We presenteren een chirurgische procedure om de intestinale lymfe-lymfeklier bij neonatale varkens te kateteriseren om grote hoeveelheden componenten van het lipidenmetabolisme uit efferente lymfe te verzamelen.
Methodenartikel
We presenteren een chirurgische procedure om de intestinale lymfe-lymfeklier bij neonatale varkens te kateteriseren om grote hoeveelheden componenten van het lipidenmetabolisme uit efferente lymfe te verzamelen.
De katheterisatie van de intestinale lymfetrunk bij neonatale varkens is een techniek die de langetermijnverzameling van grote hoeveelheden intestinale (centrale) efferente lymfe mogelijk maakt. Belangrijk is dat de verzameling van centrale lymfe uit het darmkanaal onderzoekers in staat stelt zowel de mechanismen als lipide bestanddelen geassocieerd met lipidemetabolisme, intestinale ontsteking en kankermetastase, evenals cellen betrokken bij immuunfunctie en immuuntoezicht te bestuderen. Een ventrale middenlijn chirurgische aanpak biedt uitstekende chirurgische zichtbaarheid op de cranale buik en relatief gemakkelijke toegang tot de intestinale lymfetrunk vaat die dicht bij de alvleesklier en het rechter ventrale segment van de poortader onder de viscerale kant van de rechter leverkwab ligt. De vaat wordt zorgvuldig gedissecteerd en vrijgemaakt van de omliggende fascia en vervolgens verbreed met hechtingen waardoor het mogelijk is om de katheter in de vaat in te brengen en vervolgens vast te zetten. De katheter wordt geëxterioriseerd en ongeveer 1 L/24 uur aan lymfe wordt verzameld over een periode van 7 dagen. Hoewel deze techniek de verzameling van grote hoeveelheden centrale lymfe over een langere periode mogelijk maakt, hangt het succes af van zorgvuldige chirurgische dissectie, weefselbehandeling en nauwe aandacht voor de juiste chirurgische techniek. Dit is vooral belangrijk bij operaties bij jonge dieren, aangezien de lymfevaten gemakkelijk kunnen scheuren, wat mogelijk leidt tot chirurgisch en experimenteel falen. De video demonstreert een uitstekende chirurgische techniek voor de verzameling van intestinale lymfe.
Het lymfestelsel is een weinig bestudeerd gebied van fysiologie. Preklinische modellen van lymfatische catheterisatie voorkomen in verschillende diersoorten 1-8 en worden gebruikt door de farmaceutische industrie en onderzoeksinstellingen om de mechanismen die betrokken zijn bij lipiden 8-12 en drugs metabolisme 13-15, kanker metastase 16 met experimentele behandeling 17 te onderzoeken, en het immuunsysteem 18 -26. Deze studie onderzoekt het gebruik van intestinale lymfe trunk catheterisatie in een binnenlandse varken model van onderdelen van lipoproteïne metabolisme te meten. Lipoproteïnemetabolisme is betrokken bij de productie en uitscheiding van chylomicronen, evenals veranderingen in geassocieerde lipiden en totaal eiwit. Dit zijn belangrijke overwegingen zijn er grote verschillen tussen vetmetabolisme gebruikte diermodellen en mensen en als zodanig dienst varkens modellen voor intestinale lymfe verzamelen kon meer vergelijkbare informatie voor het bestuderen lipide metabolism bij mensen 27-31.
Verschillende chirurgische technieken worden gebruikt om de intestinale lymfe in grote diersoorten verzamelen: craniaal schouder aanpak (ductus thoracicus catheterisatie) 5, een zijdelingse bovenste flank benadering 32-34 en een ventrale middellijn of paramediane benadering 22,35. Deze video beschrijft in detail de chirurgische procedure bij varkens met een ventrale middellijn chirurgische benadering voor de katheterisatie van de intestinale lymfe stam. Zorgvuldige chirurgische techniek toelaat Werkwijze lymfatische katheterisatie grote hoeveelheden lymfe en de bestanddelen laat gedurende langere tijdsperioden.
Deze techniek opent een groot aantal toepassingen voor vele disciplines onderzoekt verschillende fysiologische functies. Toepassingen kunnen omvatten, maar zijn niet beperkt tot, hele lichaam lipoproteïne en lipidemetabolisme, immunosurveillance, tumor- genese en metastase, darmfunctie, en ontwikkeent en progressie van intestinale ontstekingsziekte.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle procedures op in zowel de video en manuscript beschreven proefdieren werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite en volgde de door de Canadese Raad van Animal Care vastgestelde richtlijnen.
1. Chirurgische anesthesie en chirurgische Voorbereiding van de Neonatale Pigs
2. Abdominale Chirurgie en catheterisatie van de intestinale Lymfatische Trunk
3. Post-operatieve herstel en lymfe Collection
4. Kwantificering van Lipoprotein ApoB48, Triglyceride, Cholesterol en Total Protein verzameld van de lymfe
5. Kwantificering van Lipoprotein ApoB48, verzameld uit de lymfe 38
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Lymfatische catheterisatie van de intestinale lymfatische kofferbak van neonatale varkens maakt verzameling van circa 1 l / 24 uur in het centrum van lymfe over een periode van 7 dagen. De gegevens die in deze experimenten lymfe bevatte componenten van vetmetabolisme, namelijk totale lymfe eiwit, lipoproteïne ApoB48, triglyceriden, totaal eiwit en cholesterol. Tabel 1 wat representatieve hoeveelheden van deze lipide bestanddelen uit samengevoegde monsters lymfe drie varkens. Met na...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Het verzamelen van intestinale lymfe is een uitstekende methode om de mechanismen die betrokken zijn bij lipiden 8-12 en drugs 13-15 stofwisseling, kanker metastase 16,17, mobiele handel en het immuunsysteem 18-26, in verschillende experimentele diermodellen onderzoeken. Inderdaad, de mogelijkheid om grote hoeveelheden hetzij perifere (afferente) en centrale (efferente vaten en grote koffer) lymfe oogsten gedurende langere bijzonder belang zijn voor het begrijpen van tijdelijk...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
Het werk werd gedeeltelijk ondersteund door financiering van Alberta Livestock and Meat Agency en Natural Science and Research Council Discovery-subsidie aan S. D. Proctor.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Miller laryngoscope blade | Welch Allyn | 68044 | 182 mm lengte |
| Surgivet advisor: Vital signs monitor | Surgivet | V9203 | |
| Rectale temperatuur sonde | Surgivet | V3417 | |
| Mono-polaire elektrochirurgie generator | Valley Lab | ||
| Metzenbaum schaar | Fine Science | 14518-18 | |
| Tuffier retractor | Stevens | 162-11-676 | |
| Mosquito forceps | Stevens | 162-7-10 | |
| Kelly forceps-gebogen (14cm) | Stevens | 162-7-38 | |
| Allis weefsel forceps | Stevens | 162-7-38 | |
| Forceps dressing-eye (10.2cm) | Stevens | 162-18-780 | |
| Forceps dressing-Adison (12.1cm) | Stevens | 162-17-2510 | |
| Naald drivers | Stevens | 162-V98-42 | |
| Iris schaar | Fine science | 14058-11 | |
| Circulerende waterpomp | Jorvet | J-783X | |
| Maxitherm-Vinyl deken | Jorvet | J-784C | |
| Q tip applicatoren | Fisher Scientific | 22-037-960 | |
| Catheterisatie slang (4.06 OD X 2.31 ID) | Braintree Scientific Inc. | MRE-160 | Micro-Renethane implantatie slang |
| 2-0 zijde hechting | Ethicon | LA556 | |
| 2-0 polyglactin hechting | Ethicon | J443H | 2-0 vicryl |
| Grote dieren jas | Lomir Biomedical Inc. | SSJ2YC | |
| Polypropyleen wasflessen | Fisher Scientific | 03-409-22C | 500 ml |
| Penicilline-Streptomycine | Sigma Aldrich | D4333 | |
| EDTA | Sigma Aldrich | 60-00-4 | |
| Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2411 | |
| Azaperone | Elanco Animal Health | Stresnil | |
| Dexmedetomidine hydrochloride | Zoetis | 6295 | Dexdomitor |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | 05260-5 | IsoFlo |
| Ketamine hydrochloride | Zoetis | 2626 | Ketaset |
| Bupenorfine hydrochloride | Champion Alstoe Animal Health | DIN:02347510 | |
| 6 mm Endotracheale buis | Jorvet | J-165d | |
| 10% Lidocaine spray | AstraZeneca | DIN:02003767 | |
| 4 % Chlorhexidine chirurgische scrub | Partnar Animal Health | PCH-011 | Verdund: 2.0% oplossing |
| 3M Chirurgische steri- drape | 3M Health Care | 1040 | |
| SDS page gel | Invitrogen | EA0375BOX | 3-8 % tris acetaat |
| Polyvinylideenfluoride membraan | Millipore | IPVH00010 | 0.45 μm poriegrootte |
| ApoB antilichaam | EMD Millipore | AB742 | 1:4000 verdunning |
| Donkey anti-goat IgG-HRP | Santa Cruz Biotechnology | Sc-2304 | |
| ECL Prime Western Blotting Reagens | GE Healthcare LifeSciences | RPN2232 | |
| Triglyceride Kit | Wako Pure Chemicals | 998-40391/994-40491 | |
| Total Cholesterol Kit | Wako Pure Chemicals | 439-17501 | |
| Totale Eiwit | Pierce | 23225 | Bicinchoninic Zuur Assay |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken
Toestemming aanvragen