Een Trombotische Stroke model op basis van Transient Cerebrale hypoxie-ischemie

Samenvatting

Modellen voor trombo-embolische beroertes zijn essentiële hulpmiddelen voor het optimaliseren van de recanalisatietherapie. Hier beschrijven we een muismodel voor trombotische beroerte gebaseerd op een tijdelijk cerebraal hypoxisch-ischemisch (tHI) letsel, dat trombose en infarct veroorzaakt en gunstig reageert op weefselplasminogeenactivator (tPA)-gemedieerde fibrinolyse in een therapeutisch venster vergelijkbaar met dat bij beroertepatiënten.

Samenvatting

Stroke onderzoek heeft vele tegenslagen doorstaan ​​in het vertalen van neuroprotectieve therapieën in de klinische praktijk. In tegenstelling, de echte therapie (tPA trombolyse) produceert nauwelijks voordelen mechanische occlusie gebaseerde experimentele modellen die preklinisch onderzoek beroerte domineren. Deze splitsing tussen de bank en bed suggereert de noodzaak om tPA-responsieve modellen in dienst in preklinische beroerte onderzoek. Hiertoe wordt een eenvoudige en tPA-reactieve trombotische slagmodel uitgevonden en hierin beschreven. Dit model bestaat uit transiënte occlusie van de eenzijdige halsslagader en levering van 7,5% zuurstof via een gezichtsmasker bij volwassen muizen gedurende 30 min, terwijl de rectale temperatuur dier op 37,5 ± 0,5 ° C. Hoewel reversibele ligatie van de eenzijdige halsslagader of hypoxie elke onderdrukte hersenbloedstroom alleen transiënt, de combinatie van beide beledigingen heeft langdurige reperfusie stoornissen, fibrine en bloedplaatjes afzetting en grote infarct in het midden cerebrale slagader geleverd grondgebied. Belangrijk-staartader injectie van recombinant tPA op 0,5, 1, of 4 uur na Thi (10 mg / kg) die tijdsafhankelijke vermindering van de sterfte en de infarctgrootte. Dit nieuwe slagmodel is eenvoudig en kan worden gestandaardiseerd laboratoria experimentele resultaten te vergelijken. Verder induceert trombose zonder craniectomy of invoering voorgevormde embolie. Gezien deze unieke verdiensten, de THI-model is een nuttige aanvulling op het repertoire van preklinisch beroerte onderzoek.

Inleiding

Trombolyse recanalization is de meest effectieve behandeling van acute ischemische beroerte in de klinische praktijk ^1. Maar de meeste preklinische neuroprotectie onderzoek werd uitgevoerd in een tijdelijke mechanische obstructie model (intraluminale hechtdraad middelste cerebrale arterie occlusie) dat snelle herstel van de cerebrale bloedstroom bij verwijdering van de vasculaire occlusie produceert en vertoont weinig of geen voordelen met tPA trombolyse. Er is gesuggereerd dat de twijfelachtige keuze takt modellen droegen, ten minste gedeeltelijk, de moeilijkheid bij het ​​vertalen neuroprotectieve therapie bij patiënten ^2,3. Daarom is er een t....

Protocol

Dit protocol wordt goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) van de Emory University en volgt de National Institutes of Health Leidraad voor Zorg en gebruik van proefdieren.

1. Setup

1. Bereid de chirurgische bed verwarmingskussen verbonden met warmtepomp bij 37 ° C gedurende ten minste 15 minuten voor de operatie. Plaats een nek roll met het vat van 3 ml spuit op de chirurgische bed. Bereid de verdoving gas met 2% isofluraan in de medische lucht.
2. Bereid geautoclaveerd pincet, schaar, micro naald houders, hemostat, wattenstaafjes en hechtingen. Bereid weefsel lijm en oogzalf.
3. Stel ....

Resultaten

Tweedimensionaal laser speckle contrast imaging (LSCI) ¹⁶ werd toegepast om de veranderingen van de cerebrale bloedstroom (CBF) vergelijken door 30 min transient eenzijdige carotis occlusie (tCCAO), 30 min blootstelling aan hypoxie (7,5% zuurstof) en 30 min eenzijdige carotis ligatie onder hypoxie (THI). Dit experiment toonde dat tCCAO onder normoxie onderdrukte de CBF de carotide geligeerd halfrond ~ 50% boven de basislijn, die snel hersteld tot boven 85% na de vrijgave van de carotis occlusie (R in .......

Discussie

Beroerte is een belangrijk gezondheidsprobleem van groeiende betekenis voor elke samenleving met een vergrijzende bevolking. Wereldwijd, een beroerte is de tweede belangrijkste doodsoorzaak met een geschatte 5,9 miljoen fatale gebeurtenissen in 2010, wat overeenkomt met 11,1% van alle sterfgevallen ^18. Stroke is ook de derde belangrijke oorzaak van disability adjusted life years (DALY's) verloren wereldwijd in 2010, een stijging van de vijfde positie in 1990 ^19. Deze epidemiologische gegevens o.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
adult male mice	Charles River	C57BL/6	10-13 weken oud (22-30 g)
Mobile Laboratory Animal Anesthesia System	VetEquip	901807	anesthesie
Medical air (Compressed) air tank	Airgas	UN1002	anesthesie
Isoflurane	Piramal Healthcare	NDC 66794-013-25	anesthesie
Multi-Station Lab Animal AnesthesiaSystem	Surgivet	V703501	hypoxie systeem
7.5% O2 balanced by 92.5% N2 tank	Airgas	UN1956	hypoxie systeem
Temperature Controller with heating lamp	Cole Parmer	EW-89000-10	temperatuurregelaars
Rectal probe	Cole Parmer	NCI-00141PG	temperatuurregelaars
Dissecting microscope	Olympus	SZ40	chirurgische opstelling
Heat pump with warming pad	Gaymar	TP700	chirurgische opstelling
Fine curved forceps (serrated)	FST	11370-31	chirurgisch instrument
Fine curved forceps (smooth)	FST	11373-12	chirurgisch instrument
micro scissors	FST	15000-03	chirurgisch instrument
micro needle holders	FST	12060-01	chirurgisch instrument
Halsted-Mosquito hemostats	FST	13008-12	chirurgisch instrument
5-0 silk suture	Harvard Apparatus	624143	chirurgische benodigdheden
4-0 Nylon monofilament suture	LOOK	766B	chirurgische benodigdheden
Tissue glue	Abbott Laboratories	NC9855218	chirurgische benodigdheden
Puralube Vet ointment	Fisher	NC0138063	oogdroogte preventie
MoorFLPI-2 blood flow imager	Moor	780-nm laserbron	Laser Speckle Contrast Imaging
Mannitol	Sigma	M4125	in vivo TTC
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)	Sigma	T8877	in vivo TTC
Vibratome	Stoelting	51425	hersensectie voor in vivo TTC
Digital microscope	Dino-Lite	AM2111	hersenbeeldvorming
O.C.T compound	Sakura Finetek	4583
goat anti-rabbit Alexa Fluro 488	Invitrogen	A11008	Immunohistochemistry
Cryostat	Vibratome	ultrapro 5000	hersensectie voor IHC
Evans blue	Sigma	E2129	Vasculair perfusie detecteren
Microtome	Electron Microscopy Sciences	5000	hersensectie voor histologie
Avertin (2, 2, 2-Tribromoethanol)	Sigma	T48402	euthanasie
Fluorescent microscope	Olympus	DP73
Meloxicam SR	ZooPharm		NSAID pijnstilling