$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Bedenk een Sampling Matrix te zorgen voor een systematische en uitgebreide bemonstering van Lysimeteronderzoek
- Verdeel lysimeter in voxels van vaste lengte, breedte en diepte.
- Gebruik een Euclidische ruimte coördinatensysteem en verdeel de totale lengte van elke (X, Y en Z) in een voldoende aantal gelijke afstanden zijn geplaatst. Beschouw gooi de bodem nabij de wanden van de lysimeter om grens te vermijden.
Opmerking: Een buffer van 5 cm langs de vier wanden in dit experiment om grens te vermijden heeft, met dien verstande dat het volume grond verzameld volstaat. - Wijs elk monster een unieke XYZ locatie en te identificeren als een voxel.
Opmerking: In opgraving, X is de locatie langs de breedte van de helling, Y geeft locatie langs de lengte van de helling, terwijl Z geeft plaats langs de diepte van de helling. De grootte van de intervallen in elke dimensie bepaalt de breedte, lengte en diepte van de voxels. Figure 2 toont de verdeling van de lysimeter na het bepalen tussenruimten langs de gekozen oorsprong voor de XYZ systeem. De verdeling in de huidige uitgraving regeling heeft 9 intervallen langs beide Y en Z-richtingen en 4 intervallen langs de X-richting, wat een totaal van 324 voxels van 10 cm x 20 cm x 10 cm afmeting (figuur 3).
OPMERKING: De bemonsteringsstrategie gekozen zodat het gehele stelsel gelijk is bemonsterd met minimale schade aan de sensoren. Grenzen van elke voxel (1-2 cm) worden verwijderd om kruisbesmetting uit naburige voxels te beperken. Daarnaast voxel dimensies te zorgen dat er voldoende grond materiaal is beschikbaar voor microbiologisch, geochemische en hydrologische monstername in elke voxel.

Figuur 1. Side-view van de lysimeter. Uitzicht op lysimeter uit de kwel face. zichtbaar zijn ook drie sensor regio's (wit PVC-buizen) langs de helling en sprinklerinstallatie op de vier hoeken.

Figuur 2. Sampling Scheme. Sampling schema van lysimeter langs XYZ. A. De X-afmeting verdeelt de breedte in 4 secties van elk 10 cm, terwijl Y verdeelt de lengte tot 20 cm. B. De Z dimensie geeft diepte en werd verdeeld in 9 lagen van 10 cm diepte. Een grens van 5 cm langs de randen van de lysimeter werd geïdentificeerd aan de inzameling van de monsters die mogelijk grens effect kan vertonen voorkomen. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Figuur 3. Drie-dimensional voorstelling van een voxel. Visuele schema van een voxel langs de XYZ vlak van de lysimeter. De hele helling werd opgedeeld in 324 dergelijke voxels, waarbij elke voxel beeltenis van een enkele steekproefeenheid. Klik hier om dit bestand te downloaden.
2. Voeg Brilliant Blue FCF Dye Track waterinfiltratie in de Helling
- Toepassen brilliant blue kleurstof aan het oppervlak van de bodem, voldoende boven 105 cm van het oppervlak langs de Y-richting bedekken. Voor de overgebleven bodem met kunststof platen.
- Kies een concentratie (hier 10 g / l) om het contrast tegen zwarte basalt bodem te garanderen. Voeg de kleurstof irrigatiesysteem tanks en verdun met water tot de gewenste concentratie.
- Bepaal de duur van de irrigatie basis van de gewenste diepte van de voorste en infiltratie door het irrigatiesysteem geleverd rate.
LET OP: Voor deze studie, een irrigation snelheid van 30 mm / uur gedurende 20 min (figuur 4) vóór uitgraving wordt voldoende geacht om heterogene patronen van waterinfiltratie identificeren bij de eerste centimeters. - Na kleurstof applicatie, geef het tijd voor de infiltratie te stoppen en het vocht staten binnen de lysimeter in evenwicht. Voor deze studie, was een periode van 10 uur ( 's nachts) tussen kleurstof toepassing en opgraving geschikt is.
3. Afbakening van Voxels
- Attach meetlint over de lengte van de helling van een in-situ referentiesysteem voor begeleiding bij afbakening van voxels.
- Markeer de afmeting van elk bodem voxel met de hulp van het meetlint. Teken rasterlijnen voor elke laag gebruik van aluminium-blade schilden en plastic stopverf messen (figuur 4). Gooi de grens materialen (5 cm uit elke wand begrenzing effecten te voorkomen).

Figuur 4. Bovenaanzicht van lysimeter. Deze weergave toont het geverfde oppervlak van laag 2 (10 cm diep). Grids getekend op het grondoppervlak van steekproeven te helpen zijn ook zichtbaar, samen met de kern gaten regio's op elke voxel na microbiologische monstername.
4. Microbiologie Monsternemingsprocedure
- Verzamel microbiologie monsters aseptisch uit elke voxel voorafgaand aan de hydrologische en geochemische analyses om kruisbesmetting van de monsters te voorkomen. Zorg ervoor dat de nieuwe handschoenen worden gedragen door alle leden van de uitvoering van de opgraving om verontreiniging van de menselijke huid te verminderen.
- Gebruik een bodem corer van 1 cm diameter en 20 cm hoog, en een dunne spatel voor microbiologische monstername. Maak de corer en de spatel met gedestilleerd water, droog het af met een schone doekjes, en spoel af met 75% ethanol met behulp van een spuitfles. Laat corer en spatel aan de lucht drogen.
- Let op de collectie tijd van elk monster. Gebruik de kernboor core tot een diepte van 10 cm aan elke voxel locatie en de spatel om het bodemmonster in vooraf gesteriliseerde kunststof zakken (figuur 5) leeg. Zorg ervoor dat de tas vlak voor het afzetten van het monster te openen. Homogeniseer het monster zakjes met de hand.
- Het monster zak in een ijs koeler tijdens de bemonstering en dragen zo spoedig mogelijk de -80 ° C vriezer.

Figuur 5. Microbiologie monstername. Een kleine handheld corer van 20 cm x 1 cm, steriele zakken en spatel is hier te zien tijdens de microbiologische bemonstering. Klik hier om dit bestand te downloaden.
5. Geochemie en Hydrologie Sample Collection
- Foto geverfd regio's in X- en Y-plAnes tijdens graafwerkzaamheden voor dieptes waar de kleurstof wordt waargenomen. Gebruik een kleurenkaart met referentie voor de kleur waargenomen (Figuur 6) verschaffen. Zorg voor een goede natuurlijke verlichting aanwezig is om correct te documenteren kleurintensiteit.
- Kalibreren draagbare x-ray fluorescentie spectrometer (pXRF) per dag vóór het begin van de metingen. Voor de kalibratie en meting details, zie instructies van de fabrikant 13 (figuur 7). In het kort, plaatst u het instrument op de houder en richt de bundel venster direct naar de fabriek metalen kraal. Selecteer 'Cal' en wacht 30 seconden om de kalibratie te worden ingevuld.
- Reinig de bundel venster voordat het nemen van elke meting. Meet het oppervlak van elke voxel in drievoud op drie verschillende locaties. Plaats de pXRF instrument op het grondoppervlak en wacht 90 seconden om de meting te worden ingevuld.
OPMERKING: X-ray probleemloos door een grote afstand in de richting van de bundel. Daarom ensuopnieuw dat alleen een opgeleid personeel zorgt voor de apparatuur en zorgt voor de juiste veiligheidsprotocollen.

Figuur 6. Kleur kaart te volgen kleurstof infiltratie. Elke locatie met zichtbare kleurstofpenetratie werd gefotografeerd met een kleur kaart dient als referentie. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Figuur 7. Portable X-ray Fluorescentie Spectrometer. Handheld pXRF gepositioneerd op het oppervlak van een voxel. Metingen werden bij drie verschillende locaties op het oppervlak van elk voxel en vervolgens gemiddeld.
- Clean metallic kernen (height = 3 cm, diam. = 5,7 cm) en polycarbonaat cores (hoogte = 6 cm, diam. = 5,7 cm) voor bulk- dichtheid (BD) en hydraulische geleidbaarheidsmetingen (Ksat) van voxels gewenst, respectievelijk (figuur 8).
- Verticaal voegen metalen kernen en polycarbonaat kernen (verticaal Ksat) in gewenste voxels zorg ervoor dat u de sensoren of sensor draden beschadigen. Doe dit door zachtjes hameren de kernen in de bodem, het verzorgen van een vlakke ondergrond, zoals blok hout tussen de kern en de hamer te gebruiken om storingen te minimaliseren aan de bodem. Bovendien, wanneer de kern is halverwege in de bodem, plaats een tweede kern bovenop de eerste kern. Plaats het houten blok boven op de tweede kern en voorzichtig hamer het blok tot de eerste kern ingebed in de bodem van de kern rand nog zichtbaar.
- Plaats kernen voor horizontale Ksat als de laterale zijde van de voxel opent met sequentiële opgraving. Gebruik de houten blok en de tweede kern, zoals vermeld in stap 5,4 tot verdichting te minimaliseren.
- Let erop dat de voxelbemonsterd wordt vooraf geïsoleerd van grenzen en de naburige voxels om geochemische monstername. Gebruik plastic plamuurmes hiervoor, gevolgd door handbediende troffels bodemmonsters rond metaal of polypropyleen kernen verzamelen in gemerkte geochemische (GC) voor monsters tot kernen gemakkelijk verwijderd kan worden (bijvoorbeeld figuur 9a, b).

Figuur 8. Bulkdichtheid en doorlatendheid kernen. Polypropyleen kernen (links) werden gebruikt voor het verzamelen verticale en horizontale doorlatendheid monsters terwijl metalen kernen (rechts) werden gebruikt voor het verzamelen bulkdichtheid monsters.

Figuur 9. Voxel afbakening. Plastic plamuurmes werden gebruikt voor (A) isolerenvoxel grenzen voorafgaand aan (B) geochemische, dichtheid en doorlatendheid kerncollectie. Klik hier om dit bestand te downloaden.
- Verwijder de metalen kern, borstel uit overtollig materiaal van beide kanten, en de overdracht van het monster van de kern van een gelabeld BD monster zak. Weeg elk monster zak met het monster en noteer het totale gewicht.
- Verwijder de polypropyleen kernen. Bedek beide kanten met rode plastic doppen en labelen verticale polypropyleen kern als "V" en horizontale polypropyleen kern als "H" gevolgd door het monster ID.
- Verzamel de resterende materiaal uit de voxel in de GC monster zak, met achterlating van een paar centimeter van de bodem op alle vier de zijden om kruisbesmetting met de volgende voxel te voorkomen.
- Herhaal stappen 5,1-5,9 voor de rest van de voxels in een laag.
- Zodra alle voxels van de ene laag geweestvoltooid, herhaalt u de stappen 3,2-5,10 voor de volgende laag.
OPMERKING: Stap 5,1 moet worden uitgevoerd alleen voxels die zichtbaar kleurstof. Raadpleeg Figuur 10 representatief schema van een voxel benadrukken alle monsters verzameld uit elke voxel visualiseren.

Figuur 10. Vertegenwoordiger voxel. De rode stippellijn geeft kern verzameld voor microbiologie monster, de groene gestippelde lijn geeft horizontale hydraulische geleidbaarheid kern, de gele streepje lijn geeft verticale doorlatendheid kern, de paarse gestreepte geeft dichtheid kern, en de blauwe ovaal grens de resterende monster uit de voxel worden gebruikt voor geochemische analyse. klik hier om dit bestand te downloaden.
6. Sample Analysis
- Gebruik monsters verzameld voor microbiologische analyses voor moleculaire (bodem microbiële DNA-extractie) 14 en gekweekt (heterotrofe plaat tellingen) 15 analyses. Gebruik gewonnen DNA voor kwantitatieve polymerase chain reacties (qPCR) 16, en high-throughput-gen sequencing experimenten 17,18.
- Gebruik monsters verzameld voor geochemische analyses aan een veelheid van geochemische eigenschappen, waaronder pH (US EPA methode 150.2), de elektrische geleidbaarheid (EC) (US EPA methode 120.1), koolstof en stikstof-gehalte (US EPA methode 415.3, sequentiële extractie van elementen 19 te meten, en röntgendiffractie (XRD) en exafs (EXAFS) spectroscopie volgens specificaties van de Stanford Synchrotron Radiation Laboratory, minerale transformaties te onderzoeken.
- Gebruik bodemmonsters verzameld voor hydrologische analyses voor laboratorium experimenten, zoals bulkdichtheid 20en doorlatendheid 21.