Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Voorbereiding en karakterisering van nieuwe HDL-nabootsende nanodeeltjes voor ingewikkelde zenuwgroei Factor

7.9K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55584

⸱

22 mei 2017

 , 
1Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of North Texas Health Science Center

In dit artikel

Samenvatting

Eenvoudige homogenisatie werd gebruikt om nieuwe, hoge dichtheid, lipoproteïne-nabootsende nanodeeltjes te bereiden om de zenuwgroeifactor te inkapselen. Uitdagingen, gedetailleerde protocollen voor nanodeeltjespreparatie, in vitro karakterisering en in vivo studies worden beschreven in dit artikel.

Samenvatting

Het doel van dit artikel is de voorbereiding en karakterisering van nervegroeifactoren (NGF) geladen, hoge dichtheid, lipoproteïne (HDL) -mimicerende nanodeeltjes (NP's) te introduceren. HDL's zijn endogene NP's en zijn onderzocht als voertuigen voor de levering van therapeutische middelen. Verschillende methoden zijn ontwikkeld om HDL-nabootsende NP's te bereiden. Ze zijn echter over het algemeen gecompliceerd, tijdrovend en moeilijk voor industriële opschaling. In deze studie werd één stap homogenisatie gebruikt om de hulpstoffen te mengen en de prototype NP's te vormen. NGF is een in water oplosbaar eiwit van 26 kDa. Om de inkapseling van NGF in de lipidomgeving van HDL-nabootsende NP's te vergemakkelijken, werd protamine USP gebruikt om een ​​ionpaarcomplex te vormen met NGF om de ladingen op het NGF-oppervlak te neutraliseren. Het NGF / protamine complex werd vervolgens ingevoerd in het prototype NPs. Apolipoproteïne Al werd uiteindelijk op het oppervlak van de NP's gecoat. NGF HDL-nabootsende NP's vertoonden de voorkeurse eigenschappen in termenS met deeltjesgrootte, grootteverdeling, entrapmentefficiëntie, in vitro release, bioactiviteit en biodistributie. Met het zorgvuldige ontwerp en verkenning van homogenisatie in HDL-nabootsende NP's, werd de procedure sterk vereenvoudigd en werden de NP's schaalbaar gemaakt. Bovendien werden verschillende uitdagingen, zoals het scheiden van gelost NGF uit de NP's, het uitvoeren van betrouwbare in vitro vrijlatingstudies en het meten van de bioactiviteit van de NP's overwonnen.

Inleiding

Macromoleculen, zoals eiwitten, peptiden en nucleïnezuren, zijn ontstaan ​​als veelbelovende medicijnen en hebben in de afgelopen decennia 1 , 2 veel aandacht gekregen . Door hun hoge werkzaamheids- en specifieke actiemodi hebben ze een groot therapeutisch potentieel voor de behandelingen van kanker, immuunziekte, HIV en aanverwante aandoeningen 3 , 4 . Echter, fysiochemische eigenschappen, zoals hun grote moleculaire grootte, driedimensionale structuur, oppervlakkosten en hydrofiele natuur maken de in vivo afgifte van deze macromoleculen zeer uitdagend. Dit belemmert hun klinische gebruik 4 aanzienlijk. Recente ontwikkelingen in drug delivery systemen, zoals microdeeltjes, polymeer nanodeeltjes (NP's), liposomen en lipide NP's, overwinnen deze uitdagingen en verbeterde de in vivo levering van macromoleculen aanzienlijk. HoWever, sommige nadeel ten aanzien van deze leveringslading is aangetoond, met inbegrip van lage laadcapaciteit, lage opname efficiëntie, korte halveringstijd, verlies van bioactiviteit en ongewenste bijwerkingen 5 , 6 , 7 , 8 . Effectieve draagstersystemen blijven een gebied van onderzoeksbelang. Bovendien is de ontwikkeling van analytische methoden om medicijnbelaste NP's te karakteriseren, meer uitdagend voor macromoleculen dan voor kleine moleculen.

High-density lipoprotein (HDL) is een natuurlijke NP samengesteld uit een lipidekern die wordt bekleed door apolipoproteïnen en een fosfolipide monolaag. Endogene HDL speelt een kritische rol in het transport van lipiden, eiwitten en nucleïnezuren door de interactie met doelreceptoren, zoals SR-BI, ABCAI en ABCG1. Het is onderzocht als een middel voor de levering van verschillende therapeutische middelen 9, 10 , 11 , 12 . Verschillende methoden zijn ontwikkeld om HDL-nabootsende NP's te bereiden. Dialyse is een populaire aanpak. Bij deze werkwijze worden NP's gevormd door hydrateren van een lipidfilm onder toepassing van natriumcholaatoplossing. Het zout wordt vervolgens verwijderd door middel van een tweedaagse dialyse met drie buffers 13 . Sonicatiemethoden vervaardigen NP's door een lipidmengsel gedurende 60 minuten te soniciseren onder een verwarmingsconditie; De NP's worden verder gezuiverd door gelchromatografie 14 . Microfluidica genereert NP's via een microfluïdisch apparaat, dat fosfolipiden en apolipoproteïne AI (Apo AI) oplossingen mengt door microvortices in een focuspatroon 15 te maken . Het is duidelijk dat deze methoden tijdrovend, hard en moeilijk zijn voor industriële opschaling.

In dit artikel introduceren we de voorbereiding en karakterisering van nieuwe HDL-nabootsende NP's voor zenuwenGroei factor (NGF) inkapseling. NGF is een disulfide-gekoppelde polypeptide homodimeer die twee 13,6-kDa polypeptide monomeren bevat. Een nieuwe procedure voor het bereiden van de NP's door homogenisatie, gevolgd door de inkapseling van NGF in de NP's, werd ontwikkeld. De NGF HDL-nabootsende NP's werden gekenmerkt voor deeltjesgrootte, grootteverdeling, zeta-potentieel en in vitro vrijlating. Hun bioactiviteit werd geëvalueerd voor neurietgroei in PC12-cellen. De biodistributie van NGF HDL-nabootsende NP's werd vergeleken met die van vrij NGF na intraveneuze injectie in muizen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

OPMERKING: De dierstudies die bij alle procedures zijn opgenomen, zijn goedgekeurd door het Institusioneel Diervoeder- en Gebruikskomitee aan de Universiteit van Noord-Texas Health Science Center.

1. Bereiding van NGF HDL-nabootsende nanodeeltjes

  1. Los de hulpstoffen, fosfatidylcholine (PC), sfingomyelin (SM), fosfatidylserine (PS), cholesteryloleaat (CO) en D-a-tocopherylpolyethyleenglycolsuccinaat (TPGS) op in ethanol om voorraadoplossingen op 1 mg / ml te bereiden.
    OPMERKING: De voorraadoplossingen werden geproduceerd en opgeslagen bij -20 ° C. Het cholesteryloleaat werd opgeslagen in donkere flessen. De PC-, SM-, PS- en CO-voorraadoplossingen waren stabiel gedurende respectievelijk 6, 3, 12 en 12 maanden bij -20 ° C. De TPGS-oplossing was gedurende ten minste 12 maanden stabiel bij -20 ° C.
  2. Meng 10 μL NGF (1 mg / ml in water) met 10 μl protamine USP (1 mg / ml in water) in een 1,5 ml microcentrifugebuis en laat het gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur staan ​​totVorm het complex.
    OPMERKING: De NGF- en protamine-voorraadoplossingen werden gesalicoteerd en opgeslagen bij -20 ° C. Herhaalde bevriezing en ontdooien wordt niet aanbevolen voor de NGF-voorraad.
  3. Voeg 59 μl PC, 11 μL SM, 4 μL PS, 15 μL CO en 45 μl TPGS toe aan een glazen flesje. Meng en verdamp de ethanol gedurende ongeveer 5 minuten onder een zachte stikstofstroom; Alle hulpstoffen dienen een vette dunne film aan de onderkant van de glazen flesje te vormen.
  4. Voeg 1 ml ultraperfect (type 1) water toe aan de flesje en homogeniseer gedurende 5 minuten bij 9.500 rpm (8.600 xg) bij kamertemperatuur om de prototype NP's te vormen.
  5. Voeg het in stap 1.2 bereide complex toe aan prototype NP's en incubeer gedurende 30 minuten bij 37 ° C onder roeren door gebruik te maken van een kleine roerbalk in de glazen flesje.
    1. Koel de NP's door nog een 30 minuten bij kamertemperatuur te roeren. Vervolgens voegt u 106 μl Apo AI (1,49 mg / ml) toe en roer bij kamertemperatuur 's nachts om de laatste te vormenNGF HDL-nabootsende NP's.

2. Karakterisering van NGF HDL-nabootsende nanodeeltjes

  1. Meet de deeltjesgrootte en zeta-potentieel met behulp van een deeltjesanalysator (zie de materiaaltabel) volgens de instructies van de fabrikant.
  2. Gebruik een crosslinked agarosegelfiltreringskromatografiekolom om de geloste NGF van de NGF HDL-nabootsende NP's te scheiden en de entrapmentefficiëntie van de NGF te bepalen.
    1. Voor de kolombereiding, overdragen 15 ml Sepharose 4B-CL suspensie naar een beker van 50 ml. Roer de kraalvering met een glazen staaf en giet wat in een kolom (30 cm lengte × 1 cm diameter, met een glazen frituur onderaan). Tik voorzichtig op de kolom om bellen te ontdoen. Laat het oplosmiddel leeglopen en de kralen om een ​​paar minuten te vestigen.
    2. Ga door met de resterende ophanging. Spoel de binnenmuur van de kolom om de kralen schoon te maken. Dreineer het oplosmiddel tot het oplosmiddelniveau een beetje a isBove de top van de stationaire fase. Was de kolom met 20 ml 1x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS, die 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 8 mM Na2 HPO4 en 2 mM KH2P04) bevatte
    3. Om de fracties met gelost NGF te bepalen, bel 200 μL NGF-oplossing (10 μg / ml) op de gelfiltreringskolom (25 cm lengte x 1 cm diameter) en eluteer met 1x PBS.
    4. Verzamel totaal 12 fracties (1 ml per fractie) en meet de concentratie van NGF in elke fractie met een Sandwich ELISA kit voor NGF.
    5. Ontdek NGF uit fracties 6 tot 10 onder gebruikmaking van de Sandwich ELISA kit. Verkrijg een chromatogram van gelost NGF op de kolom. Was de kolom met 20 ml PBS.
    6. Om de fracties die NGF HDL-nabootsende NP's bevatten te bepalen, laden 200 μL van de NP's op de kolom en elueren met 1x PBS. Verzamel in totaal 12 fracties (1 ml voor elke fractie) en meet de intensiteit van deeltjes in elke fractie uZing de deeltjesgrootte analysator. Ontdek de NGF NP's uit fracties 2 tot 4.
      OPMERKING: De intensiteit is een parameter gemeten door de deeltjesanalysator, die vertelt hoeveel nanodeeltjes in de testoplossing kunnen bestaan. Hoe meer NP's in oplossing bestaan, hoe hoger de intensiteit is. Met deze aanpak kunnen we bevestigen dat de kolom NGF NP's kan scheiden van gelost NGF.
    7. Om de entrapment efficiëntie van NGF te meten, laad 200 μL NGF HDL-nabootsende NP's op de kolom en eluteer met 1x PBS. Verzamel in totaal 12 fracties (1 ml per fractie).
    8. Meet de geloste NGF-concentratie uit fracties 6 tot 10 met behulp van de Sandwich ELISA-kit.
    9. Voeg de NGF-hoeveelheden toe die gemeten zijn van fracties 6 tot 10 samen als de geloste NGF en bereken de entrapmentefficiëntie van NGF met behulp van de volgende vergelijking.
      % EE = (1 - gelost NGF / totaal NGF toegevoegd in NP) x 100% Equation (1)

3. In vitro vrijgave van NGF HDL-imiteren nanodeeltjes

  1. Bestudeer vrij NGF (10 μg / ml in water; n = 4) en NGF HDL-nabootsende NP's (10 μg / mL; n = 4).
  2. Pre-treat 8 dialysebuizen (molecuulgewicht cutoff: 300 kDa) door de instructies van de fabrikant te volgen.
  3. Bereid 5% boviene serumalbumine (BSA) in PBS als het afgiftemedium. Voeg 30 ml afgiftemedium toe aan een 50 ml centrifugebuis en verwarm het tot 37 ° C in een shaker met een snelheid van 135 rpm. Plaats nog eens 50 ml vrijgegeven medium in de shaker voor vervanging.
  4. Voeg 400 μl vrijgegeven medium in de dialysebuis toe en voeg 200 μL van het geteste monster snel toe om voldoende volume voor dialyse te maken.
  5. Sluit de buis en zet de dialysebuis snel in het vrijgegeven medium (de centrifugebuis). Zet 100 μL van het vrijgegeven medium snel uit de buitendialysebuis als het monster voor de tijd 0. Zet het monster onmiddellijk in -20 ° C voor latere analyse. Voeg 100 μL verse reLease medium in de centrifugebuis om het ingetrokken monster te vervangen. Start de timer.
  6. Bij 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48 en 72 uur trekken 100 μL van het afgiftemedium terug en vervangen met 100 μl vers medium. Zet de ingetrokken monsters onmiddellijk in -20 ° C voor latere analyse.
  7. Verwijder na 72 uur alle monsters van -20 ° C en ontdooi ze bij kamertemperatuur. Meet de NGF concentraties van de afgifte monsters met behulp van de Sandwich ELISA kit.

4. Bioactiviteit van NGF HDL-nabootsende nanodeeltjes (Neurite Outgrowth Study)

  1. Cultuur PC12-cellen in RPMI-1640 medium aangevuld met 10% warmte-geïnactiveerd paarden serum, 5% foetaal runder serum, 100 ug / ml streptomycine en 100 eenheden / ml penicilline. Bewaar de cellen in een bevochtigde incubator bij 37 ° C en met 5% CO2.
  2. Wanneer de cellen ~ 70-80% confluentie bereiken, verwijder het kweekmedium en was de cellen met 1x PBS (ongeveer 2 ml per 10 cm 2 cultuuroppervlak). Verwijder de wasoplossing. Trypsineer de cellen door 0,25% trypsine-EDTA-oplossing (0,25% trypsine en 1 mM EDTA, 0,5 ml per 10 cm2 kweekoppervlak) toe te voegen aan de kolf en incuberen bij 37 ° C totdat de meeste cellen losgemaakt zijn.
  3. Voeg twee volumes cultuurmedium toe en draai gedurende 5 minuten op 180 xg. Verwijder de supernatant en resuspendeer de celpellet in 5 ml kweekmedium. Filter de cellen door een 22 G, ½ inch naald om celclusters te breken.
  4. Verdeel de cellen in een verhouding van 1: 3 in een nieuwe celkweekfles. Na het incuberen gedurende de nacht, verwijder niet-aangesloten PC12-cellen. Laat de bijgevoegde cellen toe om te blijven groeien.
  5. Herhaal deze procedure voor 3 passages om de subcultuur van PC12 te selecteren die een sterke hechtingseigenschap heeft. Pre-coat een 6-putje plaat met 800 μL / putje van ratstaart collageen type I (100 μg / ml).
  6. Trypsineer de geselecteerde PC12-cellen zoals beschreven in stap 4.2 en filter ze door een22 G, ½ inch naald om de celclusters te breken. Tel de cellen met een hemocytometer. Zaad de cellen 's nachts bij een dichtheid van 10.000 cellen / putje in de voorbedekte 6-putjesplaat in stap 4.5 om de cellen aan de plaat te bevestigen.
  7. Verdun vrij NGF (10 μg / ml) en NGF HDL-nabootsende NP's (10 μg / ml) met het kweekmedium (beschreven in stap 4.1) om 0,5, 1, 5, 10, 50 en 100 ng / ml concentraties te bereiden. Verwijder 2 ml medium uit elke put en vervang met 2 ml van de verdunde vrije NGF of NGF HDL-nabootsende NP's. Cultuur voor 4 dagen.
  8. Op dag 4, verander het medium naar vers medium (beschreven in stap 4.1) die de bijbehorende behandeling bevat en de behandeling gedurende nog eens 3 dagen doorgaan.
  9. Op dag 7 visualiseert u de cellen met een omgekeerde lichtmicroscoop en beeld elke bron op willekeurige plekken onder 10X vergroting.

5. Biodistribusie van NGF HDL-nabootsende nanodeeltjes

  1. Gebruik volwassen BALB / c-muizen (mannetje, 25-30 g) tot tIs de weefselverdeling van NGF NP's. Deel de muizen willekeurig in drie groepen van 3 muizen per groep. Gebruik een kegelvormige plastic behuizing ( bijv. Decapicon) om een ​​muis vast te houden en de staart met ethanol te wrijven om de vasodilatie en de zichtbaarheid van de ader te bevorderen.
  2. Injecteer 100 μl van zoutoplossing, vrije NGF of NGF HDL-nabootsende NP's aan elke groep muizen (3 groepen) via de staartvenen bij een dosis van 40 μg / kg NGF. Gebruik een 30½ G-naald die aan een 1 ml spuit is bevestigd.
  3. Na 30 minuten na de injectie verdoving de muizen met 3% inhalatie van isofluraan (in zuurstof bij een stromingssnelheid van 2 L / min). Voer een staart- en teenknijp om de diepte van de verdoving vast te stellen. Bloed verzamelen door middel van cardiale punctie.
    1. Onttrek ongeveer 1 ml bloed uit het hart. Euthanize elke muis door cervicale dislocatie.
  4. Plaats de muiskarkas in dorsale recumbency. Open de buik met chirurgische scharen en verplaats vet en darmGebruik maken van een katoenen zwabber om de lever, milt en nier bloot te stellen. Oog deze weefsels op en spoel ze in 1x PBS om het bloed schoon te maken.
  5. Centrifugeer de bloedmonsters onmiddellijk bij 3,400 xg en 4 ° C gedurende 5 minuten om het plasma te verkrijgen. Bewaar het plasma en weefsels bij -80 ° C tot de analyses.
  6. Om de weefselmonsters te analyseren, verplaats de monsters van -80 ° C tot 4 ° C en schud 100 mg weefselmonster in een 10x volume extractiebuffer (0,05 M natriumacetaat, 1,0 M natriumchloride, 1% Triton X-100, 1% BSA, 0,2 mM fenylmethaansulfonylfluoride en 0,2 mM benzethoniumchloride). Homogeniseren bij 10.000 rpm en 4 ° C gedurende 5 minuten.
  7. Offer twee onbehandelde muizen om leeg plasma en weefsels te verzamelen, zoals beschreven in stappen 5.3 en 5.4. Bereid NGF standaardoplossingen aan met blanco plasma of blanco weefselhomogenaten.
  8. Bepaal de concentraties van NGF in de plasma- en weefselhomogenaten met behulp van de Sandwich ELISA-kit, zoals hierboven beschreven.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De techniekschema van HDL-nabootsende, a-tocoferol gecoate NGF NP's bereid door een ionpaarstrategie is getoond in Figuur 1 . Om de oppervlakte-ladingen van NGF te neutraliseren werd protamine USP gebruikt als een ionpaarmiddel om een ​​complex te vormen met NGF. Om de bioactiviteit te beschermen werden prototype HDL-nabootsende NP's ontworpen, eerst met behulp van homogenisatie; Dan werd het NGF / protamine complex ingekapseld in de prototype NP's. Homogenis...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In deze studie tonen we een eenvoudige methode om HDL-nabootsende NP's voor NGF-inkapseling te bereiden. Verschillende NP leveringssystemen zijn onderzocht om eiwitten te leveren. Momenteel betrekken veel NP-preparaten dialyse, oplosmiddelafbreking en filmhydratatie. Deze processen zijn over het algemeen gecompliceerd en uitdagend bij opschalen. Tijdens deze NP-ontwikkeling werd vastgesteld dat de lipiden sterke hechting hadden aan de glazen wand van de houder, wat leidde tot de moeilijkheden bij het hydrateren van ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door NIH R03 NS087322-01 naar Dong, X.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Recombinant Human Beta-NGFCreative BiomartNGF-05H
L-α-Phosphatidylcholine (PC)Avanti131601P95%, Egg, Chicken
Sphingomyeline (SM)Avanti860062PBrain, Porcine
Fosfatidylserine (PS)Avanti840032PBrain, Porcine
Cholesteryl oleate (CO)SigmaC9253
D-α-Tocoferyl polyethyleenglycolsuccinaat (TPGS)BASF9002-96-4Vitamin E Polyethyleen Glycol Succinaat
ProtaminesulfaatSigmaP3369voldoet aan USP-testspecificaties
Apolipoproteïne A1, Menselijke plasmaAthens Research & Technology16-16-1201011 mg in 671 µL 10 mM NH4HCO3, pH 7.4
Sepharose 4B-CLSigmaCL4B200Gecrosslinkte agarose,  vulmateriaal voor gelfiltratiechromatografiekolom
Sandwich ELISA-kit voor NGFR&D systemDY008
RundserumalbumineSigmaA2153
RPMI-1640 mediumGE Healthcare Life ScienceSH30096.02
PaardenserumGE Healthcare Life ScienceSH30074.03
Fetaal runderserumGibco10082147
PC12 cellenATCCCRL-1721
Rattenstaart collageen type ISigmaC3867
NatriumacetaatSigmaS2889
NatriumchlorideSigma31414
Triton X-100SigmaT8787
Fenylmethaansulfonytfluoride (PMSF)SigmaP7626
BenzethoniumchlorideSigmaB8879
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Apparatuur
HomogenisatorTekmarT 25-S1
Delsa Nano HC deeltjesanalysatorBeckman-CoulterDelsa Nano HC
Float-A-Lyzer G2 dialyse-apparaatSpectrum LaboratoriesG235036Molecule doorsnee 300 kDa
CentrifugeEppendoff5424R
Polytron homogenisatorKinematicaPT 1200C
DecapiCone Braintree Scientific Inc.DC-M200

Referenties

  1. Bruno, B. J., Miller, G. D., Lim, C. S. Basics and recent advances in peptide and protein drug delivery. Ther Deliv. 4 (11), 1443-1467 (2013).
  2. Mo, Z. C., Ren, K., Liu, X., Tang, Z. L., Yi, G. H. A high-density lipoprotein-mediated drug delivery system. Adv Drug Deliv Rev. 106 (Pt A), 132-147 (2016).
  3. Lacko, A. G., Sabnis, N. A., Nagarajan, B., McConathy, W. J. HDL as a drug and nucleic acid delivery vehicle. Front Pharmacol. 6, 247-252 (2015).
  4. Vaishya, R., Khurana, V., Patel, S., Mitra, A. K. Long-term delivery of protein therapeutics. Expert Opin Drug Deliv. 12 (3), 415-440 (2015).
  5. Lasic, D. D., Papahadjopoulos, D. Medical application of liposomes. , Elsevier. (1998).
  6. Samad, A., Sultana, Y., Aqil, M. Liposomal drug delivery systems: an update review. Curr Drug Deliv. 4 (4), 297-305 (2007).
  7. Bezemer, J. M., Radersma, R., Grijpma, D. W., Dijkstra, P. J., van Blitterswijk, C. A., Feijen, J. Microspheres for protein delivery prepared from amphiphilic multiblock copolymers: 2. Modulation of release rate. J Control Release. 67 (2-3), 249-260 (2000).
  8. Patel, A., Patel, M., Yang, X., Mitra, A. K. Recent advances in protein and peptide drug delivery: a special emphasis on polymeric nanoparticles. Protein Pept lett. 21 (11), 1102-1120 (2014).
  9. Kuai, R., Li, D., Chen, Y. E., Moon, J. J., Schwendeman, A. High-density lipoproteins: nature's multifunctional nanoparticles. ACS Nano. 10 (3), 3015-3041 (2016).
  10. Gursky, O. Structural stability and functional remodeling of high-density lipoproteins. FEBS Lett. 589 (19 Pt A), 2627-2639 (2015).
  11. McMahon, K. M., Thaxton, C. S. High-density lipoproteins for the systemic delivery of short interfering RNA. Expert Opin Drug Deliv. 11 (2), 231-247 (2014).
  12. McMahon, K. M., Foit, L., Angeloni, N. L., Giles, F. J., Gordon, L. I., Thaxton, C. S. Synthetic high-density lipoprotein-like nanoparticles as cancer therapy. Cancer Treat Res. 166, 129-150 (2015).
  13. Lerch, P. G., Förtsch, V., Hodler, G., Bolli, R. Production and characterization of a reconstituted high density lipoprotein for therapeutic applications. Vox Sang. 71 (3), 155-164 (1996).
  14. Zhang, Z., Chen, J., Ding, L., Jin, H., Lovell, J. F., Corbin, I. R., Cao, W., Lo, P. C., Yang, M., Tsao, M. S., Luo, Q., Zheng, G. HDL-mimicking peptide-lipid nanoparticles with improved tumor targeting. Small. 6 (3), 430-437 (2010).
  15. Kim, Y., Fay, F., Cormode, D. P., Sanchez-Gaytan, B. L., Tang, J., Hennessy, E. J., Ma, M., Moore, K., Farokhzad, O. C., Fisher, E. A., Mulder, W. J., Langer, R., Fayad, Z. A. Single step reconstitution of multifunctional high-density lipoprotein-derived nanomaterials using microfluidics. ACS Nano. 7 (11), 9975-9983 (2013).
  16. Prathipati, P., Zhu, J., Dong, X. D. Development of novel HDL-mimicking α-tocopherol-coated nanoparticles to encapsulate nerve growth factor and evaluation of biodistribution. Eur J Pharm and Biopharm. 108, 126-135 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Nanodeeltjespreparatiehomogenisatiemethodepartikelgrootteanalysegelfiltratiechromatografieinkapselingseffici ntiein vitro vrijgaveneurietuitgroeiapolipoprote ne A I
Voorbereiding en karakterisering van nieuwe HDL-nabootsende nanodeeltjes voor ingewikkelde zenuwgroei Factor
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.