Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Met behulp van Caco-2 cellen te Lipid Transport studie van de Darm

19.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/53086

⸱

20 augustus 2015

 , 
1Department of Pharmaceutical and Biomedical Sciences, College of Pharmacy, California Northstate University, 2Department of Biomedical Sciences, James H. Quillen College of Medicine, East Tennessee State University

In dit artikel

Samenvatting

Caco-2 cellen kunnen dienen als een in vitro model om het enterocyt transport van lipiden, en in vet oplosbare geneesmiddelen/vitaminen te bestuderen. Het permeabele membraansysteem scheidt het apicale van het basolaterale compartiment, terwijl het lentivirusuitdrukkingssysteem een effectieve genoverexpressiemethode biedt. De isolatie van lipoproteïnen wordt bevestigd door TEM.

Samenvatting

Studies van de absorptie van dieetvetten worden over het algemeen uitgevoerd met behulp van een diermodel dat is uitgerust met een lymfekatheter. Hoewel dit diermodel algemeen wordt geaccepteerd als het in vivo model van absorptie van dieetvetten, zijn de chirurgische technieken die hierbij betrokken zijn uitdagend en duur. Genetische manipulatie van het diermodel is ook kostbaar en tijdrovend. Het alternatieve in vitro model is misschien wel betaalbaarder, tijdbesparend en minder uitdagend. Belangrijk is dat het in vitro model onderzoekers in staat stelt de enterocyten als een geïsoleerd systeem te onderzoeken, waardoor de complexiteit die inherent is aan het model van het hele organisme wordt verminderd. Dit artikel beschrijft hoe humane coloncarcinoomcellen (Caco-2) kunnen dienen als een in vitro model om de transport van lipiden door enterocyten te bestuderen, evenals van lipofielen geneesmiddelen en vitaminen. Het legt de juiste onderhoud van Caco-2 cellen en de voorbereiding van hun lipidenmengsel uit; en het bespreekt verder de waardevolle optie om het permeabele membraansysteem te gebruiken. Omdat gedifferentieerde Caco-2 cellen gepolariseerd zijn, is het belangrijkste voordeel van het gebruik van het permeabele membraansysteem dat het het apicale van het basolaterale compartiment scheidt. Bijgevolg kan het lipidenmengsel aan het apicale compartiment worden toegevoegd, terwijl de lipoproteïnen uit het basolaterale compartiment kunnen worden verzameld. Bovendien wordt de effectiviteit van het lentivirusexpressiesysteem bij het reguleren van genexpressie in Caco-2 cellen besproken. Ten slotte beschrijft dit artikel hoe de succesvolle isolatie van intestinale lipoproteïnen kan worden bevestigd door transmissie-elektronenmicroscopie (TEM).

Inleiding

Studies van intestinale absorptie van dieetvet en vetoplosbare geneesmiddelen en vitaminen kunnen in vivo worden uitgevoerd door toepassing van een model lymfe fistel 1-4. De chirurgische technieken noodzakelijk zijn niet alleen moeilijk maar ook duur. Hoewel in vivo benade- fecal analyse kan worden toegepast, worden zij vooral gebruikt om het percentage opname bepaald door het maagdarmkanaal 2,5. De in vitro beschreven in dit document model is meer kosteneffectief, en de betrokken technieken zijn misschien wel minder uitdagend. Genetische modificatie studies ook economischer en minder tijdrovend wanneer ze worden uitgevoerd in deze in vitro model.

Aangezien vetoplosbare stoffen die door enterocyten genomen worden verpakt in lipoproteïnen 6,7, de doeltreffendheid van deze in vitro model lipoproteïnen produceren cruciaal. De twee belangrijkste intestinal lipoproteïnen zijn chylomicronen en lipoproteïnen zeer lage dichtheid (VLDL). Chylomicronen, gedefinieerd als lipoproteïnen met 80 nm of meer in diameter, strikt door de dunne darm wanneer lipiden zijn overvloedig aanwezig in de maag lumen. Omdat ze de grootste lipoproteïnen, chylomicronen zijn denkbaar de meest efficiënte lipide transporteurs. Deze in vitro model dat kan produceren chylomicronen 8, kan worden gebruikt om voeding vetabsorptie, vet-oplosbare vitamine absorptie door de darm en orale biologische beschikbaarheid lipofiele geneesmiddelen te bestuderen. De aanwezigheid van lipide oplosbare moleculen, vitamines of drugs in de lipoproteïne fractie is een indicator van de absorptie door de dunne darm. Zoals eerder besproken, kan dit model worden gebruikt om orale biobeschikbaarheid lipofiel geneesmiddel 6 verbeteren.

Dit artikel beschrijft hoe Caco-2 cellen permeabel membraan of vaste weefselkweekplaten, hoe de lipide mi te handhavenxture voor het stimuleren lipoproteïne produktie moet worden voorbereid, hoe lentivirus expressiesysteem kan worden toegepast om effectief overexpressie halen en hoe de lipoproteïnen die moeten worden geanalyseerd.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Onderhoud van de Caco-2 cellen

  1. Met behulp van reguliere weefselkweekschaaltjes
    1. Ontdooi de Caco-2-cellen uit een bevroren flacon door het plaatsen van de flacon in een 37 ° C waterbad en direct toevoegen aan een 10 cm weefsel kweekplaat met 10 ml voorverwarmde groeimedium (15% foetaal runderserum (FBS ) in Dulbecco's Gemodificeerd Eagle Medium (DMEM)).
      1. Wanneer de Caco-2-cellen 50-70% confluentie hebben bereikt, splitsen 1: 6 door incuberen van de cellen met 3 ml 0,05% trypsine / 0,53 mM ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) bij 37 ° C totdat zij buiten (15 min) . Om cel klonteren voorkomen, meng de cellen meerdere malen door zachte pipetteren. Voeg 0,5 ml van de cellen met trypsine behandeld met een 10 cm weefsel kweekplaat met 10 ml voorverwarmde groeimedium.
    2. Schud de gerechten meerdere malen in een voorwaartse en achterwaartse richting, gevolgd door een naar links en naar rechts richting. Vermijd wervelende de gerechtenaangezien het kan resulteren in een ongelijke cel dispersie.
    3. De schaaltjes worden op een vlak oppervlak in een met 5% CO 2 toegevoerd 37 ° C incubator. Schuine vlakken kunnen ook resulteren in een ongelijke cel dispersie.
    4. Wijzig de groeimedia dag na aanvang van de incubatie.
    5. Bewaken van de cellen en noteer de dag dat ze samenvloeiing bereiken. Het duurt ongeveer 1 week duren voordat de cellen samenvloeiing bereiken vanaf de dag dat ze worden gesplitst.
    6. Wijzig de groei media twee keer per week voor de cellen te bereiken samenvloeiing. Zodra de cellen samenvloeiing bereikt hebben, veranderen de groei media om de andere dag. Nadat de cellen zijn 7-dagen na de samenvloeiing, veranderen de groei media dagelijks.
      Opmerking: De cellen zijn klaar voor experimenten wanneer zij 13 dagen na confluente (figuur 1). Omdat de cellen uiteindelijk minder effectief in het produceren van lipoproteïnen wordt, gebruiken cellen die 13 tot 17 dagen na confluent 8. Ga naar stap 3 over hoe om het experiment uit te voeren.
  2. De permeabele membraansysteem
    1. Zaad van de Caco-2-cellen in het permeabele membraan insert zoals beschreven in stap 1.1.1.1. hierboven. Vermijd het gebruik van cellen van een bevroren flesje omdat hun celgroei is normaal gesproken langzamer (herstelperiode). In het kort, voeg 0,5 ml van de cellen met trypsine behandeld om de apicale kamer (bovenste compartiment) die 10 ml van voorverwarmd groeimedium bevat. Ook, voeg 10 ml van voorverwarmd groeimedium aan de basolaterale kamer (onderste magazijn).
      Opmerking: Voor de beste praktijken, voeg de groei media om de apicale kamer en vervolgens naar de basolaterale kamer. Bij het verwijderen van de oude media, verwijder de basolaterale media voordat de apicale media. Vermijd porren het polycarbonaat membraan als het kan het membraan scheuren.
    2. Door de slechte cel zicht door het polycarbonaat membraan, zaad de Caco-2-cellen in een regelmatig weefselkweekplaat met gelijke dichtheid, en deze schotel naar de celconfluentie beoordelen.
    3. Volg sTEPs 1.1.2-1.1.6 boven.

2. Gene Overexpressie

  1. Met behulp van de reguliere transfectie aanpak
    1. Zaad van de Caco-2-cellen op een weefselkweek schotel, zoals beschreven in 1.1.1.1.-1.1.4.
      Opmerking: Wanneer de cellen zijn ongeveer 40-50% confluent, zijn ze klaar om te worden getransfecteerd.
    2. Voeg 67 ul van het transfectie reagens om 472 ui van de verminderde serum media in een microcentrifugebuis. Vermijd contact van het onverdunde transfectiereagens met de buiswand.
    3. Voeg 23 ug pLL3.7 versterkt groen fluorescent proteïne (eGFP) 9 in het transfectiereagens / verlaagde serum medium mengsel.
    4. Incubeer het mengsel gedurende 20 min bij kamertemperatuur.
    5. Vervang de Caco-2 cellen groeimedia met 8 ml 10% FBS in DMEM.
    6. Voeg de DNA / transfectiereagens / verminderd serum media mengsel druppelsgewijs aan het gerecht.
    7. Schud de gerechten meerdere malen in een voorwaartse en backward richting gevolgd door een naar links en naar rechts richting.
    8. Zet de schaal in de 37 ° C incubator.
    9. Vervang het medium in de schaal met 10 ml groeimedium dag na aanvang van de incubatie.
    10. Controleer de genexpressie.
      1. Monitor genexpressie zonder 4 ', 6-diamidino-2-fenylindool (DAPI) kleuring. Met behulp van een fluorescentiemicroscoop, bepaalt het percentage cellen die groen zijn. Het percentage is de transfectie-efficiëntie.
      2. Controleer de genexpressie met DAPI kleuring.
        1. Was de cellen met met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) driemaal.
        2. Fixeer de cellen door toevoeging van 10 ml van 4% formaldehyde in PBS (10 min incubatie bij kamertemperatuur).
        3. Was de cellen met PBS driemaal.
        4. Incubeer de cellen in het donker gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur met 8 ml PBS dat 1: 500 DAPI, 1% BSA, 0,01% digitonine.
        5. Was de cellen met PBS driemaal.
        6. Uzing een fluorescentiemicroscoop Bepaal het aantal cellen die groen / blauw ten opzichte van die die blauw (figuur 2 bovenste paneel). Het berekende percentage geeft de transfectie-efficiëntie.
  2. De lentivirus overexpressie systeem 10
    1. Seed humane embryonale nier (HEK) 293T-cellen in een 15 cm weefsel kweekplaat (10% FBS in DMEM hun groeimedium).
      Opmerking: Wanneer de cellen zijn ongeveer 60-70% confluent, zijn ze klaar om te worden getransfecteerd.
    2. Voeg 162 ul van het transfectie reagens 1133 pl van het verminderde serum media in een microcentrifugebuis 11. Vermijd contact van het onverdunde transfectiereagens met de buiswand.
    3. Voeg 24 ug pLL3.7 eGFP (of een andere constructie), 15,6 ug Rev response-element (RRE), 6,0 ug REV, en 8,4 ug vesiculaire stomatitis virus glycoproteïne (VSVG) in de transfectiereagens / reduced serum media mengsel.
    4. Incubeer het mengsel gedurende 20 min bij kamertemperatuur.
    5. Vervang de groeimedia met 16 ml 10% FBS in DMEM.
    6. Voeg de DNA / transfectiereagens / verminderd serum media mengsel druppelsgewijs aan het gerecht.
    7. Schud de gerechten meerdere malen in een voorwaartse en achterwaartse richting, gevolgd door een naar links en naar rechts richting. Het is normaal om een ​​aantal van de HEK293T cellen losgemaakt op dit punt te zien.
    8. Zet de schaal in de incubator.
    9. Na 24 uur incubatie, de plaats van de media in de schaal met 25 ml van de groei media.
    10. Op de volgende dag, het verzamelen van de groei media met de lentivirus (eerste collectie).
    11. Herhaal stap 2.2.10 meer lentivirus (de tweede collectie) te verzamelen.
    12. Verzamel de eerste en de tweede verzamelhouder en verwijder celresten door centrifugeren (2500 x g gedurende 5 minuten).
    13. Filter de collectie met een wegwerp fles-top filter (0,45 pm porie), enconcentreren van het virus door centrifugeren de collectie van 31.400 xg gedurende 2 uur bij RT (JA-20 rotor). Merk de bodem van de centrifugebuis wanneer de pellet is gelegen. Giet het supernatant en laat de buis omgekeerd bij KT gedurende 15 min.
    14. Resuspendeer de virus-bevattende pellet met 100 pi 1X PBS. Vermijd bubbels.
    15. Bewaar de geconcentreerde virus bij -80 ° C. Vermijd vries-dooi cycli.
    16. Bepaal de optimale hoeveelheid virus die nodig is om de Caco-2-cellen te transduceren door middel van titratie. Om kosten te besparen, gebruikt een 24-well plaat (0,3 ml groeimedium / putje) in plaats van een 10 cm weefselkweekschaal titratie.
      1. Voeg toenemende hoeveelheden van het geconcentreerde virus (0, 1, 2, 5, 10, 25, en 50 gl / putje) aangevuld met polybreen (eindconcentratie = 5 ug / ml) aan de 40-70% confluent Caco-2-cellen. Schud de 24-well plaat voorzichtig zoals beschreven in 1.1.2.
      2. Toezicht op hun genexpressie (stap 2.1.10.) (Figuur 2 bottom4 panelen).
    17. Omdat de expressie van transgene algemeen wordt volgehouden, handhaven van de getransduceerde cellen voor toekomstige experimenten en voortdurend hun genexpressie controleren (stap 2.1.10.).

3. Het stimuleren van de Lipoprotein Afscheiding

  1. De reguliere weefselkweekplaat
    1. Bereid een 100X lipide mengsel door mengen van 50 mg oliezuur, 40 mg lecithine en 48 mg natrium taurocholaat. Breng het volume tot 900 ul met PBS (genoeg voor 8 gerechten). Vortex de lipidemengsel krachtig.
    2. Voeg 900 ul van de 100X lipide mengsel in 89,1 ml groeimedium. Meng en filteren de lipide bevattende media. De eindconcentraties (1X) oliezuur, lécithine, en natriumtaurocholaat zijn 2,0 mM, 1,36 mM en 1,0 mM, respectievelijk.
    3. Voeg 10 ml van het lipide bevattende media op de cellen.
    4. Incubeer de cellen met de lipiden bevattende media voor 4 uur in een 37° C incubator.
    5. Was de cellen met PBS driemaal.
    6. Voeg 10 ml van het kweekmedium om de cellen aan het lipoproteïne secretie verzamelen.
    7. Incubeer 2 uur in een 37 ° C incubator.
    8. Verzamel de lipoproteïne-bevattende media.
  2. De permeabele membraansysteem
    1. Volg de stappen 3.1.1-3.1.2 aan de lipide mengsel te bereiden.
    2. Voeg 10 ml van het lipide bevattende media om de apicale kamer en 10 ml van het kweekmedium aan de basolaterale kamer.
    3. Incubeer gedurende 4 uur in een 37 ° C incubator. Verzamel de lipoproteïne-bevattende media in de basolaterale kamer.

4. Lipoproteïne afzonderlijk (figuur 3)

  1. Verwijder de celresten van het lipoproteïne bevattende medium door centrifugeren (2000 x g gedurende 5 minuten).
  2. Giet het medium in een 50 ml buis.
  3. Voeg 5,95 g natriumchloride aan de media.
  4. Als de sample worden geanalyseerd door TEM, voeg 1 proteaseremmer cocktail tabletten de integriteit van de lipoproteïnen handhaven.
  5. Breng het volume op 23 ml met water (1,2 g / ml NaCl-density oplossing).
  6. Los het volledig opgeloste stoffen.
  7. Giet alle oplossing in een polycarbonaat ultracentrifuge buis.
  8. Overlay voorzichtig de 1,2 g / ml oplossing dichtheid met 0,5 ml water (1,0 g / ml dichtheid).
  9. De balans van de buis van het gewicht en niet door volume.
  10. Voorzichtig laden van de buizen in de T865 rotor.
  11. Spin de monsters in de ultracentrifuge bij 429.460 xg gedurende 24 uur bij 4 ° C.
  12. Onmiddellijk isoleren van de top 0,5 ml oplossing door zachte pipetteren. Houd de buis zo stil mogelijk.

5. TEM Analyse

  1. Bereid 5 ml 2% fosfowolfraamzuur (w / v) en breng de pH op 6,0.
  2. Filter de 2% fosfowolfraamzuur met een spuitfilter (poriegrootte: 0,2 urn).
  3. Drop 20 ui van het lipoproteïne monster op een steriele schaal.
  4. Drop 20 ul van de gefiltreerde 2% fosfowolfraamzuur naast het monster op dezelfde schaal.
  5. Zachtjes laten vallen een EM rooster met de saaie kant rust op het monster.
  6. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 min.
  7. Tik zachtjes tegen de zijkant van de EM rooster op een filter papier om het monster uit het rooster te verwijderen.
  8. Voorzichtig laat de EM rooster met de saaie kant rust op de 2% fosfowolfraamzuur.
  9. Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 min.
  10. Tik zachtjes tegen de zijkant van de EM rooster op een filter papier om de fosfowolfraamzuur uit het rooster te verwijderen.
  11. Met een TEM, vangen de beelden van de lipoproteïnen (figuur 4).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 1 toont de normale 13-dagen na de samenvloeiing Caco-2-cellen. Het uiterlijk van de koepelvormige constructies en intracellulaire vetdruppels zijn kenmerkend gedifferentieerde Caco-2-cellen. Wanneer de Caco-2 cellen niet gelijk tijdens het zaaien worden gedispergeerd, ze klonteren en overgroei in bepaalde gebieden van de schaal; en er een aantal gebieden in de schotel hiervoor geen enkele cellen. Het wervelen en het plaatsen van de schotel op een hellend oppervlak moet worden vermeden. Het is ook...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In dit document kunnen de twee systemen die kunnen worden gebruikt voor het onderhoud Caco-2 cellen zijn beschreven, namelijk de normale weefselkweek schaal en de permeabele membraan. De voordelen van het permeabele membraan systeem omvatten de scheiding van de apicale en basolaterale compartimenten en de mogelijkheid om het lipide mengsel incubeer en laat het lipoproteïne secretie tegelijk. De permeabele membraan inserts zijn duur en hun polycarbonaatmembraan laat geen goede mobiele zicht. Een van de voordelen van deze...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteur heeft niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door de Seed Grant Award van California Northstate University College of Pharmacy (aan AMN). De auteurs willen California Northstate University College of Pharmacy bedanken voor het dekken van de publicatiekosten van dit artikel, en George Talbott voor zijn hulp bij het redigeren van dit manuscript.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMEMVWR16750-112Verwarm het groeimedium in individuele weefselkweekschalen voor het toevoegen van cellen
FBSFisher3600511We inactiveren ons serum niet door verhitting
TrypsinVWR45000-660Cellen kunnen worden gewassen met PBS voorafgaand aan trypsinebehandeling
Permeabel membraansysteemFisher720017310-cm schaal, 3-mm poriëngrootte, polycarbonaatmembraan
10 cm schaalFisher08-772-EWeefselkweekschaal
15 cm schaalFisher08-772-24Weefselkweekschaal
24 wel plaatFisher12565163Weefselkweekplaat
Lipid-gebaseerde transfectiereagensFisherPRE2691Kan worden vervangen door een ander transfectiereagens
Gereduceerd serummediumInvitrogen11058021Voor transfectie
pLL3.7 eGFPAddgene11795https://www.addgene.org/11795/
Fles-top filterFisher97611200,45 mm poriën
PolybreenFisherNC984045410 mg/ml
OleinzuurSigma01383-5GBevries-ontdooicyclus voorkomen
Lecithine FisherIC10214625Eierlecithine 
NatriumtaurocholaatFisherNC9620276Product niet meer leverbaar; alternatief catalogusnummer: 50-121-7956
Protease-remmercocktailtablet (EDTA-vrij)Fisher5892791001Wordt voornamelijk gebruikt voor monsters die TEM-analyse nodig hebben
Polycarbonaat ultracentrifugebuisFisherNC9696153Meerdere keren hergebruiken zal de buis doen instorten
Deksel voor ultracentrifugebuisFisherNC9796914Er is een gereedschap nodig om de buis/deksel uit de rotor te verwijderen
SpuitFisher50-949-261Wegwerp
SpuitfilterFisher09-719CPoriëngrootte = 0,2 mm; nylon
FosfowolfraamzuurFisherAC208310250Voor het bereiden van 2% fosfowolfraamzuur, pH 6,0
PincetFisher50-238-62Extra fijne en sterke uiteinden
Formvar/koolstof rasterFisher50-260-34Formvar/koolstoffilm vierkant raster 400 Koper

Referenties

  1. Drover, V. A., et al. CD36 deficiency impairs intestinal lipid secretion and clearance of chylomicrons from the blood. J Clin Invest. 115 (5), 1290-1297 (2005).
  2. Nauli, A. M., et al. CD36 is important for chylomicron formation and secretion and may mediate cholesterol uptake in the proximal intestine. Gastroenterology. 131 (4), 1197-1207 (2006).
  3. Nauli, A. M., Zheng, S., Yang, Q., Li, R., Jandacek, R., Tso, P. Intestinal alkaline phosphatase release is not associated with chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 284 (4), G583-G587 (2003).
  4. Lo, C. -M., et al. Why does the gut choose apolipoprotein B48 but not B100 for chylomicron formation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 294 (1), G344-G352 (2008).
  5. Jandacek, R. J., Heubi, J. E., Tso, P. A novel, noninvasive method for the measurement of intestinal fat absorption. Gastroenterology. 127 (1), 139-144 (2004).
  6. Nauli, A. M., Nauli, S. M. Intestinal transport as a potential determinant of drug bioavailability. Curr Clin Pharmacol. 8 (3), 247-255 (2013).
  7. Tso, P., Nauli, A., Lo, C. M. Enterocyte fatty acid uptake and intestinal fatty acid-binding protein. Biochem Soc Trans. 32 (Pt 1), 75-78 (2004).
  8. Nauli, A. M., Sun, Y., Whittimore, J. D., Atyia, S., Krishnaswamy, G., Nauli, S. M. Chylomicrons produced by Caco-2 cells contained ApoB-48 with diameter of 80-200 nm. Physiol Rep. 2 (6), (2014).
  9. Rubinson, D. A., et al. A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells, stem cells and transgenic mice by RNA interference. Nat Genet. 33 (3), 401-406 (2003).
  10. Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. Production of lentiviral vectors for transducing cells from the central nervous system. J Vis Exp. (63), e4031(2012).
  11. Pottekat, A., et al. Insulin biosynthetic interaction network component, TMEM24, facilitates insulin reserve pool release. Cell Rep. 4 (5), 921-930 (2013).
  12. Van Greevenbroek, M. M., van Meer, G., Erkelens, D. W. Effects of saturated, mono-, and polyunsaturated fatty acids on the secretion of apo B containing lipoproteins by Caco-2 cells. Atherosclerosis. 21 (1), 139-150 (1996).
  13. Levy, E., Yotov, W., Seidman, E. G., Garofalo, C., Delvin, E., Ménard, D. Caco-2 cells and human fetal colon: a comparative analysis of their lipid transport. Biochim Biophys Acta. 1439 (3), 353-362 (1999).
  14. Luchoomun, J., Hussain, M. M. Assembly and secretion of chylomicrons by differentiated Caco-2 cells. Nascent triglycerides and preformed phospholipids are preferentially used for lipoprotein assembly. J Biol Chem. 274 (28), 19565-19572 (1999).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Permeabel membranesysteemnatriumchloride-dichtheidsgradiënt-ultracentrifugatietransmissie-elektronenmicroscopielipoproteïnesecretiechylomicronanalyselentivirale expressiesysteemisolatie van intestinale lipoproteïnenbereiding van lipidmengsel
Met behulp van Caco-2 cellen te Lipid Transport studie van de Darm
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.