant.

5. Immunohistochemical Analyse van de bloedvaten en het binnenvallen van tumorcellen

  1. Bevestig uitgesneden xenotransplantaten met CAM gebied 4% paraformaldehyde O / N bij 4 ° C.
  2. Vastgezet xenotransplantaten in inbedden cassettes en overbrengen in een weefsel inbedding station bij toenemende gegradeerde alcohol series (50%, 70%, 80%, 95% ethanol, xyleen en paraffine; iedere stap 60 min).
  3. Sectie xenotransplantaten (5 urn) door middel van een benchtop rotatiemicrotoom. Bak paraffinecoupes op glasplaatjes O / N bij 56 ° C.
  4. Deparaffinize secties door een afnemende gegradeerde alcohol serie dubbel gedestilleerd water (xylol, 95%, 80%, 70%, 50% ethanol, tweemaal gedestilleerd water; iedere stap 10 min).
  5. Voer antigen retrieval in een waterbad (95 ° C, 20 min) met een antigen retrieval oplossing (citrate- buffer, pH 7,0, volume 100 ui).
  6. Blokkeer endogene peroxidase-activiteit met 100 ui 3% H 2 O 2 / methanol gedurende 30 minuten.
  7. Blokdelen in PBS bevattende10% foetaal kalfserum voor 45 min (volume 100 ui).
  8. Stain gedurende 1 uur met 100 pi primair antilichaam (1 pg / ml) verdund in PBS dat 1% foetaal kalfsserum bij KT.
  9. Na 3 maal wassen in PBS, geïncubeerd gedurende 1 uur met gebiotinyleerd secundair antilichaam (0,1 ug / ml) in PBS met 1% foetaal kalfsserum bij KT.
  10. Na 3 maal wassen in PBS uitgevoerd kleurreactie door avidine / biotine-complex (ABC) en diaminobenzidine (DAB) substraatoplossing volgens de instructies van de fabrikant.
  11. 5.11. Stop de reactie door de overdracht van secties dubbel gedestilleerd water, tegenkleuring met hematoxyline en monteer secties met een synthetisch montage medium.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

In vitro analyse van doelverbindingen in 3D multiple myeloma spheroïde assays

Door de beperking van het kweken van primaire humane MM cellen in vitro we werden nieuwe 3D cultuur in vitro modellen voor humane MM cellijnen gebruikmakend van een extracellulaire matrix groei en ondersteunende primaire humane mesenchymale cellen uit beenmerg (Figuur 1A, B). EGFP transgene MM cellijnen toelaten visualisatie en kwantificatie van MM tumor ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De ontwikkeling van nieuwe therapeutische middelen voor vuurvaste MM vereist minder tijdrovend en duur in vivo systemen om gevoeligheid van humane cellen naar drugs evalueren. Tot nu toe slechts weinig in vivo systemen zijn beschikbaar voor de preklinische evaluatie van nieuwe anti-myeloma therapieën. Allemaal hebben ze hun beperkingen voor grootschalige screening van compound libraries 29.

De beste huidige modellen voor menselijke MM cellen zijn zeer immuun-deficiënte muizen 7,13,30 e...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen

Dankbetuigingen

De auteurs willen mevrouw Cornelia Heis bedanken voor haar uitstekende technische assistentie bij immunohistochemie en de voorbereiding van kippenembryo's. Dit werk werd ondersteund door de Oostenrijkse Wetenschapsraad (FWF Grant Nr. P19552) en de Europese Unie (EU FP7 project Optatio Nr: 278570).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
RPMI-8226 cellenDSMZACC 9STR geprofileerd
OPM-2 cellenDSMZACC 50STR geprofileerd
Menselijke mesenchymale stamcellen PromoCellPC-C-12974
HEK293FT cellen InvitrogenR700-07
RPMI1640 MediumSigma AldrichR0883
Fetaal bovien serum  HyCloneThermoScientificSH30070.03
L-Glut- Pen- Strep oplossingSigmaG6784
DMEM MediumGibco31966
NEAASigma Life SciencesM7145
Transfectie Medium/Opti-MEM Gibco51985
eGFP lentivirale deeltjesGeneCopoeiaLPP-EGFP-LV105Klaar voor gebruik virale deeltjes
pLenti6/V5Dest6 eGFP vectorInvitrogenPN 35-1271van auteurs
ViralpowerTM verpakkingsmix InvitrogenP/N 35-1275
Transfectiereagens/ Lipofectamin 2000Invitrogen11668-027
BlasticidinInvitrogenR210-01
NeomycinBiochromA2912
Collageen-Type1  Rat StaartBD Biosciences354236
DMEM poederLife TechnologiesArt.Nr. 10338582
plitidepsinPharmamar
bortezomibLKT Lab., Inc.B5871
SPF-witte heneneierenCharles RiverBevrucht  witte Leghorn  kippeneieren
Kunststof weegschepenneoLabArt.Nr. 1-1125voor ex-ovo cultuur
Petrischaal vierkant (Deksels)SimportD210-16voor ex-ovo cultuur
RIPA Buffer (10x)Cell Signaling#9806
Protease Inhibitor TablettenRoche11 836 170 001
Complete Mini EDTA-vrij
GFP ELISACell Biolabs, Inc.AKR-121
Histocette IISimportM493-6
PFA  37%Roth7398.1
DPBSLonzaBE17-512F
Ethanol absolutNormapur20,821,321
Roti-HistolRothArt.Nr.6640.4
ParaplastSigmaA6330
SuperFrost MicroscoopglaasjesR. Langenbrinck Art.-Nr.
Labor- u. Medizintechnik03-0060
DakoCytomation Wash Buffer 10xDakoCytomationCode-Nr.
S 3006
Target Retrieval Solution (10x)  pH 6,1DAKOCode-Nr.
S 1699
H2O2Merck
m-a-hu ASMA clone 1A4DAKOM0851
m-a-hu CD138 clone MI15DAKOM7228
m-a-hu Vimentin clone V9DAKOM0725
m-a-hu Desmin clone D33DAKO M0760
m-a-hu Ki67  clone MIB-1  DAKO M7240
biotinyleerde geit- anti-muis IgGVector Laboratories Inc.BA-9200
Vectastain Elite ABC KitVector Laboratories Inc.# PK-6100
FAST DAB Tablet Set.Sigma Biochemicals# D4293
Mayer’s hemalaun oplossingMerck1,092,490,500
Roti HistokittRothArt.Nr.6638.2
Bench top roterende microtoomThermo Electron, Shandon Finesse ME+
Weefsel inbedding stationLeica, TP1020
Ei-IncubatorGrumbach BSS160
Stereo fluorescentiemicroscoop uitgerust met een verbonden met een digitale camera (Olympus E410) en flexibele koude licht Olympus, SZX10
Ultra Turrax IKA T10Homogenisator

Referenties

  1. Kuehl, W. M., Bergsagel, P. L. Multiple myeloma: evolving genetic events and host interactions. Nat.Rev.Cancer. 2 (3), 175-187 (2002).
  2. Kumar, S. K., Gertz, M. A. Risk adapted therapy for multiple myeloma: back to basics. Leuk.Lymphoma. , (2014).
  3. Prideaux, S. M., Conway, O. E., Chevassut, T. J. The genetic architecture of multiple myeloma. Adv.Hematol. 2014, 864058(2014).
  4. Chauhan, D., et al. A novel orally active proteasome inhibitor ONX 0912 triggers in vitro and in vivo cytotoxicity in multiple myeloma. Blood. 116 (23), 4906-4915 (2010).
  5. Kuehl, W. M. Mouse models can predict cancer therapy. Blood. 120 (2), 238-240 (2012).
  6. Nefedova, Y., Gabrilovich, D. Mechanisms and clinical prospects of Notch inhibitors in the therapy of hematological malignancies. Drug Resist.Updat. 11 (6), 210-218 (2008).
  7. Yaccoby, S., Barlogie, B., Epstein, J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations. Blood. 92 (8), 2908-2913 (1998).
  8. Dazzi, F., et al. Normal and chronic phase CML hematopoietic cells repopulate NOD/SCID bone marrow with different kinetics and cell lineage representation. Hematol.J. 1 (5), 307-315 (2000).
  9. Lock, R. B., et al. The nonobese diabetic/severe combined immunodeficient (NOD/SCID) mouse model of childhood acute lymphoblastic leukemia reveals intrinsic differences in biologic characteristics at diagnosis and relapse. Blood. 99 (11), 4100-4108 (2002).
  10. Feuring-Buske, M., et al. Improved engraftment of human acute myeloid leukemia progenitor cells in beta 2-microglobulin-deficient NOD/SCID mice and in NOD/SCID mice transgenic for human growth factors. Leukemia. 17 (4), 760-763 (2003).
  11. Pearce, D. J., et al. AML engraftment in the NOD/SCID assay reflects the outcome of AML: implications for our understanding of the heterogeneity of AML. Blood. 107 (3), 1166-1173 (2006).
  12. Li, M., et al. Combined inhibition of Notch signaling and Bcl-2/Bcl-xL results in synergistic antimyeloma effect. Mol.Cancer Ther. 9 (12), 3200-3209 (2010).
  13. Tassone, P., et al. A clinically relevant SCID-hu in vivo model of human multiple myeloma. Blood. 106 (2), 713-716 (2005).
  14. Ranga, A., Gjorevski, N., Lutolf, M. P. Drug discovery through stem cell-based organoid models. Adv.Drug Deliv.Rev. 69-70, 19-28 (2014).
  15. Pereira, R. F., Barrias, C. C., Granja, P. L., Bartolo, P. J. Advanced biofabrication strategies for skin regeneration and repair. Nanomedicine.(Lond). 8 (4), 603-621 (2013).
  16. Fischbach, C., et al. Engineering tumors with 3D scaffolds). Nat.Methods. 4 (10), 855-860 (2007).
  17. Boulland, J. L., Halasi, G., Kasumacic, N., Glover, J. C. Xenotransplantation of human stem cells into the chicken embryo. J.Vis.Exp. (41), (2010).
  18. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chapter 2. Chick embryo chorioallantoic membrane models to quantify angiogenesis induced by inflammatory and tumor cells or purified effector molecules. Methods Enzymol. 444, 21-41 (2008).
  19. Deryugina, E. I., Quigley, J. P. Chick embryo chorioallantoic membrane model systems to study and visualize human tumor cell metastasis. Histochem.Cell Biol. 130 (6), 1119-1130 (2008).
  20. Kern, J., et al. GRP-78 secreted by tumor cells blocks the antiangiogenic activity of bortezomib. Blood. 114 (18), 3960-3967 (2009).
  21. Ribatti, D., Nico, B., Vacca, A., Presta, M. The gelatin sponge-chorioallantoic membrane assay. Nat.Protoc. 1 (1), 85-91 (2006).
  22. Ribatti, D. The chick embryo chorioallantoic membrane as a model for tumor biology. Exp.Cell Res. , (2014).
  23. Dohle, D. S., et al. Chick ex ovo culture and ex ovo CAM assay: how it really works. J.Vis.Exp. (33), (2009).
  24. Kobayashi, T., et al. A chick embryo model for metastatic human prostate cancer. Eur.Urol. 34 (2), 154-160 (1998).
  25. Koop, S., et al. Fate of melanoma cells entering the microcirculation: over 80% survive and extravasate. Cancer Res. 55 (12), 2520-2523 (1995).
  26. Martowicz, A., Spizzo, G., Gastl, G., Untergasser, G. Phenotype-dependent effects of EpCAM expression on growth and invasion of human breast cancer cell lines. BMC.Cancer. 12, 501(2012).
  27. Martowicz, A., et al. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth. Mol.Cancer. 12, 56(2013).
  28. Geraerts, M., Willems, S., Baekelandt, V., Debyser, Z., Gijsbers, R. Comparison of lentiviral vector titration methods. 6, 34(2006).
  29. Farnoushi, Y., et al. Rapid in vivo testing of drug response in multiple myeloma made possible by xenograft to turkey embryos. Br.J.Cancer. 105 (11), 1708-1718 (2011).
  30. Wunderlich, M., Krejci, O., Wei, J., Mulloy, J. C. Human CD34+ cells expressing the inv(16) fusion protein exhibit a myelomonocytic phenotype with greatly enhanced proliferative ability. Blood. 108 (5), 1690-1697 (2006).
  31. Hideshima, T., Mitsiades, C., Tonon, G., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Understanding multiple myeloma pathogenesis in the bone marrow to identify new therapeutic targets. Nat.Rev.Cancer. 7 (8), 585-598 (2007).
  32. Parikh, M. R., Belch, A. R., Pilarski, L. M., Kirshner, J. A three-dimensional tissue culture model to study primary human bone marrow and its malignancies. J.Vis.Exp. (85), (2014).
  33. Schuler, J., Ewerth, D., Waldschmidt, J., Wasch, R., Engelhardt, M. Preclinical models of multiple myeloma: a critical appraisal. Expert.Opin.Biol.Ther. 13, Suppl 1. S111-S123 (2013).
  34. Kirshner, J., et al. A unique three-dimensional model for evaluating the impact of therapy on multiple myeloma. Blood. 112 (7), 2935-2945 (2008).
  35. Jilani, S. M., et al. Selective binding of lectins to embryonic chicken vasculature. J.Histochem.Cytochem. 51 (5), 597-604 (2003).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

KippenembryomodelAnalyse van tumorgroeiMeting van GFP expressieChorioallanto de membraantransplantatieStereoflourescentiemicroscopieImmunohistochemische kleuringGFP ELISA kwantificeringHumane mesenchymale cellenCollageen type I matrix
Oprichting van een Human Multiple Myeloma Xenograft Model in de Chicken tumorgroei, invasie en Angiogenese Studie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.