Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Laterale Septal Nucleus- en Striatum-specifieke

27.8K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/53303

⸱

18 januari 2016

 , 
1TARC (Translational Animal Research Center), University Medical Center, JGU Mainz

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft in detail hoe specifiek te transfecteren verschillende regio's in het centrale zenuwstelsel van C57BL/6 via in utero elektroporatie. Inbegrepen in dit protocol zijn gedetailleerde instructies voor transfecties van regio's die zich ontwikkelen tot de cortex, hippocampus, thalamus, hypothalamus, laterale septumkern en striatum.

Samenvatting

In utero elektroporatie is een veel gebruikte techniek voor snelle en efficiënte ruimte-tijdelijke manipulatie van verschillende genen in het centrale zenuwstelsel van knaagdieren. Overexpressie van gewenste genen is net zo mogelijk als shRNA-gemedieerde verlies-van-functie studies. Daarom biedt het een breed scala aan toepassingen. De haalbaarheid om specifieke cellen in een bepaald gebied te targeten, vergroot verder het scala aan mogelijke toepassingen van deze zeer nuttige methode. Voor efficiënt targeten van specifieke regio's is kennis over de subtiliteiten, zoals het embryonale stadium, de aan te brengen spanning en het belangrijkste de positie van de elektroden, onmisbaar.

Hier bieden we een gedetailleerd protocol dat specifiek en efficiënt in utero elektroporeren van verschillende regio's van het centrale zenuwstelsel van de C57BL/6 muis mogelijk maakt. In het bijzonder wordt getoond hoe regio's te transfecteren die zich ontwikkelen tot de retrospleniale cortex, de motorische cortex, de somatosensorische cortex, de piriforme cortex, de cornu ammonis 1-3, de dentate gyrus, het striatum, de laterale septumkern, de thalamus en de hypothalamus. Voor dit worden informatie over het geschikte embryonale stadium en de geschikte spanning voor het corresponderende embryonale stadium verstrekt. Het belangrijkste is een hoeken-kaart, die de geschikte positie van de positieve pool aangeeft, die wordt afgebeeld. Dit gestandaardiseerde protocol helpt om efficiënte in utero elektroporatie te vergemakkelijken, wat ook kan leiden tot een verminderd aantal dieren.

Inleiding

Sinds de eerste beschrijving in 2001 door drie onafhankelijke groepen 1-3 i n utero elektroporatie is een veel gebruikte standaard voor de analyse van genexpressie bij knaagdieren centrale zenuwstelsel. Vergeleken met het genereren van knockout muizen, die ondanks continue verbetering van de technieken, nog tijd en geld kost, de in utero elektroporatie beroep vanwege zijn eenvoud. Dus, in de baarmoeder elektroporatie maakt snel en efficiënt gain en verlies-van-functie studies 4.

Om de cerebrale gebieden transfecteren, wordt de oplossing die de negatief geladen plasmide geïnjecteerd in een hartkamer. Tijdens de elektrische puls, de negatief geladen DNA migreert naar de positieve pool en derhalve de getransfecteerde gebied kan eenvoudig worden geselecteerd door het veranderen van de positie van de positieve pool. Het is herhaaldelijk aangetoond dat talrijke gebieden van het centrale zenuwstelsel kan worden targeted 3,5-8. Bijvoorbeeld, recente studies tonen specifieke transfecties van de hippocampus, de piriformis cortex of het striatum 9-11. De informatie over de geschikte posities zijn vaak slechts nauwelijks gestandaardiseerd en zijn niet altijd eenvoudig tussen verschillende muizenstammen.

Transfectie van bepaalde embryonale stadia verre van triviaal. Vele invloedsfactoren moet rekening worden gehouden bij de keuze van de set-up voor de specifieke in de baarmoeder elektroporatie. Eerst optimaal transfecteren de respectievelijke embryonale stadia, is kennis over de juiste voltages vereist. Hoge spanningen verminderen de overlevingskans, terwijl lage spanningen verminderen van de transfectie-efficiëntie 2,3,12. Ook de grootte van de elektrode peddel speelt een cruciale rol, omdat het gebruik van elektrode peddels te grote uitslagen in gereduceerde specificiteit of kan de dood veroorzaken door aantasting van het hartritme 4,12,13. De toegepastespanning en de grootte en de positie van de elektrode schoep zijn de belangrijkste kenmerken te overwegen, maar er zijn ook andere factoren die de uitkomst van de elektroporatie, zoals de toegepaste hoeveelheid DNA-oplossing.

We hebben een gedetailleerd protocol dat snelle en efficiënte transfectie van diverse cerebrale gebieden van de C57BL / 6 muis 12 maakt ontwikkeld. In dit protocol gedetailleerde informatie over de spanningen worden gebruikt en de afmeting van de elektrode peddel voor verbeterde specificiteit verschaft. Verdere informatie over het ventrikel te vullen met aanbevelingen voor de hoeveelheid plasmide-oplossing en de positie van de elektrode wordt geleverd. De aanduiding van de gedetailleerde positie-informatie in de kaart en de verdere visualisatie van deze posities mogelijk maakt eenvoudige specifiek en efficiënt in utero elektroporatie van de retrospleniale cortex, de motorische cortex, de somatosensorische cortex, de piriformis cortex t,Hij cornu ammonis 1-3, de dentate gyrus, de striatum, de laterale septum nucleus, de thalamus en hypothalamus.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Ethiek Verklaring: De behandeling van de muizen en de experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Europese, nationale en institutionele richtlijnen voor de verzorging van de dieren.

1. In Utero Elektroporatie

Opmerking: In utero elektroporatie werd uitgevoerd zoals eerder gepubliceerd 12,14. Derhalve is de werkwijze slechts kort hieronder beschreven (figuur 1).

  1. Voorbereidingen
    1. Bereid snel groen gekleurde endotoxinevrij geavanceerde transfectie-grade plasmide-oplossing (met daarin 1,5 pCAGGS) zoals eerder beschreven 12.
    2. Trek en grind (35 ° hoek) borosilicaatglas haarvaten (0,8-0,9 diameter) voor injecties.
    3. Steriliseren instrumenten.
  2. Chirurgie
    1. Dien analgetica (carprofen, 4 mg / kg lichaamsgewicht, sc, 24 uur depot) ten minste 30 minuten voordat de operatie.
    2. Houd de lengte vande anesthesie maximaal 35-45 min (Fase III - fase van chirurgische anesthesie volgens Guedel 15 - maximaal 25-30 min).
    3. Verdoven getimede zwangere muizen met isofluraan (inductie in een kamer: 2,8%, een operatie via masker: 2,5%). Bevestig verdoving door ongevoeligheid tot teen-snuifje.
    4. Gelden oogzalf om eye-droogheid tijdens anesthesie te voorkomen.
    5. Steriliseren van de chirurgische gebied met 7,5% providon-Jodium-oplossing en hebben betrekking op de muis met een steriel gaasje (vochtig met 0,9% benzylalcohol zoutoplossing) met alleen de chirurgische gebied blootgelegd.
    6. Opengesneden de buikholte met een scalpel (huidincisie: 1,5-2 cm, spier incisie: 1-1,5 cm).
    7. Het behoud van de open buikholte uitdroogt door het bevochtigen met verwarmde 0,9% benzylalcohol zoutoplossing of andere steriele isotone oplossing zoals voorgeschreven door het veterinaire personeel of commissie.
    8. Zorgvuldig te extraheren baarmoederhoorns (met ring tang, doen de baarmoeder met de vinger aanrakens).
  3. Injectie van DNA en elektroporatie. Opmerking: De exacte details voor het richten op specifieke regio's zijn vermeld in paragraaf 2.
    1. Injecteer langzaam de gekleurde DNA-oplossing in de ventrikel zoals in figuur 1 en punt 2 via de bereide borosilicaat capillairen.
    2. Breng de juiste spanning voor de overeenkomstige embryonale fase (bijv., 36-38 V voor E14) via gespecialiseerde tang-type platina-elektroden (interval cyclus lengte 50 msec, interval pauze 950 msec). Pulse de elektroporatie peddels tijdens het aanbrengen van de spanning op beschadiging van de baarmoederwand te minimaliseren.
  4. Bericht elektroporatie / post-operatieve zorg
    1. Plaats voorzichtig de uterine hoorns in de buikholte.
    2. Hechtdraad de spieren en de huid incisie afzonderlijk.
    3. Laat de muis rusten op een thermische ondersteuning apparaat voor het herstel.
    4. Begeleiden de muis tijdens het herstel (gedrag, voer enwaterverbruik), 4 uur, 24 uur en 48 uur na de operatie. Eventueel toepassen aanvullende analgetica (carprofen, 4 mg / kg lichaamsgewicht, 24 uur depot) voor 2 dagen.

2. Transfectie van specifieke Cerebral Gebieden

Opmerking: De positie van de positieve pool wordt weergegeven als de hoek tussen de verticale middellijn door de ventrikel gevuld met de DNA-oplossing (rechts of derde ventrikel) en de positie van de positieve pool. Bij het vullen van de linker hartkamer posities zijn spiegelbeeld. In figuur 4 de posities van het oor primordiale getoond, die belangrijke referentiepunten verschaffen.

  1. Transfectie van corticale gebieden (figuur 2A, Tabel 1).
    1. Voeren chirurgie zoals beschreven in paragraaf 1.2. Voor de in utero elektroporatie van corticale gebieden gebruiken E14 embryo.
    2. Injecteer 1,5-2 pl DNA-oplossing bevattende 4 ug DNA in de rechter laterale ventrikelvia de bereide borosilicaat capillairen.
      1. De positie van de embryo zorgvuldig met behulp van een tang de ring, zodat er geen zichtbare schepen boven de prikplaats.
      2. Injecteer langzaam de DNA-oplossing ongeveer 0,75 mm van de coronale lambdoidal hechtdraad en 0,5 mm lateraal van de pijlnaad (figuur 3). Zorg ervoor dat de insteekdiepte is 1,2 mm (E14, gemeten vanaf de baarmoederwand). Controleer op een blauw-groene kleur met een scherpe afbakening.
    3. Solliciteer spanning via de gespecialiseerde tang-type platina-elektroden (interval cyclus lengte 50 msec, interval pauze 950 msec).
      1. Gebruik een 3 of 5 mm elektrode paddle.
      2. Gebruik een spanning tussen 36-38 V.
      3. Plaats het midden van de elektroden juist anterior van het oor primordia.
      4. Om de retrospleniale cortex gebruik hoeken transfecteren 330-0 °, om de motorische cortex 0-40 ° transfecteren, aan de somatosensorische cortex 40-95 ° transfecteren, te transfecterende piriformis cortex 95-110 ° (Figuur 2A).
    4. Verrichten na elektroporatie / post-operatieve zorg, zoals beschreven in paragraaf 1.4. Offer de muizen en analyseren van de embryo's 4 dagen na elektroporatie (E18), zoals beschreven in paragraaf 3.
  2. Transfectie van de hippocampus (Figuur 2B, Tabel 1).
    1. Voeren chirurgie zoals beschreven in paragraaf 1.2. Voor de in utero elektroporatie van hippocampale formatie gebruikt E15 embryo.
    2. Injecteer 2 pl DNA-oplossing bevattende 4 ug DNA in de rechter laterale ventrikel via de voorbereide borosilicaat capillairen.
    3. Solliciteer spanning via de gespecialiseerde tang-type platina-elektroden (interval cyclus lengte 50 msec, interval pauze 950 msec).
      1. Gebruik een 3 of 5 mm elektrode paddle.
      2. Gebruik een spanning tussen 38-40.
      3. Plaats het midden van de negatieve pool net anterior van het oor primordium en het centrum of de positieve pool in het midden van het oor primordium.
      4. Om transfecteren de dentate gyrus gebruiken hoeken 190-210 °, de cornu ammonis (CA) 3 210-230 ° transfecteren om transfecteren de CA2 230-250 °, het CA1 250-275 ° (figuur 2B) te transfecteren.
    4. Verrichten na elektroporatie / post-operatieve zorg, zoals beschreven in paragraaf 1.4. Voeren analyse na volledige hippocampus formatie (na de geboorte, p21), zoals beschreven in paragraaf 3.
  3. Transfectie van het laterale septum kern en striatum (Figuur 2C, tabel 1)
    Opmerking: De hoeken overlappen met die van transfecteren van de hippocampus. Om effectief transfecteren de laterale septum kern en de striatum zonder ongewenste hippocampus transfectie eerder embryonale stadia (E12) te gebruiken.
    1. Voeren chirurgie zoals beschreven in paragraaf 1.2. Voor de in utero elektroporatie van de laterale septum kern en striatum gebruikt E12 embryo.
    2. Injecteer 1 pl DNA-oplossing bevattende 4 ug DNA in de rechter laterale ventrikel via de voorbereide borosilicaat capillairen.
    3. Solliciteer spanning via de gespecialiseerde tang-type platina-elektroden (interval cyclus lengte 50 msec, interval pauze 950 msec).
      1. Gebruik een 0,5 mm elektrode.
      2. Gebruik 33 V.
      3. Plaats het midden van de elektroden ter hoogte van het oor primordia.
      4. Om de laterale septum nucleus gebruik hoeken transfecteren 100-170 °, het striatum 170-240 ° (figuur 2C) te transfecteren.
    4. Verrichten na elektroporatie / post-operatieve zorg, zoals beschreven in paragraaf 1.4. Offer de muizen en analyseren van de embryo's 6 dagen na elektroporatie (E18), zoals beschreven in paragraaf 3.
  4. Transfectie van de thalamus en hypothalamus (figuur 2D, tabel 1)
    1. Voeren chirurgie zoals beschreven in paragraaf 1.2. Voor de in UTero elektroporatie van de thalamus en de hypothalamus gebruik E12-E13 embryo's.
    2. Injecteer 1-1,5 pl DNA-oplossing bevattende 4 ug DNA in het laterale ventrikel (links of rechts) via de bereide borosilicaat capillairen. Wacht 2-3 min, totdat de oplossing wordt gediffundeerd in het derde ventrikel. U kunt ook rechtstreeks te injecteren in het derde ventrikel.
      Opmerking: Dit verhoogt de specificiteit, maar zou een verminderde overleving (hoog risico op schade) veroorzaken.
    3. Solliciteer spanning via de gespecialiseerde tang-type platina-elektroden (interval cyclus lengte 50 msec, interval pauze 950 msec).
      1. Gebruik een 0,5 of 3 mm elektrode.
      2. Gebruik een spanning tussen 33-35 V.
      3. Plaats het midden van de elektroden juist achter het oor primordia.
      4. Om de thalamus gebruik hoeken transfecteren 25-40 °, de hypothalamus 90-180 ° (figuur 2D) te transfecteren.
    4. Verrichten na elektroporatie / post-operatieve zorg als described in paragraaf 1.4. Offer de muizen en analyseren van de embryo's 6 dagen na elektroporatie (E18), zoals beschreven in paragraaf 3.

3. Perfusie Fixatie

  1. Voorbereidingen
    1. Warm 4% paraformaldehyde (PFA) tot 37 ° C.
    2. Vul een 50 ml spuit met PBS (4 ° C) en een tweede spuit met verwarmd PFA. Vermijd bubbels.
    3. Sluit de spuiten om een ​​drie-weg kraan. Sluit de derde einde aan een gevleugelde infusieset (vlinder).
    4. Spoel de gevleugelde infusieset met PBS.
  2. Perfusie
    1. Diep verdoven de muizen (zwanger of postnatale getransfecteerd) met subcutane toepassing van ketamine hydrochloride (60 mg / kg) en xylazine (7,5 mg / kg).
    2. Bevestig de chirurgische tolerantie stadium door ongevoeligheid tot teen-snuifje.
    3. Open de buikholte net onder de ribbenkast.
    4. Knip voorzichtig het middenrif.
    5. Open de ribbenkast zorgvuldig via een snee in each website tot het sleutelbeen.
    6. Steek de punt van de vlinder in de linker hartkamer (vanaf de apex van het hart).
    7. Snijd de linker hartoor.
    8. Langzaam perfuseren de muis met PBS (ongeveer 10 ml).
    9. Zet de drie-weg kraan.
    10. Perfuseren de muis met 5-10 ml 4% PFA.
    11. Onthoofden de muis met een schaar en ontleden van de hersenen te beginnen bij het foramen magnum. Voer de dissectie reeds vroeger 16.
    12. Postfixate de hersenen voor 2 dagen in 4% PFA. Houd de hersenen bij 4 ° C in het donker.

4. Immunohistochemie

  1. Genereer 70 urn secties (bijvoorbeeld een vibratome).
  2. Optioneel: Verbeter fluorescentie met antilichaamkleuring.
    1. Blokkeer de secties 1 uur bij RT (0,1-0,2% Triton X-100, 5% normaal geit serum)
    2. Incubeer O / N met het geschikte antilichaam (anti-GFP, 1: 1000)
    3. Was 3-5 Malen met 0,1 M fosfaatbuffer.
    4. Incubeer 3-5 uur met de geschikte fluorescentie-geconjugeerd secundair antilichaam (Alexa Fluor 488-geconjugeerd anti-konijnen IgG, 1: 1000).
    5. Optioneel: tegenkleuring met 4-6-diaminodino-2-fenylindol (DAPI, 0,2 g / ml in 0,1 M fosfaatbuffer) gedurende 1 min.
    6. Analyseer fluorescentie met een passende fluorescentiemicroscoop.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Figuur 2 toont voorbeelden van de specifieke in de baarmoeder elektroporatie van de regio te ontwikkelen in de retrospleniale cortex, de motorische cortex, de somatosensorische cortex, de piriformis cortex, de Cornu Ammonis 1-3, de dentate gyrus, het striatum, de laterale septum nucleus , de thalamus en hypothalamus. De resultaten van de transfecties wordt getoond naast de aanbevolen hoek (figuur 2). Voor een betere visualisatie van de hoeken in vivo de positi...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit protocol beschrijft in detail hoe de retrospleniale cortex, de motorische cortex, de somatosensorische cortex, de piriforme cortex, de cornu ammonis 1-3, de dentate gyrus, het striatum, de laterale septale kern, de thalamus en de hypothalamus van C75BL/6 muizen worden getransfecteerd. Met alle verstrekte informatie is dit het eerste protocol dat alle noodzakelijke informatie levert om transfecties van deze hersengebieden in de C57BL/6-muis gemakkelijk te recreëren. Eerdere publicaties zijn meestal alleen gericht op e...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Technisch ondersteund door Melanie Pfeifer en Nikolai Schmarowski (Institut für Mikroskopische Anatomie und Neurobiologie, Universitätsmedizin Mainz).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
EndoFree Plasmid Maxi KitQIAGEN12362
Fast GreenRoth0301.1
pCAGGSAddgene
borosilicate glass capillaries (0.8-0.9 mm diameter)Wold Precision Instrument Inc.1B100F-4
Isoflurane (Forene)AbbottPZN 4831850
Carprofen (Rimadyl)Pfizer GmbHgoedkeuringsnummer: 400684.00.00
eye ointment (Bepanthen Augen und Nasensalbe)Bayer PZN 01578681
0.9% benzyl alcohol 0.9% saline solutionApotheek
van het Universitair Medisch Centrum Mainz
gauze (ES-Kompressen)Hartmann407835
steriele 5-0 Perma-Hand zijdedraadEthicon Johnson & JohnsonK890H
ringtang 1/ 1.5 mmFine Science Tools11101-09
ringtang 4.8/ 6 mmFine Science Tools11106-09
ringtang 2.2/ 3 mmFine Science Tools11103-09
Adson Tang-gekarteld recht 12 cmFine Science Tools1106-12
Irisschaar-Fijn recht-Scherp/Blunt 10 cmFine Science Tools14028-10
Mayo-Stille Schaar-Recht 15 cmFine Science Tools14012-15
Dumont #5 Tang-InoxFine Science Tools11251-20
Castroviejo Naaldhouder-met vergrendeling-wolfraamcarbide 14 cmFine Science Tools12565-14
Elektroporator CUY21 SC Nepa Gene Co.
FST 250 Hot Bead SterielisatietoestelFine Science Tools18000-45
Microgrinder EG-44Narishige
P-97 Micropette PullerSutter Instrument CompanyP-97
Platinum elektroden 650P 0.5 mmNepageneCUY650P0.5
Platinum elektroden 650P 3 mmNepageneCUY650P3
Platinum elektroden 650P 5 mmNepageneCUY650P5
Platinum elektroden 650P 10 mmNepageneCUY650P10
AnesthesiesysteemRothacher-Medical GmbHCV-30511-3 Vapor 19.3
VerwarmingsplaatRothacher-Medical GmbHHP-1M
Temperatuurregelaar 220V ACRothacher-Medical GmbHTCAT-2LV

Referenties

  1. Fukuchi-Shimogori, T., Grove, E. A. Neocortex patterning by the secreted signaling molecule FGF8. Science. 294 (5544), 1071-1074 (2001).
  2. Saito, T., Nakatsuji, N. Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation. Dev Biol. 240 (1), 237-246 (2001).
  3. Tabata, H., Nakajima, K. Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex. Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).
  4. LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex. Cereb Cortex. 19 Suppl 1. (July), i120-i125 (1991).
  5. Nakahira, E., Yuasa, S. Neuronal generation, migration, and differentiation in the mouse hippocampal primoridium as revealed by enhanced green fluorescent protein gene transfer by means of in utero electroporation. J Comp Neurol. 483 (3), 329-340 (2005).
  6. Navarro-Quiroga, I., Chittajallu, R., Gallo, V., Haydar, T. F. Long-term, selective gene expression in developing and adult hippocampal pyramidal neurons using focal in utero electroporation. J Neurosci. 27 (19), 5007-5011 (2007).
  7. Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation. J Neurosci Methods. 143 (2), 151-158 (2005).
  8. Kolk, S. M., de Mooij-Malsen, A. J., Martens, G. J. M. Spatiotemporal Molecular Approach of in utero Electroporation to Functionally Decipher Endophenotypes in Neurodevelopmental Disorders. FNMOL. 4 (November), 37(2011).
  9. Tomita, K., Kubo, K. I., Ishii, K., Nakajima, K. Disrupted-in-schizophrenia-1 (Disc1) is necessary for migration of the pyramidal neurons during mouse hippocampal development. Hu Mol Gen. 20 (14), 2834-2845 (2011).
  10. Niwa, M., Kamiya, A., et al. Knockdown of DISC1 by In Utero Gene Transfer Disturbs Postnatal Dopaminergic Maturation in the Frontal Cortex and Leads to Adult Behavioral Deficits. Neuron. 65 (4), 480-489 (2010).
  11. Nakahira, E., Kagawa, T., Shimizu, T., Goulding, M. D., Ikenaka, K. Direct evidence that ventral forebrain cells migrate to the cortex and contribute to the generation of cortical myelinating oligodendrocytes. Dev Biol. 291 (1), 123-131 (2006).
  12. Baumgart, J., Grebe, N. C57BL/6-specific conditions for efficient in utero electroporation of the central nervous system. J Neurosci Methods. 240, 116-124 (2015).
  13. Saito, T. In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system. Nat Protc. 1 (3), 1552-1558 (2006).
  14. Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. Mouse in utero electroporation: controlled spatiotemporal gene transfection. JoVE. (54), (2011).
  15. Guedel, A. E. Inhalation anesthesia: a fundamental guide. , Macmillan. New York. (1937).
  16. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents. JoVE. (65), e3564(2012).
  17. Mizutani, K., Saito, T. Progenitors resume generating neurons after temporary inhibition of neurogenesis by Notch activation in the mammalian cerebral cortex. Development. 132 (6), 1295-1304 (2005).
  18. Tabata, H., Nakajima, K. Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation. Dev, Growth & Differ. 50 (6), 507-511 (2008).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Centraal zenuwstelsel van de muispositionering van elektrodentargeting van embryonale stadiainjectie van DNA oplossingplatina elektrodepaddlestransfectie van het corticale gebiedtargeting van de hippocampusformatieelectroporatie van de thalamus en hypothalamusnucleus septalis lateralisstriatum
Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Laterale Septal Nucleus- en Striatum-specifieke
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.