Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Bioluminescentie en nabij-infrarood beeldvorming van oogzenuwontsteking en hersenontsteking in de EAE Model van Multiple Sclerose in Muizen

9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55321

⸱

1 maart 2017

 , 
1Institute of Clinical Pharmacology, University Hospital Frankfurt

In dit artikel

Samenvatting

De getoonde techniek voor in vivo bioluminescentie levende en nabije infrarood beeldvorming van optische neuritis en encefalitis bij de experimentele autoimmune encefalomyelitis (EAE) model voor multiple sclerose in SJL / J muizen.

Samenvatting

Experimentele auto-immune encefalomyelitis (EAE) in SJL / J-muizen is een model voor relapsing-remitting multiple sclerose (RRMS). Klinische EAE scores beschrijven motorische functie zijn eenvoudig uitlezen van de immuun-gemedieerde ontsteking van het ruggenmerg. Echter, scores en lichaamsgewicht niet mogelijk een in vivo bepaling van hersenontsteking en optische neuritis. Dit laatste is een vroege en frequente manifestatie bij ongeveer 2/3 van MS. Hier tonen wij werkwijzen voor bioluminescentie en nabij infrarood levende imaging beoordelen EAE opgewekt optische neuritis, hersenontsteking en bloed-hersenbarrière (BBB) verstoringen in levende muizen met een in vivo beeldvormingssysteem. Een lichtgevende substraat geactiveerd door oxidases voornamelijk toonde oogzenuwontsteking. Het signaal was specifiek en kon de visualisatie van medicatie effecten en ziekte tijdsverloop, waarbij de klinische scores parallel. Gepegyleerd fluorescente nanodeeltjes die in de vasculatur geblevene voor langere tijd werden gebruikt om de integriteit van BBB beoordelen. Nabij infrarood beeldvorming onthulde een BBB lek op het hoogtepunt van de ziekte. Het signaal was het sterkst rond de ogen. Een bijna-infrarood substraat voor matrix metalloproteïnasen werd gebruikt om EAE opgewekt inflammatie. Auto-fluorescentie bemoeid met het signaal, waarbij spectrale ontmenging voor de kwantificering. Overall, bioluminescentie een betrouwbare methode om EAE-geassocieerde optische neuritis en medicatie effecten ingeschat en was superieur aan het nabije infrarood technieken wat betreft signaal specificiteit, robuustheid, gemak van kwantificering en kosten.

Inleiding

Multiple sclerose wordt veroorzaakt door de auto-immuun-gemedieerde aanval en vernietiging van de myeline-omhulling in de hersenen en het ruggenmerg1. Met een totale incidentie van ongeveer 3,6 gevallen per 100.000 mensen per jaar bij vrouwen en ongeveer 2,0 bij mannen, is MS de op een na meest voorkomende oorzaak van neurologische handicaps bij jonge volwassenen, na traumatische verwondingen2,3. De pathologie van de ziekte wordt veroorzaakt door genetische en omgevingsfactoren4, maar is nog steeds niet volledig begrepen. Autoreactieve T-lymfocyten komen het centrale zenuwstelsel binnen en veroorzaken een inflammatoire cascade die focale infiltratie veroorzaakt in de witte stof van de hersenen, het ruggenmerg en de oogzenuw. In de meeste gevallen zijn deze infiltraties aanvankelijk omkeerbaar, maar de persistentie neemt toe met het aantal terugvallen. Er zijn een aantal knaagdiermodellen ontwikkeld om de pathologie van de ziekte te bestuderen. De terugkerende-remitterende EAE in SJL/J-muizen en de primaire-progressieve EAE in C57BL6-muizen zijn de meest populaire modellen.

De klinische EAE-scores, die de omvang van de motorische functiedeficiënten beschrijven, en het lichaamsgewicht zijn de gouden standaard om de ernst van EAE te beoordelen. Deze klinische tekenen komen overeen met de omvang van immuuncel-infiltratie en myeline-vernietiging in het ruggenmerg en voorspellen matig de effectiviteit van medicijnbehandeling bij mensen5. Deze tekens weerspiegelen echter voornamelijk de vernietiging van de ventrale vezelbanen in het ruggenmerg. Momenteel is er geen eenvoudige, niet-invasieve, betrouwbare en reproduceerbare methode om in vivo herseninfiltratie en optische neuritis in levende muizen te beoordelen.

De in vivo beeldvorming komt overeen met de 3 "R" principes van Russel en Burch (1959), die een Vervanging, Reductie en Verfijning van dierproeven6 claimen, omdat beeldvorming de resultaten van één dier op verschillende tijdstippen verhoogt en een vermindering van het totale aantal mogelijk maakt. Momenteel wordt ontsteking of myeline-status voornamelijk ex vivo beoordeeld via immunohistologie, FACS-analyse of verschillende moleculair-biologische methoden7, die allemaal geëuthaniseerde muizen vereisen op specifieke tijdstippen.

Er zijn een aantal in vivo beeldvormingssysteemsondes ontwikkeld om ontsteking in de huid, gewrichten en het vasculaire systeem te beoordelen. De technieken zijn gebaseerd op de activering van bioluminescente of nabij-infrarood fluorescente substraten door weefselperoxidasen, waaronder myeloperoxidase (MPO), matrix metalloproteïnasen (MMP's)8 en cathepsines9 of cyclooxygenase2. Deze sondes zijn voornamelijk gevalideerd in modellen van artritis of atherosclerose9,10. Een cathepsine-gevoelige sonde is ook gebruikt voor fluorescentie moleculaire tomografische beeldvorming van EAE11. MMP's, met name MMP2 en MMP9, dragen bij aan de protease-gemedieerde BBB-vernietiging in EAE en worden opgereguleerd op plaatsen van immuuncel-infiltratie12, wat suggereert dat deze sondes nuttig kunnen zijn voor EAE-beeldvorming. Hetzelfde geldt voor peroxidase- of cathepsine-gebaseerde sondes. Technisch is beeldvorming van ontsteking in de hersenen of het ruggenmerg aanzienlijk uitdagender omdat de schedel of wervelkolom bioluminescente en nabij-infrarode signalen absorberen.

Naast ontstekingsindicatoren zijn er fluorescente chemicaliën beschreven, die specifiek binden aan myeline en mogelijk een kwantificering van myelinisatie toestaan13. Een nabij-infrarode fluorescente sonde, 3,3'-diethylthiatricarbocyanine jodide (DBT), bleek specifiek te binden aan myelinevezels en werd gevalideerd als een kwantitatief hulpmiddel in muismodellen van primaire myelinisatiedefecten en in door cuprizone opgewekte demyelinisatie14. In EAE was het DBT-signaal eerder verhoogd, wat de ontsteking van de myelinevezels weerspiegelt5.

Een extra kenmerk van EAE en MS is de BBB-breuk, die resulteert in verhoogde vasculaire permeabiliteit en de extravasatie van bloedcellen, extracellulair vocht en macromoleculen in het CNS-parenchym. Dit kan leiden tot oedeem, ontsteking, oligodendrocytenschade en uiteindelijk demyelinisatie15,16. Daarom kan visualisatie van de BBB-lek met behulp van fluorescente sondes, zoals met fluorochroom gelabeld bovien serumalbumine5, die normaal gesproken zeer langzaam van bloed naar weefsel verdergaan, nuttig zijn om EAE te beoordelen.

In de huidige studie hebben we de bruikbaarheid van verschillende sondes in EAE beoordeeld en tonen we de procedure voor de meest betrouwbare en robuuste bioluminescente techniek. Bovendien bespreken we de voor- en nadelen van nabij-infrarode sondes voor MMP-activiteit en BBB-integriteit.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

1. EAE inductie in SJL / J muizen

  1. muizen
    1. Gebruik 11 weken oude vrouwelijke SJL / J-muizen en laten wennen aan de laboratoriumruimte gedurende 7 dagen. Gebruik n = 10 muizen per groep.
    2. Voor de beoordeling van de medicatie effecten, het beheer van de drug en placebo voor de controlegroep continu via het drinkwater of via voedsel pellets te beginnen 3 of 5 dagen na immunisatie (n = 10 per groep). Tijdens de piek van de ziekte, de toediening van geneesmiddelen of placebo met melk of 3% suiker water geweekte cornflakes.
  2. immunisatie materiaal
    1. Gebruik een EAE inductie kit bestaande antigeen (peptide van proteolipide-eiwit, PLP139-151, 1 mg / ml emulsie) in een emulsie met volledig Freund's adjuvans (CFA, hitte gedode Mycobacterium tuberculosis H37 Ra) en 2 flesjes (5 ug elk) gelyofiliseerd pertussis toxine (PTX).
    2. Los het PTX (2 ug / ml) in 1 x met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS, dat wil zeggen, </ Em> toe te voegen 1,5 ml PBS aan elke PTX buis, meng goed, verwijder met dezelfde pipet tip, en toe te voegen aan 1 ml PBS in een 50-mL buis); goed mengen.
  3. Immunisatie
    1. Injecteer PLP / CFA subcutaan in 2 porties, elk 100 pl, zowel aan de basis van de staart. Niet injecteren in de achterkant van de nek, omdat eventuele immuunreacties in de huid in de bovenrug of nek beeldvorming van het hoofd en ruggenmerg storen.
    2. Injecteer 100 ui PTX intraperitoneaal (ip), tweemaal per muis, de eerste 1-2 uur na immunisatie en de tweede van 24 uur.
    3. Voor de controlemuizen, injecteren CFA zonder PLP (2 porties van 100 ui) plus PTX zonder PLP.
  4. Muis hanteren na immunisatie
    1. Weeg de muizen om de andere dag tot dag 7, en weeg ze dagelijks.
      OPMERKING: Muizen verliezen ongeveer 1-2 g lichaamsgewicht tijdens EAE. De daling markeert het begin van de EAE.
    2. Beoordelen van klinische symptomen dagelijks van dag 7 accordgens de standaard scoringssystemen (dwz Score 0: geen duidelijke veranderingen in motorische functies; score 0,5: distale verlamming van de staart; score 1: volledige verlamming van de staart; score 1,5: lichte verlamming van één of beide achterpoten; score 2: ernstige parese van achterpoten; score 2.5: volledige verlamming van één achterpoot; score 3: volledige verlamming van beide achterpoten; score 3.5:. volledige verlamming van de achterpoten en parese van een voorpoot Euthanaseren muizen met een score van 3,5 of hoger voor > 12 h.
  5. EAE verloop en het tijdstip van beeldvorming
    1. Voer de eerste beeldvormende bij het begin van de ziekte bij de muizen bereikt scores> 1, die optreedt rond dag 10 - 12 na immunisatie.
    2. Voer de tweede beeldvormende bij de piek, die wordt bereikt 1 of 2 dagen na de eerste symptomen en duurt 1-3 dagen.
      OPMERKING: Vervolgens zal de muizen volledig herstellen binnen 7 tot 10 dagen. Imaging tijdens de pauzes kunnen vertonen nog steeds vasculair lekken,maar ontsteking indicatoren moeten negatief zijn.

2. Bioluminescent en nabij-infrarood beeldvorming van oogzenuwontsteking en hersenontsteking

  1. Instelling van het beeldvormingssysteem
    1. Voeren in vivo beeldvorming met alle apparatuur waarmee voor de analyse van bioluminescentie en nabij-infrarode signalen.
    2. Houd muizen onder 2-2,5% isofluraan anesthesie gedurende alle beeldvormende procedures.
    3. Plaats een of twee muizen naast elkaar in de inrichting met de middelste gasvoorziening. Plaats de bovenste rug in het midden.
    4. Gebruik twee muizen tegelijk, één per groep, voor de evaluatie van de medicatie effecten te vergelijken paren. Dit is belangrijk voor bioluminescente beeldvorming.
    5. Scherm de plaats van immunisatie met zwarte stof en nemen beeld een foto en basislijn tot de juiste positionering van de muis / muizen te beoordelen. Gebruik de B-focus met een 6,5-cm afstand tot de camera voor alle beelden.
  2. Injectie en beeldvorming van bioluminescent ontsteking sonde
    1. Gebruik de in vivo beeldvorming systeeminstellingen: Epi-BLI, Em filteren geopend, Ex filter blok, fStop 1, binning 8, richten B = 6,5 cm, ad blootstelling 120 s; neem een ​​baseline afbeelding.
    2. Injecteer 100 ul ip van de kant-en-klare chemiluminescent reagens (40 mg / ml). Meng goed voor het vullen van de spuit.
    3. Leg bioluminescentie beelden 5, 10 en 15 minuten na injectie. Het tijdsverloop van de bioluminescent piek verschilt tussen dieren.
      NB: De piek zal plaatsvinden 5 - 10 minuten na de injectie; een daling van 15 minuten geeft aan dat geen verdere beelden nodig. Gebruik de muis paren van controle en behandeling groepen om kleine vooroordelen als gevolg van verschillende verloop in de tijd te elimineren.
    4. Vul beschrijvingen om het experiment betrokken. Observeer een dialoogvenster pop-up automatisch; Het bevat informatie, zoals muizenstam, geslacht, tijdstip, tijdstip probe injectie, groepen, enz. Sla de bestanden allemaal in one folder; ze zal tijd-tags en alle beschrijvingen hebben.
  3. Injectie en beeldvorming van nabij-infrarood fluorescerende nanopartikels voor BBB integriteit
    1. Gebruik nabij-infrarood epifluorescentie beeldvorming in de B-focus (afstand: 6,5 cm). De excitatie / emissie maxima van de gepegyleerde fluorescente nanodeeltjes 675/690 nm. Leg twee beelden op verschillende golflengten, bij Ex640 / Em700 en Ex675 / Em720; gebruik maken van een 2-s belichting, binning 8 en fStop 2. Neem beeld van een baseline.
    2. Injecteer 70 pi van gepegyleerde fluorescerende infrarood nanodeeltjes iv via de staartader en stel je de muizen 3 uur en 24 uur na injectie met behulp van de bovenstaande instellingen. Meng de oplossing ruim voor het vullen van de spuit.
    3. Injecteer 0,9% natriumchloride in controlemuizen, die nodig zijn om de specificiteit van het signaal te bepalen.
  4. Injectie en beeldvorming van de nabij-infrarood fluorescente probe voor MMP-activiteit
    1. Scheren of ontharen het hoofd en Upper wervelkolom regio voorzichtig een dag voor het nemen van de basislijn. De huid mag niet worden verwond.
    2. Gebruik nabij-infrarood epifluorescentie beeldvorming in de B-focus (afstand: 6,5 cm). De excitatie / emissie maxima van de MMP activeerbare probe 680/700 nm. Leg twee beelden op verschillende golflengten, bij Ex640 / Em700 en Ex675 / Em720; gebruik maken van een 1-s belichting, binning 8 en fStop 2. Neem beeld van een baseline.
    3. Voeg 200 ul van 1 x PBS om de 1,5 ml buis van de kant-en-klare oplossing (20 nmol / 1,5 ml in 1 x PBS), zodat het voldoende 10 muizen zijn; meng goed voor het vullen van de spuit.
      LET OP: De verstrekte volume is geen rekening mee houden dat sommige volume verloren gaat tijdens het vullen van spuiten en injectie.
    4. Injecteer 150 ui van de probe iv via staartader 24 uur voor de beeldvorming. Injecteer alleen PBS bij controledieren om de specificiteit van het signaal te bepalen.
    5. Op 24 uur na injectie, neem Epi-FL beelden ten minste twee golflengten, Ex640 / Em700 en Ex 675 / EM720, met de bovenstaande instellingen (1-s belichting, scherpstelling B, binning 8 en fStop 2) toegelicht.
      Opmerking: Het gebruik van twee golflengten maakt spectrale ontmenging door het aftrekken van de niet-specifieke signaal.

3. Afbeelding Analyses

  1. Bioluminescentie analyse (BLI)
    1. Dubbelklik op de software om deze te openen.
    2. In de bovenste menubalk, klik op het icoon file browser, ga naar de directory van de map van het experiment, en selecteer deze; dit zal alle bestanden in de map in een tabel.
    3. Configureer de kolommen met de beschrijving om het experiment betrokken.
    4. Voor kwaliteitscontrole, dubbelklikt u op een bestand van een niet-responder muis zonder symptomen van EAE en / of een naïeve muis om de specificiteit van de EAE signalen te controleren.
      NB: Er mag geen signaal in naïeve muizen en minimale signaal in non-responder muizen.
      1. Controleer het basislijn voor de injectie van de provoor elke muis als verdere controle van de specificiteit van het signaal; het zou negatief zijn.
    5. Om een ​​beeld te selecteren, dubbelklikt u op het eerste bestand van de eerste EAE muis en controleer de lichtgevende intensiteit (LUT bar bereik) en lokalisatie. Bekijk alle foto's één voor één. Sluit het bestand met de laagste intensiteit voor elke muis (dat wil zeggen, houd 2 van 3 beelden per muis).
    6. Beeldaanpassing en uitvoer
      1. Dubbelklik op het eerste bestand te kwantificeren. Observeer een nieuw venster pop-up. Onder "options" (bovenste menu), pas de labels weer te geven in elk beeld.
      2. In het juiste gereedschap palet, ga naar "image aanpassing." Standaard worden de minimum en maximum intensiteiten ingesteld op "auto" en weergegeven in regenboogkleuren pseudocolor. Selecteer "manual" om de instellingen indien nodig te wijzigen.
        OPMERKING: Bijvoorbeeld kunnen alle uitgevoerde beelden identiek LUT bars (identiek minima en maxima) moeten goed vergelijkbaar zijn.De aanpassing van de minima en maxima heeft geen invloed op de kwantitatieve resultaten.
      3. Klik op de afbeelding export, selecteert png, de directory, en de naam van een afbeelding
    7. Kwantificering van de Regio's of Interest (ROI)
      1. Ga naar de "ROI" tool in het palet tool. Selecteer de ROI-methode (cirkel, auto rechthoekig, of de vrije hand) en het aantal van de ROI. Houd u aan de ROI pop-up venster in het venster afbeelding.
      2. Met behulp van de muis, passen de grootte en positie. Gebruik identieke ROI drempels voor alle beelden als de auto-ROI-tool wordt gebruikt. Gebruik identieke gebieden voor alle afbeeldingen als ROI maten en posities handmatig (bijv ronde ROI) worden gedefinieerd.
      3. Klik op "meten RO.I. Neem een nieuw venster pop-up. Pas de kolommen (bijvoorbeeld bestandsnaam, dier nummer, groep, experiment, gebied, totaal telt, gemiddeld telt, SD telt, min en max telt, ruimte, tijd , tijdstip van sonde injectie, etc.). Sla de aangepaste instellingen. Wanneer ready, alles selecteren (Ctrl + A) en kopieer en plak de tabel in een spreadsheet.
      4. Exporteer het beeld als png de ROI op zijn plaats. Opslaan en sluiten van het beeldbestand.
    8. Herhaal de procedure (stappen 3.1.6 - 3.1.7) voor alle beeldbestanden die moeten worden gekwantificeerd. Kopieer alle ROI kwantificering in de spreadsheet.
      LET OP: Hier kunnen de resultaten worden gesorteerd per groep, tijdstip, enz. En statistisch geanalyseerd. Gebruik de totale tellingen van bioluminescentie signalen in de ROI voor statistische analyses.
  2. (NIR) analyse van fluorescerende nanodeeltjes-Infrared in de buurt
    1. Met behulp van de controles in de software aan te passen aan de drempel van het beeld.
      Let op: Dit heeft geen invloed op de kwantitatieve resultaat.
    2. Visueel vergelijken de opnamen bij Ex / Em 675/720 en Ex / Em 640/700 om de specificiteit van het signaal te beoordelen.
    3. Gebruik de opnamen bij Ex / Em 675/720 voor de kwantitatieve analyse (maximaal excitatie: 680 nm). Definieer ROI, waarbij de auto-ROI gereedschap kan worden gebruikt. Stel de auto-ROI drempel en gebruiken voor alle afbeeldingen. Kwantificeren van de totale stralende efficiëntie in ROI (zie stap 3.1).
  3. (NIR) analyse van protease-gevoelige probe-infrarood buurt
    1. Met behulp van software, moet u het drempel van het beeld.
      Let op: Dit heeft geen invloed op de kwantitatieve resultaat. Voer spectrale ontmenging van de auto-fluorescentie. De unmixing tool is geïmplementeerd in Living Image. De auto-unmixing maakt gebruik van de Ex / Em 640/700 als de specifieke en 675/720 als de auto-tl-imago.
    2. Selecteer de ongemengde beeld en bepalen de ROI, zoals hierboven beschreven. Gebruik de totale stralende efficiëntie in ROI voor kwantitatieve en statistische analyses.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Tijdsverloop van bioluminescentie van oogzenuwontsteking

De bioluminescentie signaal van de probe ontsteking was de sterkste rond de ogen en traden uitsluitend EAE muizen met neuritis optica. Een signaal deed zich noch in de niet-EAE muizen of muizen niet geïnjecteerd met ontsteking probe. Het signaal verdween toen de muizen hersteld. Dus het signaal specifiek voor optische neuritis, en de piek van het signaal...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De huidige video toont technieken voor bioluminescentie en nabij-infrarood fluorescentie in vivo beeldvorming van EAE in SJL / J muizen. We tonen aan dat bioluminescentie met gebruikmaking van een ontsteking-gevoelige probe toont voornamelijk optische neuritis en kwantificering eens met de klinische evaluatie van EAE ernst en de werking van medicijnen. De bioluminescentie methode niet kon ontsteking van het lumbale ruggenmerg, die een primaire plaats van EAE manifestatie 17 detecteren, w...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende financiële belangen.

Dankbetuigingen

Dit onderzoek werd ondersteund door de Deutsche Forschungsgemeinschaft (CRC1039 A3) en de financiering van onderzoek programma "Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz" (LOEWE) van de staat van Hessen, Research Center for Translational Medicine en Farmacologie TMP en de Else Kröner-Fresenius Foundation (EKFS), Research Training Group Translationeel Onderzoek Innovatie - Pharma (TRIP).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
AngioSpark-680Perkin Elmer, Inc., Waltham, USANEV10149Beeldvormingssonde, pegylerde nanodeeltjes, nuttig voor beeldvorming van de integriteit van de bloed-hersenbarrière
MMP-sense 680Perkin Elmer, Inc., Waltham, USANEV10126Beeldvormingssonde, activeerbaar door matrix metalloproteïnasen, nuttig voor beeldvorming van ontsteking
XenoLight RediJect Inflammation ProbePerkin Elmer, Inc., Waltham, USA760535Beeldvormingssonde, activeerbaar door oxidasen, nuttig voor beeldvorming van ontsteking
PLP139-151/CFA emulsie Hooke Labs, St Lawrence, MAEK-0123EAE-inductiekit
Pertussis ToxinHooke Labs, St Lawrence, MAEK-0123EAE-inductiekit
IVIS Lumina SpectrumPerkin Elmer, Inc., Waltham, USABioluminescentie- en infraroodbeeldvormingssysteem
LivingImage 4.5 software Perkin Elmer, Inc., Waltham, USACLS136334IVIS-analysesoftware
IsofluraneAbbott Labs, Illinois, USA26675-46-7Anestheticum

Referenties

  1. Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet. 372 (9648), 1502-1517 (2008).
  2. Dunn, J. Impact of mobility impairment on the burden of caregiving in individuals with multiple sclerosis. Expert Rev Pharmacoecon Outcomes Res. 10 (4), 433-440 (2010).
  3. Dutta, R., Trapp, B. D. Mechanisms of neuronal dysfunction and degeneration in multiple sclerosis. Prog Neurobiol. 93 (1), 1-12 (2011).
  4. Sawcer, S., et al. Genetic risk and a primary role for cell-mediated immune mechanisms in multiple sclerosis. Nature. 476 (7359), 214-219 (2011).
  5. Schmitz, K., et al. R-flurbiprofen attenuates experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. EMBO Mol Med. 6 (11), 1398-1422 (2014).
  6. Balls, M. The origins and early days of the Three Rs concept. Altern Lab Anim. 37 (3), 255-265 (2009).
  7. Barthelmes, J., et al. Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues. J Vis Exp. (111), (2016).
  8. Leahy, A. A., et al. Analysis of the trajectory of osteoarthritis development in a mouse model by serial near-infrared fluorescence imaging of matrix metalloproteinase activities. Arthritis Rheumatol. 67 (2), 442-453 (2015).
  9. Scales, H. E., et al. Assessment of murine collagen-induced arthritis by longitudinal non-invasive duplexed molecular optical imaging. Rheumatology (Oxford). 55 (3), 564-572 (2016).
  10. Nahrendorf, M., et al. Dual channel optical tomographic imaging of leukocyte recruitment and protease activity in the healing myocardial infarct. Circ Res. 100 (8), 1218-1225 (2007).
  11. Eaton, V. L., et al. Optical tomographic imaging of near infrared imaging agents quantifies disease severity and immunomodulation of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. J Neuroinflammation. 10, (2013).
  12. Kandagaddala, L. D., Kang, M. J., Chung, B. C., Patterson, T. A., Kwon, O. S. Expression and activation of matrix metalloproteinase-9 and NADPH oxidase in tissues and plasma of experimental autoimmune encephalomyelitis in mice. Exp Toxicol Pathol. 64 (1-2), 109-114 (2012).
  13. Wang, C., et al. In situ fluorescence imaging of myelination. J Histochem Cytochem. 58 (7), 611-621 (2010).
  14. Wang, C., et al. Longitudinal near-infrared imaging of myelination. J Neurosci. 31 (7), 2382-2390 (2011).
  15. Engelhardt, B. Molecular mechanisms involved in T cell migration across the blood-brain barrier. J Neural Transm. 113 (4), 477-485 (2006).
  16. Badawi, A. H., et al. Suppression of EAE and prevention of blood-brain barrier breakdown after vaccination with novel bifunctional peptide inhibitor. Neuropharmacology. 62 (4), 1874-1881 (2012).
  17. Simmons, S. B., Pierson, E. R., Lee, S. Y., Goverman, J. M. Modeling the heterogeneity of multiple sclerosis in animals. Trends in immunology. 34 (8), 410-422 (2013).
  18. Lin, T. H., et al. Diffusion fMRI detects white-matter dysfunction in mice with acute optic neuritis. Neurobiol Dis. 67, 1-8 (2014).
  19. Knier, B., et al. Neutralizing IL-17 protects the optic nerve from autoimmune pathology and prevents retinal nerve fiber layer atrophy during experimental autoimmune encephalomyelitis. J Autoimmun. 56, 34-44 (2015).
  20. Schellenberg, A. E., Buist, R., Yong, V. W., Del Bigio, M. R., Peeling, J. Magnetic resonance imaging of blood-spinal cord barrier disruption in mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Magn Reson Med. 58 (2), 298-305 (2007).
  21. Mori, Y., et al. Early pathological alterations of lower lumbar cords detected by ultrahigh-field MRI in a mouse multiple sclerosis model. Int Immunol. 26 (2), 93-101 (2014).
  22. Bittner, S., et al. Endothelial TWIK-related potassium channel-1 (TREK1) regulates immune-cell trafficking into the CNS. Nat Med. 19 (9), 1161-1165 (2013).
  23. Theien, B. E., et al. Differential effects of treatment with a small-molecule VLA-4 antagonist before and after onset of relapsing EAE. Blood. 102 (13), 4464-4471 (2003).
  24. Hawkins, B. T., Davis, T. P. The blood-brain barrier/neurovascular unit in health and disease. Pharmacol Rev. 57 (2), 173-185 (2005).
  25. Coisne, C., Mao, W., Engelhardt, B. Cutting edge: Natalizumab blocks adhesion but not initial contact of human T cells to the blood-brain barrier in vivo in an animal model of multiple sclerosis. J Immunol. 182 (10), 5909-5913 (2009).
  26. Andresen, V., et al. High-resolution intravital microscopy. PLoS One. 7 (12), e50915(2012).
  27. Bukilica, M., et al. Stress-induced suppression of experimental allergic encephalomyelitis in the rat. Int J Neurosci. 59 (1-3), 167-175 (1991).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Bioluminescentie imagingmuizen met multiple sclerosebloed hersenbarri rein vivo imagingklinische EAE scoresinfiltratie van immuuncellen
Bioluminescentie en nabij-infrarood beeldvorming van oogzenuwontsteking en hersenontsteking in de EAE Model van Multiple Sclerose in Muizen
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.