Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Sequencing van Plant Muur Heteroxylans Met behulp van Enzymatische, Chemical (Methylering) en fysieke (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Technieken

7.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/53748

⸱

24 maart 2016

 ,  , 
1ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences, University of Melbourne

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol beschrijft de specifieke technieken die worden gebruikt voor de structurele karakterisering van het reducerende einde (RE) en de interne glycosylsequenties van heteroxylanen door het RE te labelen met 2-aminobenzamide voorafgaand aan enzymatische (endoxylanase) hydrolyse en vervolgens analyse van de resulterende oligosacchariden met behulp van massaspectrometrie (MS) en nucleaire magnetische resonantie (NMR).

Samenvatting

Dit protocol beschrijft de specifieke technieken die voor de karakterisering van reducerende einde (RE) en intern gebied glycosyl sequentie (s) van heteroxylans. De-gesteven tarwe endosperm celwanden werden geïsoleerd als alcohol-onoplosbare residu (AIR) 1 en achtereenvolgens geëxtraheerd met water (W-sol Fr) en 1 M KOH bevattende 1% NaBH4 (KOH-sol Fr) zoals beschreven door Ratnayake et al. (2014) 2. Twee verschillende benaderingen (zie overzicht in figuur 1) worden aangenomen. In de eerste, intact W-sol AXs behandeld met 2AB de oorspronkelijke RE hoofdketen suikerrest label en vervolgens behandeld met een endoxylanase aan een mengsel van gelabelde 2AB RE en intern gebied reducerende oligosacchariden, respectievelijk genereren. In een tweede benadering wordt de KOH-sol Fr gehydrolyseerd met endoxylanase eerst genereren van een mengsel van oligosacchariden die vervolgens gelabeld met 2AB. De enzymatisch vrijgegeven ((on) met het label) oligosacchariden uit beideW- en KOH-sol FR's vervolgens gemethyleerd en de gedetailleerde structurele analyse van zowel de natieve als gemethyleerde oligosacchariden wordt uitgevoerd met een combinatie van MALDI-TOF-MS, RP-HPLC-ESI-MS-QTOF en ESI-MS n. Endoxylanase gedigereerd KOH-sol AXs worden ook gekenmerkt door kernmagnetische resonantie (NMR), die ook informatie over de anomere configuratie. Deze technieken kunnen worden toegepast op andere soorten polysacchariden met de juiste endo-hydrolasen.

Inleiding

Heteroxylans zijn een familie van polysachariden die de overheersende cellulosevrije polysacchariden van de eerste wanden van grassen en de secundaire wanden van angiospermen 3-6 zijn. Xylaan ruggengraat verschillen in hun soorten en substitutiepatronen met glycosyl (glucuronzuur (GlcA), arabinose (Araf)) en niet-glycosyl (O-acetyl, ferulinezuur) residuen afhankelijk weefseltype, ontwikkelingsstadium en soorten 7.

Wanden van tarwe (Triticum aestivum L.) endosperm bestaan ​​voornamelijk uit arabinoxylaan (AXs) (70%) en (1 → 3) (1 → 4) -β-D-glucanen (20%) met kleine hoeveelheden cellulose en heteromannans (2% elk) 8. Xylaan backbone kan op verschillende niet-gesubstitueerde en overwegend mono-gesubstitueerde (voornamelijk O-2 positie en in mindere mate O-3) en met de digesubstitueerde (O-2 en O-3 posities) met α-L-Ara zijn f resten 9. Het reducerende einde (RE) van heteroxylanen van tweezaadlobbigen (bijvoorbeeld Arabidopsis thaliana) en 10 naaktzadigen (bijvoorbeeld spar (Picea abies)) 11 bevat een karakteristieke tetrasaccharide glycosyl sequentie; -β-D-Xyl p - (1 → 3) -α-L-Rha p - (1 → 2) -α-D-Gal A- p (1 → 4) -D-Xyl p. Om heteroxylan biosynthese en functie (biologische industrie) te begrijpen, is het belangrijk om volledige sequentie xylaan backbone op de soort en de patronen van substituties alsook de sequentie van het reducerende einde (RE) begrijpen.

Specifieke technieken die worden gebruikt voor de structurele karakterisering van reducerende einde (RE) en intern gebied glycosyl sequentie (s) van heteroxylans worden beschreven in dit manuscript. De betekenis berust op fluorofoor tagging (met 2 aminobenzamide (2AB)) het reducerende einde (RE) van de heteroxylan keten vóór enzymatische (endoxylanase) hydrolyse. Deze benadering, met name voor de RE sequencing waseerst gemeld door het laboratorium York 10,12-13 maar is nu uitgebreid met de interne regio sequentie omvatten en is een combinatie van bekende technieken die even aanpasbaar aan alle heteroxylans onafhankelijk van de bron van isolatie. Deze benadering kan ook worden toegepast op andere soorten polysacchariden gebruikt (indien beschikbaar) passende endo-hydrolasen.

In de onderhavige studie werden de gesteven tarwe endosperm celwanden geïsoleerd als een alcohol-onoplosbare residu (AIR) en achtereenvolgens geëxtraheerd met water (W-sol Fr) en 1M KOH bevattende 1% NaBH4 (KOH-sol Fr) zoals beschreven in Ratnayake et al. (2014) 2. De vrijgemaakte oligosacchariden zowel W- en KOH-sol FR's vervolgens gemethyleerd en de gedetailleerde structurele analyse van zowel de natieve als gemethyleerde oligosacchariden wordt uitgevoerd met een combinatie van MALDI-TOF-MS, ESI-QTOF-MS-HPLC gekoppeld aan de online chromatografische scheiding onder toepassing van een RP C-18 kolomen ESI-MS n. Endoxylanase gedigereerd KOH-sol AXs ook gekenmerkt door kernmagnetische resonantie (NMR).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Bij de etikettering van het reducerende einde (RE) Sugar Residu van W-sol AXs met 2-aminobenzamide (2AB)

  1. Incubeer W-sol AXs met 2AB (0,2 M) in aanwezigheid van 1 M NaBH3CN (natriumcyaanboorhydride) (pH 5,5) gedurende 2 uur bij 65 ° C aan de reducerende uiteinden van de polysaccharide backbone ketens zetten hun fluorescerende derivaten.
    VOORZICHTIG: De volgende stap moet worden uitgevoerd in de zuurkast zoals NaBH3CN releases giftige cyanide gas wanneer het in contact met water.
    1. Weeg NaBH3CN (62,8 mg) en los op in water (1 ml) in een microcentrifugebuis (1,5 ml) aan een 1 M NaBH3CN te bereiden. Ontbinden 2AB reagens (27,2 mg) in 1 M NaBH3CN oplossing (1 ml) door verwarming bij 65   ° C en de pH van het reactiemengsel (0,2 M 2AB, 1 M NaBH3CN) tot pH 5,5 met 10% azijnzuur.
    2. Voeg 200 pl reactiemengsel (0,2 M 2AB, 1 M NaBH3CN) W-sol AXs (1 mg) in een glazen buis met een pet en meng met behulp van een vortex mixer. Incubeer gedurende 2 uur bij 65   ° C in een zuurkast. Koel de suspensie tot kamertemperatuur en voeg 4 vols. absolute ethanol.
    3. Plaats de suspensie in een koelcel (4 ° C) O / N polysacchariden precipiteren.
    4. Centrifuge (1500 x g, 10 min, RT) naar supernatant te verwijderen. Was de pellet uitgebreid met absolute ethanol (4x), aceton (1x) en methanol (1x), gecentrifugeerd tussen elke wassing. Vacuüm droog bij 40 ° CO / N.
      Opmerking: Uitgebreide wassen verwijdert ook de resterende 2AB.

2. Genereren van Xylo-oligosacchariden van 2 AB gelabelde W-sol AXs

  1. Ontbinden 2AB gemerkte W-sol AXs (1 mg) in 500 pl natriumacetaat buffer (100 mM, pH 5) in een microcentrifugebuis (1,5 ml). Voeg 4 eenheden van endoxylanase (GH 11, [M1]) en incubeer bij 37   ° C gedurende 16 uur.
  2. Vernietigen enzymactiviteit door verhitting van het reactiemengsel mixture gedurende 10 min in een bad met kokend water. Koel de suspensie tot kamertemperatuur en overbrengen naar glazen buis met een kap. Voeg 4 vols. absolute ethanol en zet de suspensie in een koelcel (4 ° C) O / N één onverteerd polysachariden precipiteren.
  3. Centrifuge (1500 x g, 10 min, RT) onverteerd polysachariden (pellet) scheiden en endoxylanase gegenereerd xylo-oligosachariden (supernatant). Giet supernatant in een schone glazen buis en plaats deze in een warm water bad (40 ° C).
  4. Damp het ethanol onder een stroom stikstofgas om een ​​eindpunt volume (~ 500 pi). Bevries de supernatans bij -80 ° C gedurende 4 uur en droog de bevroren supernatant in een vriesdroger te xylo-oligosacchariden herstellen.

3. Productie van Xylo-oligosacchariden van KOH-sol AXs en 2AB Labelling

  1. Behandel KOH-sol AXs met endoxylanase (GH 11, [M1]) om xylo-oligosacchariden te genereren, zoals hierboven (paragrafen 2.1-2.4) beschreven.
  2. Behandel endoxylanase gegenereerd xylo-oligosachariden van KOH-sol AXs met 2AB reactiemengsel (0,2 M 2AB, 1 M NaBH3CN) zoals hierboven (paragrafen 1.1.1-1.1.2) beschreven.
  3. Giet supernatant in een schone glazen buis en plaats deze in een warm water bad (40 ° C). Damp het ethanol onder een stroom stikstofgas om een ​​eindpunt volume (~ 500 pi). Bevries de supernatans bij -80 ° C gedurende 4 uur en droog de bevroren supernatant in een vriesdroger te xylo-oligosacchariden herstellen.

4. MALDI-TOF-MS

  1. Bereiding van MALDI-matrix oplossing
    1. Voeg een klein bolletje 2, 5-dihydroxbenzoic acid (DHB) tot 50% acetonitril (500 ml) dat 0,1% mierenzuur in een buis (MALDI-matrix oplossing). Meng met behulp van een vortex, als het snel oplost, voeg een ander klein bolletje DHB. Noot: Ideale concentratie van MALDI-matrix oplossing 10 ug / ul -1.
  2. Bereiding van MALDI-target Plate
    1. Stort de aqueoons oligosaccharide (native) monsters (5-10 ug) (W-sol en / of KOH-sol) op een MALDI-target plaat. Voeg 0,3 gl MALDI-matrix oplossing wordt met een apart puntje en meng door en neer te pipetteren. Laat het mengsel bij kamertemperatuur drogen.
      Opmerking: Goed gedroogde monsters moeten bestaan ​​uit lange naaldvormige kristallen wijst naar het midden van de vlek. Als de aanbetaling is kleverig en / of morsig het monster kan ofwel te worden geconcentreerd of bestaan ​​uit zouten, zoals deposito's zijn waarschijnlijk niet goed spectra te produceren en het monster moet verder worden gezuiverd.
    2. Introduceer het doel plaat in de MS bron en werken in positieve (+ ive) ion-modus. Gas terugnemen spanning tot 19,0 kV bij ionenbron 1 en 16,3 kV bij ionenbron 2. Stel het laservermogen tot meer dan 70%. Selecteer het monster plek op de MALDI-target bord en klik op Start om laserpulsen te beginnen.
      Let op: Alle ruimtes van het doel zal geen signalen opleveren. Een bepaalde plaats slechts een signaal voor een paar laserpulsen gevolg van hetzijuitputting van het monster / matrix mengsel of kenmerken van het kristal.
      1. Verplaats de laser naar verschillende gebieden van het doel tijdens acquisitie en gemiddeld ongeveer 200 willekeurig spectra voldoende signaal-ruisverhouding te verkrijgen.

5. ESI-MS-QTOF

  1. Analyseer-endoxylanase gegenereerde oligosachariden (native) met behulp van nano-HPLC in combinatie met een elektrospray ionisatie (ESI) quadrupool time of flight (QTOF) MS instrument met online chromatografische scheiding met behulp van een RP C-18-kolom (75 urn x 150 mm; 3,5 urn kraal grootte).
    1. Breng de endoxylanase-gegenereerde waterige oligosacchariden mengsel in een flesje en plaats in de HPLC autosampler. Programmeer de elutiegradiënt van 5-80% met de mobiele fase 0,1% (v / v) mierenzuur in water en 0,1% (v / v) mierenzuur in acetonitril, respectievelijk, over 60 min.
    2. Stel het debiet tot 0,2 pl / min. Pas de positieve-ion modus in de scan rangevan 300-1,600 m / z en een scan-snelheid van 0,5 scans / seconde met behulp van de ESI bron voorwaarden als volgt: gordijn gas 10, GS1 4, bron temperatuur van 100 ° C, ion spuiten spanning 2300 V, en de-clustering potentieel 50 V. Run de LC chromatografische programma en elueer oligosacchariden. De resulterende totale ion chromatogram (TIC) wordt automatisch opgeslagen door de software.
    3. Open de opgeslagen TIC en kies extract chromatogram. Typ de verwachte massa's (bijvoorbeeld 271, 403, 535, 667, 799 en 931 m / z) op de opdrachtregel. Scan chromatogram door te klikken op Enter. Verwerk de geselecteerde ionen scans van de ESI-QTOF MS chromatogram gegevens met software volgens de instructies van de fabrikant 14.

6. ESI-MS n

  1. Plaats 1-2 pl per-O-gemethyleerde oligosaccharide (gemethyleerd zoals beschreven door Pettolino et al. 1) monster in 50% acetonitril in een nanospray spuitkop en een spuit. trimmennano-spuittip met een glazen mes te passen in de discrete nano-nevel houder naar het MS.
  2. Stel de massa volgens de verwachte massabereik (200-1,500 m / z) en gordijn gas 10, Ionenspray spanning van 1900 V en polariteit positief.
  3. Druk op de knop verwerven om relevante venster te openen, voert u de gegevens bestandsnaam tot een totaal ion scan (ESI-MS 1) te verkrijgen. Druk vervolgens op de STOP-knop.
  4. Wijzig scan soort van product ion tot een piek van belang fragmenteren. Voer de massa van belang (bijvoorbeeld, 885 m / z) te fragmenteren en aanpassen van de massa-range (200-900 m / z). Druk op de knop verwerven en pas de botsingsenergie (boven en / of naar beneden op het tabblad verbinding) om hele versnippering van de ouder-ion (885 m / z) te bereiken en het verwerven van een fragment ion scan (ESI-MS 2).
  5. Voer de massa van fragment ion van belang (bijvoorbeeld, 711 m / z) en stel de massa-range (200-720 m / z). Druk op de knop Acquire eend de botsingsenergie aanpassen om volledige fragmentatie van precursorion (711 m / z) bereiken en het verwerven van een fragment ion scan (ESI-MS 3).

7. 1 H NMR spectroscopie

  1. Ontbinden endoxylanase gegenereerde mengsel van oligosachariden (KOH-sol, natuurlijke vorm) (~ 500 ug) in D 2 O (1,0 ml, 99,9%) in een plastic reageerbuis (15 ml). Bevries de suspensie bij -80 ° C gedurende 4 uur en droog de bevroren suspensie in een vriesdroger te xylo-oligosacchariden herstellen.
  2. Herhaal 7,1 maal om de H 2 O volledig uitwisselen D 2 O.
  3. Oplossen gedroogd oligosacchariden in D 2 O (0,6 ml, 99,9%) en voeg 0,5 pl aceton (5% in D 2 O) als interne standaard. Breng de gedeutereerde oligosacchariden in de NMR-monsterbuis.
  4. Houd de NMR-buis met monster door de top en steek de monsterbuis in een plastic spinner. Plaats de spinner in de steekproef dieptemeter. Push of trek de monsterbuis om de diepte van het monster aan te passen zodat de hartlijn van het monster bovenste en onderste dieptemeter gelijk.
  5. Verwijder de dieptemeter en plaats het monster in de autosampler aangesloten op een 600 MHz NMR-spectrometer uitgerust met een cryo-sonde.
  6. Inloggen open spectrometer besturingssoftware. Voer de naam voorbeeld bestand. Open een bestaande dataset en vervolgens de opdracht "edc" om het op te slaan onder een nieuwe naam. Typ het positienummer van het monster in de auto-sampler en druk op "ENTER".
    Opmerking: Door op de knop "ENTER" zal voorzichtig de monsterbus dalen tot de magneet boring waar het op de top van de sonde zal worden gepositioneerd.
  7. Stel de gewenste temperatuur van het monster door het intikken van "edte" op de opdrachtregel. Wacht tot de temperatuur van het monster op de gewenste waarde te bereiken voordat u verder gaat met de volgende stap. Voer "lock" op de opdrachtregel en kies geschikt oplosmiddel (D 2 O). Wacht op de " lock afgewerkte "boodschap verschijnt aan de onderkant van het venster.
  8. Typ "atmm" op de opdrachtregel en klik op "optimaliseren" aan de bovenkant van de atmm menubalk. Kies start voor het afstemmen en de matching van de sonde voor het geselecteerde kanaal (1 H in dit geval).
  9. Typ "topshim" op de opdrachtregel voor de shimming proces waarbij kleine aanpassingen zijn gemaakt om het magnetisch veld tot uniform magnetisch veld het signaal wordt bereikt rond de sample.Acquire door het intikken van "zg" op de opdrachtregel en voer.
  10. Analyseren spectra gebruik van software 15 volgens de instructies van de fabrikant met 1H chemische verschuivingen gerefereerd als interne standaard aceton bij 2,225 ppm.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Endoxylanase digestie van 2AB gelabelde W-sol AXs genereert een mengsel van 2AB gemerkte RE oligosacchariden en een serie-un gemerkte (zonder 2AB label) Oligosacchariden afgeleid van de inwendige gebieden van het xylaan keten (figuur 1, van Ratnayake et al. 2). Een reeks chromatografische methoden wordt vervolgens gebruikt voor het complexe mengsel van isomeren fractioneren. Tenslotte worden MS-technieken gebruikt om de isomere structuren die vervolge...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De meeste matrix fase celwandpolysacchariden hebben schijnbaar willekeurig vervangen backbones (met zowel glycosyl en non-glycosyl residuen) die zeer variabel zijn, afhankelijk van de plantensoort, ontwikkelingsstadium en weefseltype 3. Omdat polysachariden secundaire genproducten de sequentie niet template afgeleid en er dus geen enkele analytische benadering, zoals bekend van nucleïnezuren en eiwitten voor hun sequencing. De beschikbaarheid van gezuiverde linkage-specifieke hydrolytische enzymen verschaft e...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

We hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit project werd ondersteund door fondsen van het Commonwealth Scientific and Research Organisation Flagship Collaborative Research Program, verstrekt aan de High Fibre Grains Cluster via de Food Futures Flagship. AB erkent ook de steun van een Australia Research Council (ARC)-subsidie aan het ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls (CE110001007).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2 aminobenzamide (2AB)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)A89804
sodium borohydride (NaBH4)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)247677Gevaarlijk, met zorg gebruiken
sodium cyanoborohydride (NaBH3CN)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)156159Gevaarlijk, met zorg gebruiken
endo-1,4-β-Xylanase M1 (van Trichoderma viride) (120101a)Megazyme (www.megazyme.com)E-XYTR1
Deuterium Oxide (D2O)Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)151882
Vriesdroger (CHRIST-ALPHA 1-4 LD plus)
RP C18 Zorbax eclipse plus kolom Agilent (2,1×100 mm; 1,8 µm kraalgrootte) 
MicroFlex MALDI-TOF MS   (Model - MicroFlex LR)(Bruker Daltonics, Duitsland)
(ESI) -(QTOF) MS   (Model # 6520)(Agilent, Palo Alto, CA )
ESI-MSn  - ion-trap  (Model # 1100 HCT)(Agilent, Palo Alto, CA).
Bruker Avance III 600 MHz -NMRBruker Daltonics, Duitsland
Topspin (versie 3.0)-Biospin- software Bruker 
GC-MS (Model # 7890B)Agilent 

Referenties

  1. Pettolino, F. A., Walsh, C., Fincher, G. B., Bacic, A. Determining the polysaccharide composition of plant cell walls. Nature Protocols. 7, 1590-1607 (2012).
  2. Ratnayake, S., Beahan, C. T., Callahan, D. L., Bacic, A. The reducing end sequence of wheat endosperm cell wall arabinoxylans. Carbohydr. Res. 386, 23-32 (2014).
  3. Bacic, A., Harris, P. J., Stone, B. A. The Biochemistry of Plants, Vol. 14, Carbohydrates. Preiss, J. 14, Academic Press. San Diego. 297-371 (1988).
  4. York, W. S., O'Neill, M. A. Biochemical control of xylan biosynthesis - which end is up? Plant Biol. 11, 258-265 (2008).
  5. Fincher, G. B. Revolutionary times in our understanding of cell wall biosynthesis and remodeling in the grasses. Plant Physiol. 149, 27-37 (2009).
  6. Faik, A. Xylan Biosynthesis: News from the Grass. Plant Physiol. 153, 396-402 (2010).
  7. Scheller, H. V., Ulskov, P. Hemicelluloses. Annu. Rev. Plant Biol. 61, 263-289 (2010).
  8. Bacic, A., Stone, B. A (1→3)- and (1→4)-linked β-D-glucan in the endosperm cell-wall of wheat. Carbohydr. Res. 82 (13), 372-377 (1980).
  9. Comino, P., Collins, H., Lahnstein, J., Beahan, C., Gidley, M. J. Characterisation of soluble and insoluble cell wall fractions from rye, wheat and hull-less barley endosperm flours. Food Hydrocolloids. 41, 219-226 (2014).
  10. Pena, M. J., et al. Arabidopsis irregular xylem8 and irregular xylem9: Implicationsfor the Complexity of Glucuronoxylan Biosynthesis. Plant Cell. 19, 549-563 (2007).
  11. Andersson, S. I., Samuelson, O., Ishihara, M., Shimizu, K. Structure of the reducing end-groups in Spruce xylan. Carbohydr. Res. 111, 283-288 (1983).
  12. Mazumder, K., York, W. S. Structural analysis of arabinoxylans isolated from ball-milled switchgrass biomass. Carbohydr. Res. 345, 2183-2193 (2010).
  13. Kulkarni, A. R., et al. The ability of land plants to synthesize glucuronoxylans predates the evolution of tracheophytes. Glycobiol. 22 (2012), 439-451 (2012).
  14. Agilent MassHunter Workstation Software - Quantitative Analysis Familiarization Guide. , Agilent Technologies. Available from: http://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G3335_90061_Quant_Familiarization-EN.pdf (2010).
  15. Topspin User Manual. , Bruker. Available from: http://www.nmr.ucdavis.edu/docs/user_manual_topspin_ts30.pdf (2010).
  16. Domon, B., Costello, C. E. A systematic nomenclature for carbohydrate fragmentation in FAB-MS/MS spectra of glycoconjugates. Glycoconjugate. J. 5, 397-409 (1988).
  17. Hoffmann, R. A., Leeflang, B. R., De Barse, M. M. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H-n.m.r. spectroscopy of oligosaccharides, derived from arabinoxylans of white endosperm of wheat, that contain the elements ----4)[alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1---- or ----4)[alpha- L-Araf-(1----2)][alpha-L-Araf-(1----3)]-beta-D-Xylp-(1----. Carbohydr. Res. 221, 63-81 (1991).
  18. Gruppen, H., Hoffmann, R. A., Kormelink, F. J. M., Voragen, A. G. J., Kamerling, J. P., Vliegenthart, J. F. Characterisation by 1H NMR spectroscopy of enzymically derived oligosaccharides from alkali-extractable wheat-flour arabinoxylan. Carbohydr. Res. 233, 45-64 (1992).
  19. Kosik, O., Bromley, J. R., Busse-Wicher, M., Zhang, Z., Dupree, P. Studies of enzymatic cleavage of cellulose using polysaccharide analysis by carbohydrate gel electrophoresis (PACE). Methods Enzymol. 510, 51-67 (2012).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Heteroxylaansequentiëringendoxylanasebehandeling2AB-labelingMALDI-TOF-MS-analyseRP-HPLC-ESI-QTOF-MSESI-MSn-analyseNMR-spectroscopieoligosacharidemethyleringpolysaccharidekarakteriseringglycaansequentiëring
Sequencing van Plant Muur Heteroxylans Met behulp van Enzymatische, Chemical (Methylering) en fysieke (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Technieken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.