Een gehele-mount immunohistochemische aanpak, om de neurofilament eiwit expressie in het extrahepatische galweg in Suncus murinus te visualiseren. Wordt hier gepresenteerd. Dit protocol kan gebruikt worden om de innervering van alle viscerale organen in S. murinus of andere soorten te analyseren.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Met behulp van een volledige immunohistochemische methode om de innervatie van de galwegen in te studeren
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Dit werk beschrijft de gehele berg immunohistochemie kleuring methode in detail, met behulp van neurofilament eiwit antilichaam voor het labelen van de innervatie van het galweg in Suncus murinus ( S. murinus ). Ten eerste werd het monster van S. murinus gescheiden en in 4% paraformaldehyde (PFA) gefixeerd. Ten tweede werd een enzymatische behandeling en potentiële endogene peroxidase-inactivering uitgevoerd. Het monster werd vervolgens blootgesteld aan het primaire antilichaam, anti-neurofilament eiwit antilichaam, gedurende 3-6 dagen. Het werd vervolgens geïncubeerd met het secundaire antilichaam dat is geconjugeerd met mierikswortelperoxidase. De kleurreactie werd geopenbaard door het monster te laten reageren met een 3,3'-diaminobenzidine (DAB) substraat. Deze methode kan worden toegepast om de innervering van alle viscerale organen te analyseren. Bovendien kan dit protocol ook worden aangepast om andere neuronale antilichamen te testen, maar optimalisatie van de antibodiesHet moet eerst gedaan worden. Deze methode werd oorspronkelijk geïntroduceerd door Kuratani en Tanaka 1 , 2 , 3 .
Inleiding
De huismussklok , Suncus murinus , behoort tot de orde Insectivora en de familie Soricidae. Dit kleine zoogdier is verspreid over heel Zuidoost-Azië en woont in huizen en grasgebieden die zich bevinden in de buurt van menselijke woningen of veestokken 4 . Deze soort vertoont algemene morfologische kenmerken die vergelijkbaar zijn met mensen dan andere laboratoriumdieren, zoals de muis, de rat en het konijn 5 . Vroeger werd immunostaining met een perifere neuronmarkering voor S. murinus neurofilament eiwit (NFP) gebruikt om perifere zenuwen in de alvleesklier 6 , hoofddu....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle experimentele procedures werden goedgekeurd door de Institusionele Diervoeder- en Gebruikskomitee van Tokyo (IACUC). De dieren werden gehuisvest en behandeld in overeenstemming met de Gids voor de zorg en het gebruik van laboratoriumdieren en de gids voor de verzorging en het gebruik van experimentele dieren van de Canadese Raad voor Dierenverzorging . We gebruikten dieren die gefokt en gehandhaafd zijn in het Functional Morphology Laboratory, Departement van Grenzen Gezondheidswetenschappen, Tokyo Metropolitan University, Japan.
1. Dierenzorg en huisvesting
- Verkrijg 7 S. murinus (3 vrou....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuren 1 - 4 tonen typische resultaten voor NFP-positieve zenuwvezels in het extrahepatische galweg in S. murinus . Het antilichaam tegen NFP genereerbaar de innervation in het gehele beeld van het extrahepatische galwegen ( Figuur 1 ), galblaas ( Figuur 2 ), bovenste galweg ( Figuur 3 ) en duodenale papilla gebied ( Figuur 4 .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit werk beschrijft de experimentele procedure voor het visualiseren van de innervatie van het extrahepatische galwegstelsel met behulp van een antilichaam tegen neurofilament eiwit. Dit protocol werd aangepast uit het protocol beschreven door Kuratani en Tanaka 1 , 2 , 3 .
Bepaal voor dit experiment de tijdlijn voor elk van de experimenten, aangezien de full-mount staining-aanpak 2-3 weken blijft. .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs verklaren geen belangenconflicten.
Dankbetuigingen
De auteurs hebben geen erkenningen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| orthoperiodezuur | Wako | 162-00732 | |
| papaïne | Wako | 164-00172 | |
| bovijn serumalbumine (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| natriumazid | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament-eiwit (NFP)-antilichaam | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-geconjugeerd affiniteit-gezuiverd schapen anti-muis IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazool | Sigma | I-0125 |
Referenties
- Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method. Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).
- Kuratani, S., Tanaka, S.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
