Weefselmanipulatie omvat vaak in vitro expansie om autologe voor weefselregeneratie creëren. Deze studie geeft een werkwijze voor weefselexpansie, regeneratie, reconstructie en in vivo werd ontwikkeld om de verwerking van cellen en biologische materialen buiten het lichaam te minimaliseren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Gehakt Tissue in Compressed Collageen: A-cel met Biotransplant voor Single-geënsceneerde Reconstructieve Repair
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Conventionele technieken voor celexpansie en transplantatie van autologe cellen voor weefselengineeringdoeleinden kunnen plaatsvinden in speciaal uitgeruste faciliteiten voor menselijke celcultuur. Deze methoden omvatten isolatie van cellen in een enkele celsuspensie en verschillende bewerkelijk en tijdrovende gebeurtenissen vóór transplantatie terug naar de patiënt. Eerdere studies suggereren dat het lichaam zelf zou kunnen worden gebruikt als een bioreactor voor celexpansie en weefselregeneratie om ex vivo manipulaties van weefsels en cellen te minimaliseren vóór transplantatie naar de patiënt. Het doel van deze studie was om een methode te demonstreren voor weefseloogst, isolatie van continu epitheel, het in kleine stukjes snijden van het epitheel en het incorporeren ervan in een drielaags biomateriaal. Het drielaagse biomateriaal diende vervolgens als een aflevervoertuig om chirurgische behandeling, uitwisseling van voeding over het transplantaat en een gecontroleerde degradatie mogelijk te maken. Het biomateriaal bestond uit twee buitenlagen van collageen en een kern van een mechanisch stabiel en langzaam afbreekbaar polymeer. Het gesnipperde epitheel werd incorporeerd in een van de collageenlagen vóór transplantatie. Door het epitheelweefsel in kleine stukjes te snijden, konden de stukken worden verspreid en daardoor werd de proliferatie van cellen gestimuleerd. Na de initiële acceptatie van de transplantaten zou celexpansie en reorganisatie plaatsvinden en zou de extracellulaire matrix volwassen worden om ingroei van haarvaten en zenuwen en verdere rijping van de extracellulaire matrix mogelijk te maken. De techniek minimaliseert ex vivo manipulaties en maakt celoogst, voorbereiding van autotransplantaat en transplantatie naar de patiënt mogelijk als een eenvoudige eenfasige interventie. In de toekomst zou weefselexpansie kunnen worden geïnitieerd rond een 3D-mal in het lichaam zelf, volgens de specifieke behoeften van de patiënt. Bovendien zou de techniek kunnen worden uitgevoerd in een gewone chirurgische omgeving zonder de noodzaak van geavanceerde celkweekfaciliteiten.
Inleiding
Meest tissue engineering studies op transplantatie in de huid en het urogenitale kanaal omvatten autologe cel oogsten van gezond weefsel en celexpansie in speciaal uitgeruste-cel kweken faciliteiten 1,2.
Na celexpansie, worden cellen gewoonlijk opgeslagen voor later gebruik bij de patiënt bereid de autograft ontvangen. Stikstof diepvriezers mogelijk langdurige opslag bij lage temperaturen van -150 ° C of lager. Het proces van invriezen moet voorzichtig en gecontroleerd zodat de cellen niet te verliezen. Een kans op celdood kristallisatie van intracellulair water tijdens het ontdooien, wat kan leiden tot breuk van de celmembrane....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dieren protocollen werden vooraf goedgekeurd door de County Comite Stockholm on Animals en alle procedures voldeden aan de regels voor diergeneeskundig gebruik, alsmede relevante federale statuten.
1. Dierlijke Procedures
- De voorbereiding van de Animal voor Heelkunde
- Bereid de operatietafel alle materialen en instrumenten die voor de werking onder steriele omstandigheden. Voer de operatie uitsluitend onder steriele omstandigheden het risico op infectie te verminderen en optimaliseren van de omstandigheden in overleving chirurgie.
- Vasten de dieren gedurende 12 uur vóór de operatie en meet het gewicht. Die....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Deze studie presenteert een methode die laat zien hoe een biomateriaal voor transplantatie te produceren met behulp van plastic compressie van collageen en gehakt weefsel.
Blaasslijmvlies en huid kunnen worden geoogst en vervolgens mechanisch in kleine deeltjes gehakt (figuur 3). Door kunststof compressie, worden de gehakte deeltjes opgenomen in de samengestelde steiger bestaande uit een centrale bioafbreekbaar polymeer dat mechanisch sterke binnen buitenlagen van een collag.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze studie geeft een gemakkelijk te gebruiken benadering blaaswand vlekken met autologe weefsels voor transplantatie produceren de operatietafel. De pleisters worden gevormd door de combinatie van een biologisch afbreekbaar polymeer breien in het midden en collageen met en zonder gehakt weefsel in de buitenvlakken kunststof verbonden met compressie. Plastic compressie is een methode eerder beschreven door andere auteurs en kan worden gedefinieerd als een snelle verwijdering van vocht uit collageen gels 12,13.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs danken de Zweedse Vereniging voor Medisch Onderzoek, de Promobilia Stichting, de Stichting van Kroonprinses Lovisa, de Vrijmetselaarsstichting voor Kinderwelzijn, de Zweedse Vereniging van Geneeskunde, de Solstickan Stichting, het Karolinska Instituut en de gemeente Stockholm voor de financiële ondersteuning.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Silicone catheter 10-French | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | ||
| DMEM 10x | Gibco | 31885-023 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| 24 well plates | Falcon | 08-772-1 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| 3',3',5-Triiodothyronine | Sigma-Aldrich | IRMM469 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| 4% PFA | Labmed Solutions | 200-001-8 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| 70% ethanol | Histolab | Immunocytochemie; Sectie 6 | |
| ABC Elite kit: Biotin-Streptavidin detectiekit | Vector | PK6102 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Absolute ethanol | Histolab | 1399.01 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Adenine | Sigma-Aldrich | A8626 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| Atropine 25 μg/kg | Temgesic, RB Pharmaceuticals, Great Britain | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Azaperone 2 mg/kg | Stresnil, Janssen-Cilag, Pharma, Austria | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Biosafety Level 2 kap | Kunststofcompressie; Sectie 4 | ||
| Blocking oplossing: Normaal serum van dezelfde soort als de secundaire secundaire antilichaam werd gegenereerd in. | Vector | De blocking oplossing hangt af van de oorsprong van eerste antilichaam | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Buprenorphine 45 μg/kg | Atropin, Mylan Inc, Canonsburg, PA | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Carprofen 3 mg/kg | Rimadyl, Orion Pharma, Sweden | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Chlorhexidine gluconate | Hibiscrub 40 mg/mL, Regent Medical, England | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Cholera toxine | Sigma-Aldrich | C8052 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| Coplin pot: kleuring pot voor koken | Histolab | 6150 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Roestvrij mal (33 mm x 22 mm x 10 mm) op maat gemaakt | Kunststofcompressie; Sectie 4 | ||
| DMEM | Gibco | 3188-5023 | Kunststofcompressie sectie 4. Op ijs bewaren wanneer het gebruikt wordt in kunststofcompressie |
| Epidermale groeifactor | Sigma-Aldrich | E9644 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| Ethilon (niet-absorbeerbaar monofilament voor huidsutures) | Ethicon | Chirurgie, Sectie 1 | |
| Fetaal bovien serum (FBS) | Gibco | 10437-036 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| Pincet (Adison met tand) | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | ||
| Gazeverbinding (Gazin Mullkompresse) | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | ||
| Ham's F12 | Gibco | 31765-027 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| Hematoxylinen | Histolab | 1820 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Vochtopvangkamer | DALAB | Immunocytochemie; Sectie 6 | |
| Hydrocortison | Sigma-Aldrich | H0888 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| Waterstofperoxide Oplossing 30% | Sigma-Aldrich | H1009 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Insuline | Sigma-Aldrich | I3536 | In vitro kweek; Sectie 5 |
| Isofluraan | Isofluraan, Baxter, Deerfield, IL | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Lidocaine 5 mg/ml | Xylocaine, AstraZeneca, Sweden | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Lucose 25 mg/ml | Baxter, Deerfield, IL | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Markeerstift pap pen | Sigma-Aldrich | Z377821-1EA | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| Medetomidine 25 μg/kg | Domitor, Orion Pharma, Sweden | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| Snijplotter | Applied Tissue Technologies LLC | Bereiding van gesneden weefsel, sectie 2 | |
| Monocryl (absorbeerbaar monofilament) | Ethicon | Chirurgie, Sectie 1 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | Immunocytochemie; Sectie 6 |
| NaOH 1 N | Merck Millipore | 106462 | Kunststofcompressie sectie 4 en celkweek |
| Nylon gaas, 110 μM dik poriëngrootte 0.04 sqmm | Kunststofcompressie; Sectie 4 | ||
| Oculentum simplex APL: zalf voor oogbescherming | APL | Vnr 336164 | Chirurgie, Sectie 1 |
| PBS | Gibco | 14190-094 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| Penicilline-Streptomycine | Gibco | 15140-122 | Kunststofcompressie sectie 4 |
| Fenobarbital 15 mg/kg | Pentobarbital, APL, Sweden | Voorbereiding van het dier voor de operatie, Sectie 1 | |
| PCL Gebreid textiel | Kunststofcompressie; Sectie 4 | ||
| Rattenstaart collageen | First LINK, Ltd, UK | 60-30-810 | Kunststofcompressie sectie 4, op ijs bewaren |
| Schelpmes - 15 | Voorbereiding van het |
Referenties
- Rheinwald, J. G., Green, H. Serial cultivation of strains of human epidermal keratinocytes: the formation of keratinizing colonies from single cells. Cell. 6, 331-343 (1975).
- Fossum, M., Nordenskjold, A., Kratz, G. Engineering of multilayered uri....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
