Engraftment van de tumor in een muismodel van Xenograft van menselijke mantel cel lymfoom

Samenvatting

Mantel cel lymfoom (MCL) is een moeilijk te behandelen stoornis van de B-cel en het is even moeilijk vast te stellen een muismodel van xenograft van primaire MCL te bestuderen en ontwikkelen van therapeutics. Hier beschrijven we de succesvolle invoering van MCL xenografts bij muizen om te helpen begrijpen van de onderliggende biologie.

Samenvatting

B-lymfocyten zijn belangrijke spelers in de immuun cel verkeer en ze vooral thuis van en wonen in de lymfoïde organen. Terwijl normaal B cellen slechts verspreiden wanneer gestimuleerd door T-lymfocyten, oncogene B cellen overleven en autonoom uit te breiden in ongedefinieerde orgel niches. Mantel cel lymfoom (MCL) is een dergelijke stoornis van de B-cel, waar het tarief van de mediane overleving van patiënten is 4-5 jaar. Dit vraagt om de behoefte aan doeltreffende mechanismen die de homing en engraftment van deze cellen worden geblokkeerd teneinde het voortbestaan en de levensduur van patiënten. Daarom is het streven naar het ontwikkelen van een xenograft muismodel voor het bestuderen van de werkzaamheid van MCL therapeutics door het blokkeren van de homing mechanisme in vivo van het allergrootste belang. Ontwikkeling van dierlijke ontvangers voor menselijke cel xenotransplantatie vroege fase drugs testen zijn lang uitgeoefend, zoals relevante preklinische Muismodellen zijn cruciaal voor het scherm nieuwe therapeutische agenten. Deze diermodel is ontwikkeld om te voorkomen dat menselijke graft afwijzing en om een model voor ziekten bij de mens kan, en het een uiterst nuttig hulpmiddel te bestuderen van de progressie van de ziekte van verschillende lymfoom typen en preklinische testen van kandidaat-geneesmiddelen voor hematologic maligniteiten, zoals MCL. We een muismodel van xenograft die zal dienen als een uitstekend middel om te bestuderen en ontwikkelen van nieuwe therapeutische benaderingen voor MCL opgericht.

Inleiding

Lymfocyten door de natuur een belangrijke rol spelen in de immuun toezicht en lymfocyt mensenhandel is een cruciale stap in de montage van antigeen specifieke immuniteit^1,2. Dit proces omvat migratie van naïeve T lymfocyten van de thymus naar de bloedstroom, en vandaar naar secundaire lymfoïde organen, met inbegrip van lymfklieren, Peyer de patches, of milt, waar ze elkaar ontmoeten cognaat antigenen. De B-lymfocyten onderscheiden in het beenmerg en in de follikels van secundaire lymfoïde organen³als naïef cellen migreren. Sommige van deze B-cellen antigeen met hun receptor binden en wo....

Protocol

De menselijke bloedmonsters werden gebruikt volgens de procedures die zijn goedgekeurd door de lokale ethische en menselijke experimenten comités van het universitair ziekenhuis van Genève.

Dierlijke procedures werden uitgevoerd overeenkomstig de institutionele ethisch comité van Animal Care in Genève, Zwitserland en de kantonnale Veterinair Bureau (autorisatienummer: GE/26/15).

1. bereiding van primaire perifere bloed mononucleaire cellen (PBMCs) door dichtheid verlopende scheiding

Opmerking: 3-5 mL van perifeer bloed is verkregen uit patiënten presenteren met MCL in een leukemische fas....

Resultaten

Het manuscript wordt beschreven van een geoptimaliseerde protocol voor de succesvolle ontwikkeling van een muismodel van xenograft voor engraftment van cellen van het MCL. Voorbereiding van een zuivere celpopulatie (in dit geval MCL cellen), is zeer cruciaal voor het ontwikkelen van succesvolle MCL xenografts. Figuur 1 geeft de voorbereidende stappen voor mononucleaire cel isolatie uit van MCL patiënt bloed door dichtheid verlopende scheiding. De mononucleair.......

Discussie

Klinische proeven zijn mogelijk voor drugs die zijn in een vergevorderd stadium van ontwikkeling, maar kunnen niet worden gebruikt voor drugontdekking. Inspanningen voor de ontwikkeling van dierlijke ontvangers voor menselijke cel xenotransplantatie om te testen van de vroege fase drugs zijn lang uitgeoefend. Hier presenteren we een dierlijk model dat vermijdt menselijke graft afwijzing en een model voor ziekten bij de mens, zoals MCL tot stand kan brengen. Dit is op dit moment een van de modernste xenograft model te bes.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Ficoll-paque media	GE Healthcare	17-1440-02	voor scheiding van mononucleaire cellen
RPMI Medium 1640	Gibco-Life technologies	61870-010	voor verdunning van bloedmonster
Phosphate Buffered Saline (PBS)	Sigma-Aldrich	D8537	wassen van cellen
Bovine Serum Albumin (BSA)	Sigma-Aldrich	A8412	voor bereiding van PBS met 1% BSA gebruikt bij het wassen van cellen tijdens isolatie
CD19-APC700	Beckman Coulter	B49212	menselijk pan-B cel marker
CD20-APC	Beckman Coulter	A21693	menselijk pan-B cel marker
CD20-ECD	Beckman Coulter	IM3607	menselijk pan-B cel marker
CD5-PC 5.5	Beckman Coulter	PN A70203	menselijk T cel marker
CD23-PE	Pharmingen	555711	Celoppervlak-eiwit typisch afwezig in MCL
CD45 KO	Beckman Coulter	B36294	Pan-leukecyten marker
CD200-PE	Pharmingen	552475	Celoppervlak-eiwit typisch afwezig in MCL
NOD scid gamma (NSG) muizen	Charles River Laboratories	5557	gebruikt voor het ontwikkelen van MCL xenografts in deze studie
Easy sep Human B cell verrijkingskit	Stem cell technologies	19054	gebruikt om B-cellen te verrijken om pure cellen te verkrijgen voor injectie in muizen
FACS	Beckman Coulter	Navios	gebruikt om MCL-monster te karakteriseren en de organen te bestuderen voor MCL-aanplant
1X ammonium chloride potassium buffer			rode bloed lysis buffer (NH4Cl 8.024 mg/l; KHCO3 1.001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l )