Met resolutie muis optische coherentie tomografie steun intraoculaire injectie in het netvlies gentherapie onderzoek

Mark C. Butler; Jack M. Sullivan

doi:10.3791/55894

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Met resolutie muis optische coherentie tomografie steun intraoculaire injectie in het netvlies gentherapie onderzoek

9.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/55894

⸱

2 november 2018

Mark C. Butler¹^,² , Jack M. Sullivan¹^,²^,³^,⁴^,⁵^,⁶^,⁷

¹Research Service, VA Western New York Healthcare System, ²Department of Ophthalmology, (Ross Eye Institute), Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, ³Pharmacology/Toxicology, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, ⁴Physiology/Biophysics, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, ⁵Neuroscience Program, Jacobs School of Medicine and Biomedical Sciences, University at Buffalo- SUNY, ⁶The RNA Institute, University at Buffalo- SUNY, ⁷The SUNY Eye Institute

In dit artikel

Samenvatting

Hier tonen we een nieuwe benadering voor het gebruik van hoge resolutie spectrale domein optische coherentie tomografie (HR-SD-OCT) helpen levering van gen-therapie-agenten in de subretinal ruimte, beoordelen van haar areal dekking en karakteriseren fotoreceptor vitaliteit.

Samenvatting

HR-SD-OCT wordt gebruikt om te controleren de progressie van fotoreceptor degeneratie in levende muismodellen, beoordelen van de levering van therapeutische agenten in de subretinal ruimte, en ter beoordeling van toxiciteit en werkzaamheid in vivo. HR-SD-OCT gebruikt in de buurt van infrarood licht (800-880 nm) en heeft optica specifiek ontworpen voor de unieke optiek van het oog van de muis met sub-2-micron axiale resolutie. Transgene muismodellen van buitenste retinal (fotoreceptor) degeneratie en controles werden beeld voor de beoordeling van de progressie van de ziekte. Getrokken glas microneedles werden gebruikt voor het leveren van sub retinale injecties van adeno-associated virus (AAV) of nanodeeltjes (NP) via een trans-scleral en trans-choroidal aanpak. Nauwkeurige positionering van de naald in de subretinal ruimte was nodig voorafgaand aan een gekalibreerde druk injectie, die vloeistof in de sub retinale ruimte levert. Real time subretinal chirurgie werd uitgevoerd op onze retinal imaging systeem (RIS). HR-SD-OCT aangetoond progressieve uniforme Retina degeneratie toe te schrijven aan de expressie van een giftige mutant menselijke mutant rhodopsine (P347S) (RHO^P347S) transgenic muizen. HR-SD-OCT kunt strenge kwantificering van alle lagen van het netvlies. Nucleaire buitenlaag (ONL) dikte en fotoreceptor buitenste segment lengte (OSL) metingen correleren met fotoreceptor vitaliteit, degeneratie, of redding. Het uitvoeringssysteem RIS kunt visualisatie in real time van de subretinal injecties in neonatale (~ P10-14) of volwassen muizen, HR-SD-OCT onmiddellijk bepaalt succes van levering en kaarten areal mate. HR-SD-OCT is een krachtig hulpmiddel dat het succes van subretinal chirurgie bij muizen, daarnaast evalueren kan tot het meten van de vitaliteit van de researchdieren in vivo. HR-SD-OCT kan ook worden gebruikt ter identificatie van de uniforme dierlijke cohorten om te evalueren in welke mate van Retina degeneratie, toxiciteit en therapeutische redding in onderzoeken voor preklinische gen-therapie.

Inleiding

Onderzoekers ontwikkelen gentherapieën voor een verscheidenheid van retinale en netvlies degeneratieve ziekten met hoop van het vertalen van nieuwe therapeutics in behandelingen voor ziekten bij de mens¹^,,²^,,³^,⁴ ^, ⁵ ^, ⁶ ^, ⁷ ^, ⁸ ^, ⁹ ^, ¹⁰ ^, ¹¹. tijdsdomein of spectrale domein optische coherentie tomogra....