Hulpmiddelen die worden gebruikt voor het visualiseren van vasculaire regeneratie vereisen methoden voor het contrasteren van de vasculaire bomen. Deze film toonde een delicate injectietechniek die werd gebruikt om een optimaal contrast van de vasculaire bomen te bereiken en illustreerde de potentiële voordelen die resulteren uit een gedetailleerde analyse van het resulterende specimen met behulp van µCT en histologische seriële secties.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Visualisatie van vasculaire en Parenchymale Regeneratie na 70% Gedeeltelijke hepatectomy in normale muizen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Een gemodificeerde silicone injectieprocedure werd gebruikt voor visualisatie van de lever vaatstelsel. Deze bestond uit het in vivo injectie van de silicone verbinding, via een katheter 26 G, in het portaal of de vena hepatica. Na silicone injectie werden organen geëxplanteerd en voorbereid voor ex-vivo micro-CT (μCT) scannen. De siliconen injectie procedure is technisch uitdagend. Het bereiken van een succesvol resultaat vergt veel microchirurgische ervaring van de chirurg. Een van de uitdagingen van deze procedure houdt de bepaling van de adequate perfusiesnelheid de siliconenverbinding. De perfusiesnelheid van de silicone verbinding moet worden gedefinieerd op basis van de hemodynamische van het vaatstelsel van belang. Ongepast perfusie tarief kan leiden tot een onvolledige perfusie, kunstmatige dilatatie en scheuren van vasculaire bomen.
De 3D reconstructie van het vasculaire systeem is gebaseerd op CT-scans en werd bereikt met behulppreklinische software zoals HepaVision. De kwaliteit van de gereconstrueerde vasculaire boom is direct gerelateerd aan de kwaliteit van siliconen perfusie. Vervolgens berekende vasculaire parameters voor vasculaire groei, zoals vasculaire totale volume werd berekend op basis van de vasculaire reconstructies. Contrasterende de vasculaire boom met siliconen toegestaan voor verdere histologische work-up van het monster na μCT scannen. Het monster kan worden onderworpen aan seriële snijden, histologische analyse en objectglaasje scannen en daarna 3D reconstructie van het vasculaire bomen op basis van histologische afbeeldingen. Dit is een voorwaarde voor de detectie van moleculaire gebeurtenissen en hun verdeling met betrekking tot het vaatstelsel. Deze gemodificeerde siliconen injectieprocedure kan ook worden gebruikt voor het visualiseren en reconstrueren de vasculaire systemen van andere organen. Deze techniek heeft het potentieel uitgebreid worden toegepast op studies over vasculaire anatomie en groei van diverse dierlijke eenziektemodellen nd.
Inleiding
Leverregeneratie wordt vaak bepaald door de toename van de lever gewicht en volume en door beoordeling van de hepatocyt proliferatiesnelheid 16. Echter, wordt de lever regeneratie niet alleen inducerende parenchymale regeneratie, maar ook vasculaire regeneratie 6. Daarom moet de groei van vasculaire nader worden onderzocht met betrekking tot zijn rol in de progressie van leverregeneratie. Visualisatie van de lever vasculaire systeem is cruciaal voor het bevorderen van ons begrip van vasculaire regeneratie. Talrijke indirecte methoden ontwikkeld om de onderliggende moleculaire mechanismen van hepatische regeneratie vasculaire onderzoeken. Traditi....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Procedures waarbij proefdieren zijn goedgekeurd door Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit und Tierschutz, Duitsland. Omdat het portaal veneuze systeem los van de lever veneuze systeem werd gevisualiseerd, werden afzonderlijke dieren die nodig zijn voor de verschillende vasculaire bomen.
1. Reagentia Voorbereiding
- Heparine-zoutoplossing
- Voeg 0,1 ml héparine in 10 ml zoutoplossing (5 IU / ml).
- Silicone compound mengsel
- Voeg 2 ml MV-120 in een 5 ml buis. Verdun MV-120 door toevoeging van 3 ml MV verdunningsmiddel resulteert in een 40% oplossing.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
kwaliteitscriteria
De kwaliteit van siliconen injectie kan worden beoordeeld met het blote oog tijdens de procedure. De kleine bloedvaten op het oppervlak van de lever te vullen geleidelijk aan met de blauwe verbinding. Als de normale vasculaire structuur werd waargenomen op het oppervlak lever, de siliconen rubber injectie kwaliteit was goed. Wanneer de perfusie volume onvoldoende was, werden de kleine bloedv.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Contrasterende de vasculaire boom door siliconen injectie en μCT scanning is geïntroduceerd in tumor modellen en neurologische ziekte modellen vaak naar de angiogene progressie 5,7,8,10 bestuderen. Verbeteringen in de methodologie van siliconen injectie werden gemaakt in de huidige studie voor het visualiseren en kwantificeren van vasculaire groei na gedeeltelijke hepatectomie bij muizen.
Er zijn een aantal kritische stappen aandacht nodig om goede perfusie kwaliteit. Allereerst w.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen hebben.
Dankbetuigingen
De auteurs danken voor de financiering door het Duitse Ministerie van Onderwijs en Wetenschap (BMBF) via het systeembiologienetwerk "Virtual Liver", subsidienummers 0315743 (ExMI), 0315765 (UK Jena), 0315769 (MEVIS). De auteurs danken ook Frank Schubert voor technische ondersteuning.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| PERFUSOR® VI | B.BRAUN | 87 222/0 | |
| Pipetus®-akku | Hirschmann | 9907200 | |
| Pipetten | Greiner | 606180 | |
| micro scissors | Fine Science Tools (F·S·L) | No. 14058-09 | |
| micro serrefine | Fine Science Tools (F·S·L) | No.18055-05 | |
| Micro clamps applicator | Fine Science Tools (F·S·L) | No. 18057-14 | |
| Straight micro forceps | Fine Science Tools (F·S·L) | No. 00632-11 | |
| Curved micro forceps | Fine Science Tools (F·S·L) | No. 00649-11 | |
| needle-holder | Fine Science Tools (F·S·L) | No. 12061-01 | |
| 1 ml syringe | B.Braun | 9161406V | |
| 5 ml syringe | B.Braun | 4606051V | |
| extension and connection lines | B.Braun | 4256000 | 30 cm, inner ø 1.2 mm |
| 6-0 silk (Perma-Hand Seide) | Ethicon | 639H | |
| 6-0 prolene | Ethicon | 8711H | |
| Microfil® MV diluent | FLOW TECH, INC | ||
| Microfil® MV - 120 | FLOW TECH, INC | MV - 120 (blue) | |
| MV curing agent | FLOW TECH, INC | ||
| Heparin 2500 I.E./5 ml | Rotexmedica | ETI3L318-15 | |
| Saline | Fresenius Kabi Deutschland GmbH | E15117/D DE | |
| Imalytics Preclinical software | Experimental Molecular Imaging, RWTH Aachen University, Germany | ||
| HepaVision | Fraunhofer MEVIS, Bremen, Germany | ||
| NanoZoomer 2.0-HT Digital slide scanner | Hamamatsu Electronic Press, Japan | C9600 | |
| Tomoscope Duo CT | CT Imaging GmbH, Erlangen, Germany | TomoScope® Synergy |
Referenties
- Bearden, S. E., Segal, S. S. Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles. Microcirculation. 12 (2), 161-167 (2005).
- Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. Physiological parameter values for physiologically based pharmacokin....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
