Urineweginfectie in een kleine diermodel: transuretrale catheterisatie van mannelijke en vrouwelijke muizen

Samenvatting

De gevestigde model van transuretrale catheterisatie van muizen kan de studie blaas aandoeningen, met inbegrip van infectie van de urinewegen, maar kan alleen worden uitgevoerd bij vrouwtjes. Een nieuw model van mannelijke transuretrale instillation, gepresenteerde, kan onderzoek op een gebied dat gekenmerkt door sterke klinische en epizoötiologische verschillen tussen de geslachten.

Samenvatting

Infecties van de urinewegen (UTI) zijn zeer gemeenschappelijk wereldwijd, significante morbiditeit en gezondheidszorg-geassocieerde kosten oplopen. Kleine dierlijke modellen, die nauwkeurig vestiging van de ziekte en de progressie, toestaan dat dissectie van gastheer-pathogeen interacties en generatie van immuniteit tegen infectie. Bij muizen, intravesicale instillation van uropathogenic E. coli, de verwekker in meer dan 85% van de communautaire verworven UTI, recapituleert veel van de stadia van de infectie bij de mens in acht genomen. Tot voor kort echter kon UTI alleen worden gemodelleerd bij vrouwelijke dieren. Deze beperking heeft belemmerd de studie van sex-gerelateerde verschillen in UTI, evenals andere blaas aandoeningen, zoals kanker. Hier beschrijven we een methode voor het indruppelen van mannelijke muizen waarmee directe vergelijking tussen vrouwelijke en mannelijke dieren en bieden een gedetailleerd protocol om te beoordelen van blaas weefsel door stroom cytometry als een middel om host reacties op infectie beter te begrijpen. Deze benaderingen zullen samen, hulp bij de identificatie van gastheer factoren die aan seksuele vooroordelen waargenomen in UTI en andere blaas-geassocieerde ziekten bijdragen.

Inleiding

Infecties van de urinewegen (UTI) zijn een van de meest voorkomende infecties in ontwikkelde landen¹. Infectie tarieven zijn vergelijkbaar tussen vrouwtjes en mannetjes bij pasgeborenen en de oudere². Premenopausal volwassen vrouwen, echter, hebben een sterk verhoogde incidentie van Gemeenschap-verworven UTI in vergelijking met mannen^2,3. Gezien het feit dat deze ziekte invloed voornamelijk vrouwen, is fundamenteel en klinisch onderzoek overwegend gericht op UTI bij vrouwtjes. Urineweginfecties bij mannen is echter een aanzienlijke en understudied gezondheidszorg....

Protocol

Muis experimenten werden uitgevoerd overeenkomstig goedkeuring van protocolnummer 2012-0024 door het Comité d'éthique nl expérimentation animale Paris Centre et Sud (de ethische commissie voor dierproeven), in toepassing van de Europese richtlijn 2010/63 EU.

1. bereiding van katheters

1. Bereiden een pediatrische intraveneuze-access canule voor elke groep van muizen worden besmet. Met behulp van de ingebouwde veermechanisme, afstoten elke canule van de naald, volgens de instructies van de fabrikant. Gooi de naalden, behoud van alleen de kunststof intraveneuze canule.
2. Steriliseren katheters in een laminaire flow-kap voor één....

Resultaten

In de ontwikkeling van dit protocol leeftijd cohorten van vrouwelijke en mannelijke C57Bl/6 muizen 6 tot 8 weken werden bijgebracht, en bacteriële belasting geëvalueerd in blazen op tijdstippen, variërend van 1 uur tot 30 dagen. De resultaten van deze studies zijn gedetailleerd elders (Zychlinsky Scharff et al., in behandeling). Hier presenteren we representatieve gegevens uit 24 hr infecties. Met name, was bacteriële belasting gelijk tussen mannelijke en vrouwelijke muizen op 24.......

Discussie

Transuretrale instillation van mannelijke muizen biedt veel nieuwe onderzoeksmogelijkheden naar de invloed van geslacht op blaas mucosal ziekte, maar ook verschillende uitdagingen. Plaats een beperking is dat de instillation aanvankelijk blijken kan te zijn technisch moeilijk, wat resulteert in buitensporige ontsteking tijdens het inbrengen van de katheter. Verbetering van de techniek kan worden bereikt door de instillation van dode muizen met een gekleurde oplossing, zoals Evans blauwe kleurstof. Om te bevestigen dat de.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
BD Insyte Autoguard Shielded IV Catheters 24 G, 0,7 mm externe diameter, 14 mM lang	BD Medical	381811 of 381411*	* catalogusnummer is landsafhankelijk
inoculatieslus	Greiner Bio-One	731171
LB Miller bouillon	Difco	244620
LB Miller agar	Difco	244520
Cuvettes	Bio-rad	223-9955
spuit	B Braun	9166017V
Duimtang (Adson)	Fine Science Tools	11006-12
5 ml buisjes, polypropyleen	Falcon	352063
Tissue Ruptor wegwerp sondes	Qiagen	990890
15 ml flip-cap buisjes	Thermo Scientific	362694
DNAse	Invitrogen	18047019
Liberase TM	Sigma-Aldrich	5401119001	moet worden gesplitst en bewaard bij -20 °C om herhaalde bevriezing en ontdooiing te voorkomen
100 µM MACS SmartStrainers	Miltenyi	130-098-463	compatibel met 15 ml buisjes, voorkeur
100 µm celstrainers	Falcon	352360	compatibel met 50 ml buisjes, als MACS Smart Strainers niet beschikbaar zijn
96-wells plaat	Falcon	353077
Fc blok	BD Pharmingen	553142	anti-CD16/CD32
anti-muis CD45 antilichaam	BD Biosciences	561487	veel verschillende fluorescentie conjugatie opties zijn beschikbaar
5 ml buisjes polystyreen met filterdop	Falcon	352235
insulinespuit	Terumo	BS05M2913
handmatige homogenisator	Qiagen	9001272	TissueRuptor
flow cytometer	BD Biosciences	N/A	Fortessa SORP
Flow cytometry software	BD Biosciences	N/A	Diva