Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Covalente binding van antilichamen aan Cellulose Paper Discs en hun toepassingen in het blote oog Colorimetrisch Immuniteitsonderzoeken

14.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/54111

⸱

21 oktober 2016

 ,  ,  , 
1School of Applied Science, Temasek Polytechnic, 2University of Applied Sciences Utrecht

In dit artikel

Samenvatting

In dit manuscript worden periodaatoxidatie- en glutaraldehyde-crosslinking-methoden voor covalente immobilisatie van antilichamen op papierschijven gepresenteerd. De bindingsactiviteit van geïmmobiliseerde antilichamen werd geëvalueerd. Op basis van deze resultaten werd een glutaraldehyde-crosslinking-methode gebruikt om een nieuwe papiergebaseerde immunoassay voor immunoglobuline G (IgG) detectie te ontwikkelen.

Samenvatting

Dit rapport bevat twee methoden voor de covalente immobilisatie van capture antilichamen op cellulose filterpapier graad No. 1 (gemiddeld-flow filter papier) discs en rang No. 113 (fast-flow filter papier) discs. Deze cellulose papierschijven werden geënt met functionele aminegroepen door een silaankoppelingsmiddel techniek voor de antilichamen geïmmobiliseerd daarop. Perjodaat oxidatie en glutaaraldehyde verknopende werkwijzen werden gebruikt om invangantilichamen enten op de cellulose papierschijven. Om de maximale bindingscapaciteit van de invangantilichamen hun doelen na immobilisatie te waarborgen, werden de effecten van verschillende concentraties van natriumperjodaat, glutaaraldehyde en invangantilichamen op het oppervlak van de papierschijven onderzocht. De antilichamen die aan de amine-gefunctionaliseerde cellulose papierschijven werden bekleed door een glutaaraldehyde verknopingsmiddel vertoonden verbeterde bindingsactiviteit naar het doel ten opzichte van het perjodaat oxidatiewerkwijze. IgG (in muizen referentieserum) werd gebruikt als een meetobject in deze studie de toepassing covalent geïmmobiliseerde antilichamen getest met glutaaraldehyde. Een nieuwe papieren, enzymgekoppelde immunosorbent assay (ELISA) werd met succes ontwikkeld en gevalideerd voor de bepaling van IgG. Deze methode vereist geen apparatuur vereist en kan 100 ng / ml IgG te detecteren. De fast-flow filter papier was gevoeliger dan het filterpapier medium-flow. De incubatietijd van deze assay was kort en vereist kleine monstervolumes. Dit blote oog, kan colorimetrische immunoassay worden uitgebreid naar andere doelen die worden geïdentificeerd met conventionele ELISA gedetecteerd.

Inleiding

De point-of-care testen (POCT) diagnostisch onderzoek is belangrijk voor de ontwikkeling van nieuwe strategieën voor therapeutische, gepersonaliseerde geneeskunde, en thuiszorg 1. Cellulose papier worden veel gebruikt als platforms immunoassays, omdat ze goedkoop toegankelijk, en waarvan de consument 2. Bovendien, de poreuze structuur van cellulose papier bezit het vermogen om vloeistofstroom rijden zonder extra energie impact. Registraties van papieren bioanalyse kan al in de 20 e eeuw, wanneer het papier chromatografie eerst werd uitgevonden in 1952. Het meest voorkomende voorbeeld is immunochromatographic testen 3, zoals zwangerschap en diabetes teststrips worden gevonden. Deze tests leveren relatief snelle analyse tijden en goedkoop analyse 4. Vanwege hun eenvoud, zijn deze conventionele papierstrook testen op grote schaal gebruikt in diagnostische POCT 5.

Detectiemethoden waaronder colorimetrische 6, electrochemische 7 en 8 elektrochemiluminescentie methoden zijn gemeld doelen in biologische monsters te meten. Naast deze kwantitatieve methoden, een betrouwbare werkwijze voor het immobiliseren van antilichamen op cellulose papier is ook belangrijk voor de ontwikkeling van diagnostica. Niet-specifieke adsorptie is de belangrijkste strategie voor het modificeren van antilichamen op het oppervlak van de papieren inrichtingen 9, 10 maximale bindingscapaciteit hun doelen na immobilisatie te garanderen. De eerdere studie toonden aan dat antilichamen die zijn geadsorbeerd cellulose papier kan desorberen uit de vezels 11 met 40%. Aldus kan directe adsorptie van antilichamen op cellulose geen reproduceerbare resultaten 12. Covalente immobilisatie van antilichamen die zijn geënt op het papieroppervlak is een alternatieve methode om een doeltreffend papieren bioassays 13. Diverse werkwijzen zijn beschreven voor de modificatie van cellulose 14, 15 . Idealiter antilichamen hun oorspronkelijke functionaliteit na immobilisatie 12 handhaven. Carbonyldiimidazool gecombineerd met 1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluorboraat 16; 1-fluor-2-nitro-4-azidobenzene door een UV gebaseerde activeringsstrategie 17, 18; een chemoenzymatic strategie gebaseerd op xyloglucan modificatie 19; een 1,4-phenylenediisothiocyanate koppelingsmiddel 20; heteropolysaccharide oxidatie 21 klik chemie 22; en kationische porfyrinen 23 zijn gebruikt voor het covalent immobiliseren biomoleculen cellulose papier. Chitosan gemodificeerd papier is gebruikt papier immunodevices 24-26 ontwikkelen omdat het overvloedig en biocompatibel 27. Chitosan kationische en hecht sterk aan anionische cellulose 27. De capture antilichamen worden geïmmobiliseerd op het papier door chitosan coating en glutaaraldehyde verknoping. Perjodaat oxidatie is een andere methode voor het enten van de kapiteinUre antilichamen op het cellulose papier 28. In deze werkwijze wordt natriumperjodaat gespot op het papier 1,2-dihydroxy (glycol) -groepen in cellulose direct omzetten aldehydegroepen. De aldehydegroepen worden dan gebruikt om covalente bindingen tussen polysacchariden en antilichamen 28 te vormen. Hoewel de fabricage eenvoudig is, is het moeilijk om volledig spoelen natriumperjodaat. Ongewassen natriumperjodaat kunnen verdere oxidatie van de antilichamen die zijn geïmmobiliseerd op het cellulose papier veroorzaken, waardoor de activiteit en stabiliteit van de antilichamen N -. (3-dimethylaminopropyl) - N-ethylcarbodiimide hydrochloride en N-hydroxysuccinimide verknopers worden ook gebruikt om covalent immobiliseren antilichamen op electrospun poly-L-melkzuur en celluloseacetaat nanovezels voor de ontwikkeling van nanovezel gebaseerde testen 29.

In deze studie werd een silaankoppelingsmiddel techniek om aminefunctionele groepen op cellulos entene paper discs. Deze techniek helpt om de oorspronkelijke poriegrootte wicking en filtratiesnelheid van cellulose filtreerpapier behouden, waardoor maximale verticale doorstroming in immunoassays. Het silaan koppelingsreagens techniek is op grote schaal gebruikt in biosensoren om substraatoppervlakken met secundaire aminegroepen functionaliseren, gevolgd door verdere modificatie gebruikt biomoleculen. Het enten van aminegroepen op het matrijsoppervlak omvat een condensatiereactie tussen -OH-groepen van het organofunctionele silaan agenten en matrixsubstraat 30. De cellulose papier schijven werden gefunctionaliseerd met amine groepen op silaankoppeling tot en met 3-aminopropyltrimethoxysilaan (APS) 31. Dit werd gevolgd door het covalent immobiliseren invangantilichamen op twee verschillende manieren. De eerste methode betrokken binding van perjodaat geoxideerd invangantilichamen het amine gefunctionaliseerde cellulose papierschijven. De tweede methode gebruikt glutaaraldehyde als een verknopingsmiddel om de vangst Antibodi hechtenes aan de amine-groep gefunctionaliseerd cellulose papier discs. De aanwezigheid van invangantilichamen werd bevestigd door konijn anti-humaan IgG-fluoresceïne isothiocyanaat (FITC), met fluorescentie- moleculaire imager. De bindingsactiviteit van konijn-anti-humaan IgG-FITC anti-konijnen IgG geit werd eveneens door peroxidase substraat. De effecten van verschillende concentraties natriumperjodaat, glutaaraldehyde en invangantilichamen onderzocht. De toepassing test van de geïmmobiliseerde capture antilichaam werd succesvol uitgevoerd door de bepaling van IgG serum.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. Enten Amine functionele groepen op Cellulose papier Discs

  1. Bereid een vierkant stuk papier met een afmeting van 1 cm x 1 cm en 100 papierschijven gemaakt van rang No. 1 cellulose papier met een diameter van 6,0 mm (filtreerpapier gemiddeld-stroom) met een perforator.
  2. Om -NH2 groepen af te leiden op het papier schijven, meng 1 ml APS en 10 ml aceton in een 50 ml glazen fles in de zuurkast. Voeg papierschijven aan de vers bereide APS mengsel van reagentia, en incubeer gedurende 5 uur met orbitaal roeren (200 opm) bij kamertemperatuur 32.
    Let op: Behandel APS en aceton in de zuurkast.
  3. Giet overtollige oplossing uit de 50 ml glazen fles in een container organisch afval.
  4. Voeg 10 ml aceton aan de glazen fles, meng en decanteer volledig om eventueel niet gereageerd APS en andere onzuiverheden te verwijderen. Herhaal deze stap tweemaal.
  5. Spreid de papieren schijven op het papier handdoek en plaats in een 110 ° C oven gedurende 3 uur. laat depapierschijven afkoelen. Bewaar de schijven in een 50 ml centrifugebuis bij kamertemperatuur.
  6. Gebruik Fourier transformatie infraroodspectroscopie (FTIR) voor het enten van aminegroepen controleren de cellulose vierkant papier, zoals hieronder beschreven (figuur 3A).
    1. Zet de computer en open de FTIR spectroscopie instrument.
    2. Open de software voor FTIR spectroscopie.
    3. Ga naar 'Measurement → Initialize'. De rechthoeken voor 'BS: KBr': zal 'Lamp Infrared' en 'Laser' groen wanneer de initialisatie is voltooid.
    4. Kies 'Data' onder de rechthoeken, en selecteer '% Overbrenging "," Happ-Genzel', '45', '4.0' en 'Min: 400, Max: 4000' voor 'Measurement Mode', 'apodisering', ' Nee. scans ',' Resolution 'en' Range (cm-1) '.
    5. Klik op 'Measure'.
    6. Selecteer 'Data file' voor de achtergrond van gegevens. Schrijvenbeneden de commentaren.
    7. Klik op 'BKG' om de basislijn voor de achtergrond te krijgen.
    8. Bevestig het vierkant papier op de film monsterhouder.
    9. Selecteer 'Data file' voor de steekproef gegevens. Noteer de opmerkingen.
    10. Klik op 'Voorbeeld' om de spectra van het monster te verkrijgen.
    11. Sluit de FTIR spectroscopie toepassing en schakel de computer uit.
  7. Herhaal de bovenstaande stappen (stappen 1,1-1,6) amine-gefunctionaliseerde rang No. 113 vierkante cellulose papier en schijven (fast-flow filtreerpapier) te bereiden, en het verkrijgen van de FTIR-spectra van de rang No. 113 vierkante papier (Figuur 3B).

2. Covalente immobilisatie van antilichamen op Amine-gefunctionaliseerde Cellulose Paper Discs

figure-protocol-1
Figuur 1. Covalente immobilisatie van antilichamen op twee manieren.A. Antilichamen geïmmobiliseerd op met amine gefunctionaliseerde cellulose papierschijven met perjodaat oxidatie. Het koolhydraat residuen werden geoxideerd met natriumperjodaat tot aldehyde functionele groepen produceren. Vervolgens werden de geoxideerde antilichamen geladen amine-gefunctionaliseerde cellulose papierschijven. B. De antilichamen werden vervolgens geïmmobiliseerd op met amine gefunctionaliseerde cellulose papierschijven met glutaaraldehyde. Het amine gefunctionaliseerde cellulose papier schijven werden ondergedompeld in 0,05% glutaaraldehyde oplossing voor aldehydegroepen kennismaken met de papieren schijven. Na het wassen werden antilichamen op het aldehyde gefunctionaliseerde papier discs geladen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Immobiliseren antilichamen on-amine gefunctionaliseerde cellulose papier schijven door middel van perjodaat oxidatie (Figuur 1A).
    1. Meng 1 pl 2,5 mM natrium periodate met 2 pi 0,1 mg / ml konijn anti-humaan IgG-FITC en 7 ui 100 mM pH 5,5 acetaatbuffer in een 1,5 ml buis en incuberen van het mengsel in het donker gedurende 30 min.
      LET OP: Volg deze volume verhouding meer geoxideerd antilichamen te bereiden indien nodig. Het volume verhouding van de concentratie van natriumperjodaat en konijn anti-humaan IgG-FITC optimaliseren.
    2. Verdun de bovenstaande antilichaamoplossing met 30 ui 50 mM fosfaatbuffer zoutoplossing (PBS, pH 7,4) tot een eindvolume van 40 pi.
    3. Bereid drie amine-gefunctionaliseerde medium-flow filter papier schijven en drie-amine gefunctionaliseerde fast-flow papieren schijven (zoals beschreven in paragraaf 1).
      1. Belasting 5 pi van de natriumperjodaat geoxideerd konijn anti-humaan IgG-FITC op elk medium stroomfilter papieren schijf en 8 pi op elke fast-flow filterpapier disk. Houd deze papieren schijven in het donker gedurende één uur bij kamertemperatuur.
    4. Was beide van de papieren schijf met 0,2 ml wassen buffer (50 mM Tris buffer met 0,15 M NaCl en 0,05% surfactant, pH 7,4). Herhaal het wassen drie keer.
    5. De fluorescentie beelden door een moleculaire fluorescentie imager om de aanwezigheid van antilichamen te identificeren op elke cellulosepapier schijf 32. Gebruik lege papierschijven (behandeld met dezelfde concentratie van antilichamen bij afwezigheid natriumperjodaat) als controle (Figuur S1 figuur S3).
      OPMERKING: Bij experimentele optimalisering, de concentratie van één parameter die moet worden geoptimaliseerd en de concentraties van alle andere parameters vast. Een hoge fluorescentie-intensiteit verhoogt de hoeveelheid invangantilichamen die zijn geïmmobiliseerd op de cellulose papierschijven.
  2. Immobiliseren antilichamen op amine gefunctionaliseerd cellulose papier schijven door middel van glutaaraldehyde (Figuur 1B).
    1. Voeg de drie APS behandeld medium-flow filter papier schijven en de drie fast-flow filterpapier discs (described in paragraaf 1) tot 2 ml van 50 mM PBS (pH 7,4) die 0,05% glutaaraldehyde bevat gedurende 1 uur met orbitaal roeren bij kamertemperatuur.
      Let op: Behandel glutaraldehyde in de zuurkast.
    2. Plaats drie schijven elk in twee 1,5 ml centrifugebuizen. Voeg 1 ml gedeïoniseerd (DI) water aan elke buis en schud de buizen gedurende 10 sec. Verwijder het water door het opzuigen met een pipet. Herhaal dit nog twee keer om eventuele niet-gereageerd glutaaraldehyde te verwijderen.
    3. Belasting 5 pl 25 ug / ml konijn anti-humaan IgG-FITC (vangantilichaam) op beide aldehyde gefunctionaliseerde medium stroomfilter papieren schijf en voeg 8 pi op elk aldehyde gefunctionaliseerde fast-flow filterpapier disk. Incubeer in het donker gedurende ongeveer 20 minuten bij kamertemperatuur. Voeg vervolgens 10 ui 50 mM PBS (pH 7,4) aan elk papieren schijf zonder de antilichamen en incubeer gedurende 40 min voor het amine aldehyde reactie.
    4. Was de papierschijven met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. HerhaalWas tweemaal.
    5. Fotografeer de fluorescentie-beelden door middel van een fluorescentie moleculaire imager om te controleren op de aanwezigheid van antilichamen op elke cellulose papieren schijf 33. Gebruik blanco papier schijven als een controle.
      Opmerking: In figuur 4, "0" staat voor de blanco papieren schijf die met dezelfde concentratie van FITC-antilichaam in de afwezigheid van glutaaraldehyde werd behandeld; in figuur 5A, werden de lege papierschijven behandeld met glutaraldehyde, maar geen FITC-antilichamen werden op de papierschijven geplaatst.
  3. Droog de papierschijven (van 2.1 en 2,2) bij 37 ° C gedurende 10 minuten.
  4. Blokkeer de papierschijven met 15 pl blokkerende buffer (10% magere melkpoeder in 50 mM Tris buffer, pH 7,4, met 0,15 M NaCl) gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.
  5. Load 5 ul en 8 gl peroxidase geconjugeerd geit anti-konijn IgG in PBS (1: 10.000) op middelgrote stroming en fast-flow filter papierschijven respectievelijk. Incubeer30 min in het donker bij kamertemperatuur.
  6. Was de papierschijven met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. Herhaal het wassen drie keer.
    Opmerking: Het is niet nodig de wasbuffer verwijdert de resultaten niet worden beïnvloed door de buffer.
  7. Laad een 10 pi mengsel van 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) en waterstofperoxide oplossing op elke schijf.
  8. Neem beelden van de papieren schijven met een digitale camera of smartphone na 5 min incubatie.
    Opmerking: In figuur 5B, "0" staat voor de papierschijven die werden behandeld met glutaraldehyde, gevolgd door het laden antilichaam-HRP (mierikswortelperoxidase) conjugaat in afwezigheid van FITC-antilichaam.

3. Papier-gebaseerde ELISA voor IgG Detection

figure-protocol-2
Figuur 2. Schematische weergave van de papieren ELISA for IgG detectie. invangantilichamen werden covalent geïmmobiliseerd op de aldehyde-gefunctionaliseerde cellulose papierschijven met glutaaraldehyde. De cellulose papierschijven werden geblokkeerd met blokkerende buffer. Doelwit IgG werd vervolgens toegevoegd aan de schijven, gevolgd door het laden van HRP-geconjugeerde antilichamen signaal. Tenslotte werd de TMB en waterstofperoxide mengsel oplossing op elk papieren schijf voor de kleur uitlezing geladen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. Voeg 5 ml 0,05% glutaaraldehyde oplossing (bereid in 50 mM PBS, pH 7,4) in een 20 ml glazen fles. Dompel 15 amine-gefunctionaliseerde medium stroomfilter papierschijven in deze oplossing en bewaren 1 uur onder schudden bij kamertemperatuur.
    1. Tegelijkertijd Herhaal stap 3.1 tot en met nog eens 15 aldehyde gefunctionaliseerd fast-flow filter papier discs te bereiden.
      Let op: Behandel glutaraldehyde in de rookkap.
  2. Om ongereageerde glutaaraldehyde uit de papierschijven verwijderen, plaatst het 15 medium stroomfilter papierschijven in een 15 ml centrifugebuis, en de 15 snelle stroomfilter papierschijven in een 15 ml centrifugebuis. Voeg 5 ml van DI water aan elke buis en schud de buizen gedurende 10 sec. Verwijder het water door het opzuigen met een pipet. Herhaal dit twee keer om eventueel niet gereageerd glutaaraldehyde te verwijderen.
  3. Droog de papieren schijven in een 37 ° C oven.
  4. Voeg 5 ul en 8 pi 0,025 mg / ml muizen-IgG-Fc-fragment antilichamen tegen elk van de medium-stroom en fast-flow filter papierschijven respectievelijk, en incubeer gedurende 20 minuten.
  5. Voeg 10 ul van 50 mM PBS (pH 7,4) aan elk papieren schijf zonder de antilichamen en incubeer gedurende 40 min voor het amine aldehyde reactie.
  6. Was de papierschijven met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. Herhaal het wassen drie keer.
  7. Droog de papierschijven in een oven op 37 ° C.
  8. Blokkeer de papieren schijven wi 15 pl blokkerende buffer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.
  9. Was beide papieren schijf met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. Herhaal het wassen drie keer.
  10. Run IgG-normen.
    1. Belasting 10 pl diverse IgG concentraties (bijvoorbeeld 0, 10, 125, 250 en 500 ng / ml in PBS) op elke schijf in drievoud. Incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd.
  11. Was de papierschijven met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. Herhaal het wassen drie keer.
  12. Belasting 10 gl HRP geconjugeerd muis-IgG-Fc-fragment antilichamen (1: 10.000, 10 mM PBS, pH 7,4) en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd.
  13. Was de papierschijven met 0,2 ml wasbuffer op een papieren handdoek. Herhaal het wassen drie keer.
    Opmerking: Het is niet nodig de wasbuffer verwijdert de resultaten niet worden beïnvloed door de aanwezigheid van buffer.
  14. Laad een 10 pi mengsel van TMB en waterstofperoxide op elke schijf.
  15. Take beelden van al het papier schijven met een digitale camera of smartphone na 5 min incubatie.
    Opmerking: In figuur 6A, "0" staat voor papierschijven behandeld met invangantilichaam immobilisatie, en het antilichaam-HRP / TMB oplossing zonder serum IgG.
  16. Analyseer de intensiteit van elke papieren schijf in het beeld van Image J.
    1. Omzetten van de foto's genomen in stap 3.15 tot 'tif' format.
    2. Open 'Afbeelding J' software.
    3. Ga naar 'Bestand → Open', kies dan de afbeelding om te analyseren.
    4. Klik op de knop vorm 'Oval'.
    5. Ga naar 'Beeld → Type → 32 bit'.
    6. Ga naar 'Edit → Omkeren'.
    7. Ga naar 'Analyze → Measure'.
    8. Kopieer en analyseren van de gegevens in een spreadsheet.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

figure-results-1
Figuur 3. Fourier transformatie infrarood (FTIR) spectra van onbehandelde en behandelde APS-medium stroomfilter vierkant papier (A) en fast-flow filter vierkant papier (B). A. De spectra voor onbehandelde medium stroomfilter vierkant papier was vergelijkbaar met dat van APS behandelde medium stroomfilter vierkant papier. De toename van de intensiteiten op banden van ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Directe coating van affiniteit gezuiverd geit-anti-muis IgG-Fc capture antilichaam op niet-gemodificeerde cellulose papierschijven werd uitgevoerd IgG concentraties te detecteren. De resultaten gaven aan dat verdere fixatie van de invangantilichamen vereist voor reproduceerbaarheid. Het silaan techniek werd met succes gebruikt voor aminefunctionele groepen te introduceren aan de cellulose papierschijven 34. De concentratie van APS beïnvloedt de immobilisatie van antilichamen. Derhalve werd de hoeveelheid APS ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd financieel ondersteund door het Ministerie van Onderwijs, Singapore, via de Translational and Innovation Grant (MOE2012-TIF-2-G-009).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Cellulose filter paper, Grade 1 (medium flow filter paper)GE Healthcare Pte Ltd Singapore 1001 110
Cellulose filter paper, Grade 113 (Fast flow filter paper)Sigma-Aldrich, Singapore1113-320
GlutaraldehydeSigma-Aldrich, SingaporeG6257Grade II, 25% in H2O
SurfactantTween-20, Sigma-Aldrich, SingaporeP2287
Bovine serum album Sigma-Aldrich, SingaporeA2153
Skimmed milk powderLouis François Verpakt door Kitchen Capers, Singapore
Tris basePromegaH5135
Sodium periodateMerck106597
Na2HPO4Merck106585
KH2PO4Merck104873
NaClCALBIOCHEM567441
NaOHMerck106462
HClMerck100317
phosphate buffer saline (PBS)N/AN/APBS, bevattend 137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.0 mmol⁠/⁠L Na2HPO4 en 1.5 mmol/L KH2PO4, wordt bereid met water en aangepast tot pH 7.4 met 0.1 mol/L NaOH of 0.1 mol/L HCl
AcetoneTee Hai Chem Pte Ltd Singapore9005-68
Mengsel van TMB en waterstofperoxide oplossing 1-Step ultra TMB-ELISA oplossing, Thermo Scientific Pierce340291 L
Konijn anti-menselijk IgG-FITCTWC/Bio Pte Ltd Singaporesc-2278
Peroxidase geconjugeerd geit anti-konijn IgGTWC/Bio Pte Ltd Singaporesc-2030
Affiniteit gezuiverde geit anti-Muis IgG-Fc coating antilichaamBethyl Laboratories, IncA90-131A
Muis referentie serumBethyl Laboratories, IncRS10-101-59.5 mg/ml
HRP geconjugeerd geit anti-muis IgG-Fc detectie antilichaamBethyl Laboratories, IncA90-131P
Apparatuur
Fourier transform infrarood spectrofotometerShimadzu IR Prestige-21 N/A
Fluorescentie moleculaire imagerPharos FXTM plus moleculaire imager, Bio-Rad, SingaporeN/A
OvenNUVE FN500N/A
Turbo mixer VM-2000MYC LTDN/A
ImageJRGB, gratis downloadN/A

Referenties

  1. Curtis, K. A., Rudolph, D. L., Owen, S. M. Rapid detection of HIV-1 by reverse-transcription, loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP). J. Virol. Methods. 151 (2), 264-270 (2008).
  2. Martinez, A. W., Phillips, S. T., Carrilho, E., Thomas, S. W., Sindi, H., Whitesides, G. M. Simple telemedicine for developing regions: camera phones and paper-based microfluidic devices for real-time, off-site diagnosis. Anal. Chem. 80 (10), 3699-3707 (2008).
  3. Lode, P. V. Point-of-care immunotesting: approaching the analytical performance of central laboratory methods. Clin. Biochem. 38 (7), 591-606 (2005).
  4. Posthuma-Trumpie, G. A., Amerongen, A. V., Korf, J., Berkel, W. J. V. Perspectives for on-site monitoring of progesterone. Trends Biotechnol. 27 (11), 652-660 (2009).
  5. Lim, D. V., Simpson, J. M., Kearns, E. A., Kramer, M. F. Current and developing technologies for monitoring agents of bioterrorism and biowarfare. Clin. Microbiol. Rev. 18 (4), 583-607 (2005).
  6. Li, X., Tian, J., Shen, W. Progress in patterned paper sizing for fabrication of paperbased microfluidic sensors. Cellulose. 17 (3), 649-659 (2010).
  7. Nie, Z., et al. Electrochemical sensing in paper-based microfluidic devices. Lab Chip. 10, 477-483 (2010).
  8. Delaney, J. L., Hogan, C. F., Tian, J., Shen, W. Electrogenerated chemiluminescence detection in paper-based microfluidic sensors. Anal. Chem. 83 (4), 1300-1306 (2011).
  9. Oh, Y. K., Joung, H. A., Kim, S., Kim, M. G. Vertical flow immunoassay (VFA) biosensor for a rapid one-step immunoassay. Lab Chip. 13 (5), 768-772 (2013).
  10. Cheng, C. M., et al. Paper-based ELISA. Angew. Chem. 122 (28), 4881-4884 (2010).
  11. Jarujamrus, P., Tian, J., Li, X., Siripinyanond, A., Shiowatana, J., Shen, W. Mechanisms of red blood cells agglutination in antibody-treated paper. Analyst. 137 (9), 2205-2210 (2012).
  12. Credou, J., Volland, H., Dano, J., Berthelot, T. A one-step and biocompatible cellulose functionalization for covalent antibody immobilization on immunoassay membranes. J. Mat. Chem. B. 1, 3277-3286 (2013).
  13. Kong, F., Hu, Y. F. Biomolecule immobilization techniques for bioactive paper fabrication. Anal. Bioanal. Chem. 403, 7-13 (2012).
  14. Orelma, H., Teerinen, T., Johansson, L. S., Holappa, S., Laine, J. CMC-modified cellulose biointerface for antibody conjugation. Biomacromolecules. 13, 1051-1058 (2013).
  15. Yu, A., et al. Biofunctional paper via covalent modification of cellulose. Langmuir. 28 (30), 11265-11273 (2012).
  16. Stollner, D., Scheller, F. W., Warsinke, A. Activation of cellulose membranes with 1,1′-carbonyldiimidazole or 1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate as a basis for the development of immunosensors. Anal Biochem. 304 (2), 157-165 (2002).
  17. Bora, U., Sharma, P., Kannan, K., Nahar, P. Photoreactive cellulose membrane - a novel matrix for covalent immobilization of biomolecules. J. Biotechnol. 126 (2), 220-229 (2006).
  18. Sharma, P., Basir, S. F., Nahar, P. Photoimmobilization of unmodified carbohydrates on activated surface. J Colloid Interface Sci. 342 (1), 202-204 (2010).
  19. Brumer, H., Zhou, Q., Baumann, M. J., Carlsson, K., Teeri, T. T. Activation of crystalline cellulose surfaces through the chemoenzymatic modification of xyloglucan. J. Am. Chem. Soc. 126 (18), 5715-5721 (2004).
  20. Araujo, A. C., Song, Y., Lundeberg, J., Stahl, P. L., Brumer, H. Activated paper surfaces for the rapid hybridization of DNA through capillary transport. Anal Chem. 84 (7), 3311-3317 (2012).
  21. Xu, C., Spadiut, O., Araujo, A. C., Nakhai, A., Brumer, H. Chemo-enzymatic Assembly of Clickable Cellulose Surfaces via Multivalent Polysaccharides. ChemSusChem. 5 (4), 661-665 (2012).
  22. Filpponen, I., et al. Generic method for modular surface modification of cellulosic materials in aqueous medium by sequential "click" reaction and adsorption. Biomacromolecules. 13 (3), 736-742 (2012).
  23. Feese, E., Sadeghifar, H., Gracz, H. S., Argyropoulos, D. S., Ghiladi, R. A. Photobactericidal porphyrin-cellulose nanocrystals: synthesis, characterization, and antimicrobial properties. Biomacromolecules. 12 (10), 3528-3539 (2011).
  24. Zang, D., Ge, L., Yan, M., Song, X., Yu, J. Electrochemical immunoassay on a 3D microfluidic paper-based device. Chem. Commun. 48 (39), 4683-4685 (2012).
  25. Ge, L., Yan, J. X., Song, X. R., Yan, M., Ge, S. J., Yu, J. H. Three-dimensional paper-based electrochemiluminescence immunodevice for multiplexed measurement of biomarkers and point-of-care testing. Biomaterials. 33 (4), 1024-1031 (2012).
  26. Wang, S., et al. Paper-based chemiluminescence ELISA: lab-on-paper based on chitosan modified paper device and wax-screen-printing. Biosens. Bioelectron. 31 (1), 212-218 (2012).
  27. Koev, S. T., et al. Chitosan: an integrative biomaterial for lab-on-a-chip devices. Lab Chip. 10, 3026-3042 (2010).
  28. Wang, S. M., et al. Simple and covalent fabrication of a paper device and its application in sensitive chemiluminescence immunoassay. Analyst. 137 (16), 3821-3827 (2012).
  29. Sadira, S., Prabhakaranc, M. P., Wicaksonob, D. H. B., Ramakrishna, S. Fiber based enzyme-linked immunosorbent assay for C-reactive protein. Sensor Actuat B-Chem. 205, 50-60 (2014).
  30. Koga, H., Kitaoka, T., Isogai, A. In situ modification of cellulose paper with amino groups for catalytic applications. J. Mater. Chem. 21, 9356-9361 (2011).
  31. Klemm, D., Heublein, B., Fink, H. P., Bohn, A. Cellulose: fascinating biopolymer and sustainable raw material. Angew. Chem., Int. Ed. 44 (22), 3358-3393 (2005).
  32. Fernandes, S. C. M., et al. Bioinspired antimicrobial and biocompatible bacterial cellulose membranes obtained by surface functionalization with aminoalkyl groups. ACS Appl. Mater. Interfaces. 5 (8), 3290-3297 (2013).
  33. Pharos FX plus molecular imager instructions, Catalog Number 170-9460. , (2005).
  34. Tee, Y. B., Talib, R. A., Abdan, K., Chin, N. L., Basha, R. K., Yunos, K. F. M. Aminosilane-grafted cellulose. BioResourses. 8 (3), 4468-4483 (2013).
  35. Xing, Y., et al. Bioconjugated quantum dots for multiplexed and quantitative immunohistochemistry. Nat Protoc. 2, 1152-1165 (2007).
  36. Guidi, A., Laricchia-Robbio, L., Gianfaldoni, D., Revoltella, R., Del Bono, G. Comparison of a conventional immunoassay (ELISA) with a surface plasmon resonance-based biosensor for IGF-1 detection in cows' milk. Biosens Bioelectron. 16, 971-977 (2001).
  37. Ahmed, S., Bui, M. N., Abbas, A. Paper-based chemical and biological sensors: Engineering aspects. Biosens Bioelectron. 77, 249-263 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Antilichaamimmobilisatieglutaaraldehyde crosslinkingperiodaatoxidatiepapiergebaseerde ELISAcolorimetrische assay met het blote oogpoint of care diagnostiekFTIR spectroscopieIgG detectieaminefunctionalisering
Covalente binding van antilichamen aan Cellulose Paper Discs en hun toepassingen in het blote oog Colorimetrisch Immuniteitsonderzoeken
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.