Alvleesklier islet microvasculaire vasomotion regelt islet bloed verspreiding en onderhoudt de fysiologische functie van β eilandjecellen. Dit protocol wordt beschreven met behulp van een laser Doppler-monitor om de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion in vivo te bepalen en te beoordelen van de bijdragen van de alvleesklier islet microcirculatie alvleesklier-gerelateerde ziekten.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Laser Doppler: Een instrument voor het meten alvleesklier Islet microvasculaire Vasomotion In Vivo
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Als een functionele status van de microcirculatie is microvasculaire vasomotion belangrijk voor de levering van zuurstof en voedingsstoffen en de verwijdering van kooldioxide en afvalproducten. De bijzondere waardevermindering van microvasculaire vasomotion misschien wel een cruciale stap in de ontwikkeling van de microcirculatie-gerelateerde ziekten. Daarnaast is het zeer gevacuoliseerd alvleesklier rotseilandje aangepast ter ondersteuning van de endocriene functie. In dit opzicht lijkt het mogelijk om te concluderen dat de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion invloed kan zijn op de functie van de alvleesklier eilandje. Analyseren van de pathologische veranderingen van de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion wellicht een haalbare strategie om te bepalen van bijdragen die alvleesklier islet microcirculatie maakt gerelateerde ziekten, zoals diabetes mellitus, Pancreatitis, enz. Dus, dit protocol wordt beschreven met behulp van een laser Doppler bloed stroom monitor om de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion te bepalen en vast te stellen parameters (waaronder gemiddelde bloedverspreiding, amplitude, frequentie en relatieve snelheid van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion) voor de evaluatie van de microcirculatory functionele status. In een streptozotocin-geïnduceerde diabetische muismodel vastgesteld we hebben een verminderde functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion. Kortom, kan deze aanpak voor de beoordeling van alvleesklier islet microvasculaire vasomotion in vivo mechanismen met betrekking tot ziekten van de alvleesklier islet openbaren.
Inleiding
Als een parameter van de functionele status van microcirculatie, microvasculaire vasomotion neemt verantwoordelijkheid voor de levering en uitwisseling van zuurstof, voedingsstoffen en hormonen en is van cruciaal belang voor de verwijdering van stofwisselingsproducten, zoals koolstofdioxide en afvalstoffen van de cel 1. microvasculaire vasomotion regelt ook bloed stroom distributie en weefsel perfusie, zulks afbreuk doet aan lokale microcirculatory bloeddruk en reacties op ontsteking, die oedeem in vele ziekten kan veroorzaken. Microvasculaire vasomotion is daarom uiterst belangrijk om de fysiologische functie van organen2,3,4, weefsels en cellen van de component. De bijzondere waardevermindering van microvasculaire vasomotion misschien wel één van de belangrijkste stappen in de ontwikkeling van de microcirculatie-gerelateerde ziekten5.
Laser Doppler werd oorspronkelijk ontwikkeld voor observatie en kwantificering op het gebied van de microcirculatie onderzoek6. Deze techniek, samen met andere technische benaderingen (bijvoorbeeld laser spikkel7transkutane zuurstof, enz.), werd beschouwd als de gouden standaard voor de beoordeling van de bloedstroom in de microcirculatie. De grondgedachte dat de bloedverspreiding van lokale microcirculatie (dat wil zeggen, de haarvaten, arteriolen, venules, enz.) kan worden bepaald door apparaat uitgerust met laser Doppler, is gebaseerd op het beginsel van Doppler shift. De golflengte en frequentie van de gestimuleerde emissie licht gewijzigd als lichte deeltjes bewegende bloedcellen in microvessels ondervinden, of zij onveranderd blijven. Daarom in de microcirculatie zijn het nummer en de snelheid van bloedcellen de belangrijkste factoren met betrekking tot de omvang en de frequentieverdeling van het Doppler-verschoven licht, terwijl de richting van de microvasculaire bloedstroom niet relevant is. Met behulp van verschillende methoden, een verscheidenheid aan weefsels zijn gebruikt voor microcirculatory studies, inclusief de mesenteries en dorsale huidplooien kamers van muizen, ratten, hamsters, en zelfs mens8. Echter, in het huidige protocol, focussen we op de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion, die wordt geëvalueerd met behulp van laser Doppler en een zelfgemaakte beoordelingssysteem voor de parameter.
Alvleesklier islet microcirculatie bestaat voornamelijk uit de alvleesklier eilandje microvessels en onderscheidende kenmerken vertoont. Een alvleesklier islet capillaire netwerk toont een vijf-keer-hogere dichtheid dan de capillaire netwerk van haar exocrine tegenhanger9. Voorzien van een geleider voor de levering van input glucose en verspreiden insuline, leveren endotheel eilandjecellen zuurstof metabolisch actieve cellen in islet β-cellen. Bovendien, opkomende bewijs toont ook aan dat het eilandje microvessels gaat niet alleen bij het reguleren van insuline genexpressie en overleving van de β-cel, maar ook in het beïnvloeden van de functie van β-cel; bevordering van β-celproliferatie; en een aantal vasoactieve, angiogenic, stoffen en groeifactoren10produceren. Daarom in dit opzicht afleiden we dat de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion kan islet β-cel functie beïnvloeden en in de pathogenese van ziekten zoals acute/chronische pancreatitis, diabetes en andere meedoen alvleesklier-gerelateerde ziekten.
Analyseren van de pathologische veranderingen van de functionele status van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion misschien wel een haalbare strategie om de bijdragen van de alvleesklier islet microcirculatie naar de hierboven vermelde ziekten. Een stapsgewijze procedure met een beschrijving van de aanpak om te bepalen alvleesklier islet microvasculaire vasomotion in vivo bieden hier. Typische metingen worden vervolgens weergegeven in de Resultaten van de vertegenwoordiger. Tot slot, de voordelen en beperkingen van de methode worden gemarkeerd in de discussie, samen met verdere toepassingen.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle dierproeven zijn uitgevoerd met inachtneming van alle relevante richtlijnen, verordeningen en regelgevende agentschappen. Dit protocol wordt gedemonstreerd werd uitgevoerd onder leiding en goedkeuring van het Instituut van microcirculatie dier ethische Commissie (IMAEC) op de Peking Unie medische College (PUMC).
1. dieren
- Vóór het begin van het experiment, houden drie BALB/c muizen per kooi, met gecontroleerde temperatuur (24 ± 1 ° C) en luchtvochtigheid (55 ± 5%), onder een 12-h licht-donker cyclus. De muizen vrije toegang verlenen tot regelmatige voedsel en water.
- Willekeurig verdelen de muizen in een niet-diabetische controlegroep en een diabetische groep. Nauwkeurig wegen van elke individuele muis en bereken het geïnjecteerde volume met behulp van het lichaamsgewicht van elke muis.
- De muizen voor 4 uur vóór streptozotocin (STZ) injectie snel en regelmatig water als normale bieden over experimentele dag 1.
- 0,1 M Natriumcitraat buffer met een pH van 4.3 voor te bereiden. 1 mL van de oplossing in een 1.5-mL microcentrifuge buis gebracht en de microcentrifuge buis wikkel in aluminiumfolie om te voorkomen dat blootstelling aan licht.
- Los de STZ in Natriumcitraat buffer (pH 4.3) om een eindconcentratie van de werken van 5 mg/mL vóór gebruik.
- Geven de muizen van de diabetische groep intraperitoneaal injecties van STZ bij een dosis van 40 mg/kg met een spuit van 1 mL en een 25-G naald. Injecteer de muizen van het besturingselement niet-diabetische met dezelfde hoeveelheid Natriumcitraat buffer (pH 4.3).
- De muizen terug te zetten in de kooien en hen te voorzien van regelmatige voedsel en water van 10% sucrose.
- Herhaal stap 1.3-1.7 op experimentele dagen 2 tot en met 5 (dat wil zeggen, de volgende 4 opeenvolgende dagen).
- De 10 gewichtspercenten sacharose water vervangen door regelmatig water na de laatste injectie van de STZ.
- Snel de muizen gedurende 6 uur, maar geef ze gratis toegang tot water, en hun bloedsuikerspiegel meten negen dagen later (experimentele dag 14). Het verzamelen van een bloedmonster uit de ader van de staart te bevestigen hyperglycemie met behulp van een bloed glucose monitoring systeem.
Opmerking: Muizen met bloed glucose niveaus > 200 mg / dL worden beschouwd diabetische.
2. voorbereiding van het Instrument
- Reinig de optische oppervlakken van de sondepunt en sonde-connector van het apparaat laser Doppler met een zachte, niet-schurend doek te verwijderen van stof en deeltjes. Steek de kabel in de poort van het instrument (figuur 1A).
- Monteer de kalibratie-stand doordat de flux standaard in thermisch evenwicht met experimentele omgeving (kamertemperatuur, meestal gedurende 30 minuten). Schud de flux standaard zachtjes gedurende 10 s en laat het rusten gedurende 2 minuten.
- Plaats de container flux standaard in het midden van de kalibratie-base. Aanpassen van de klem tot de maximale hoogte en beveiligen van de sonde in de klem zodanig dat deze naar beneden naar de container wijst. Zorg dat de flux standaard onder de sonde correct gepositioneerd is.
- Langzaam verplaatsen de sonde omlaag totdat de tip is goed ondergedompeld in de flux-standaard Selecteren en druk op "kalibratie" op de laser Doppler apparatuur en kiest u het kanaal van de werken die de sonde op is aangesloten. Voer de kalibratieprogramma totdat een aankondiging van de "Kalibratie succesvol" wordt weergegeven op het scherm van laser Doppler apparatuur.
- Beveilig de sonde die met behulp van de houders van de sonde. Handmatig veilig de sonde om te vermijden verkeer.
- Het handhaven van de laboratoriumruimte bij constante temperatuur (24 ± 1 ° C) en luchtvochtigheid (~ 50-60%).
- Geen externe licht (zoals fluorescerende en spot lampen) uitschakelen voordat u het experiment om te voorkomen dat externe licht-geïnduceerde verandering uitvoert.
3. voorbereiding van de dieren
- Autoclaaf de chirurgische instrumenten en laten afkoelen tot kamertemperatuur vóór gebruik.
- Geven de muizen 10 min om te acclimatiseren aan de experimentele omgeving voor het opsporen van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion door laser Doppler.
- Vul een spuit van 1 mL met 1 mL 3% pentobarbital natrium. Injecteer de pentobarbital natrium oplossing (75 mg/kg i.p.) anesthetize van de muizen.
- Betrekking hebben op de ogen van de muis met vooraf bevochtigd medische gaas om te voorkomen dat droogte.
- Zorg ervoor dat de muis volledig bewustzijn verliest en niet langer reageert op de staart of achtervoet met een tang wringt. Toezicht op de narcose gedurende het gehele verdoving en intraoperatieve evenement elke 15 min. handhaven de narcose door aanvulling met 10% van de eerste injectie hoeveelheid de pentobarbital oplossing wanneer nodig.
- Plaats een verwarming pad met een semi-isolerende laag onder het dier en plaats het dier in liggende positie en het overbrengen van de werkplek van de laser Doppler apparatuur. De muis naar het werkplatform met chirurgische tape vast.
- Doekje de buikhuid van de muis met betadine, waarna 75% ethanol wordt gebruikt om de buikstreek schone wisser.
- 2% lidocaine/0.5% bupivacaine (50/50) mengsel subcutaan injecteren. Knip een ~ 3 cm-diameter gat in het midden van een spons van gaas. Dekking van de abdominale regio met de spons van gaas.
- Til de buikhuid met een tang en maken een eerste verticale insnijding langs de middellijn van de buik met behulp van een scalpel of huid schaar.
- Pak de onderliggende spier met een tang en incise voor het invoeren van de buikholte. Niet verwonden de organen. Vouw de huid en onderliggende spieren over de borst te onthullen van de buikholte. Zachtjes bloot de alvleesklier lichaam en de milt met behulp van een paar blunt-nosed tang.
4. data-acquisitie voor analyse
- Stormloop naar de software van de laser Doppler apparatuur door te klikken op "Bestand" → "New" om een nieuwe meting-bestand te maken. Configureren van de aangesloten monitoren, onder het tabblad "Algemeen", stelt de follow-up duur "Gratis uitgevoerd." Gebruik de standaardinstelling voor de "LDF Monitor" tab. Klik op "Volgende".
- Instellen van de grafiekweergave in "weergave in het dialoogvenster instelling." Selecteer de "Flux, Conc, snelheid" kanalen door het controleren van de respectieve vakken. Selecteer de volgende parameters: 'Data source voor het kanaal' en 'Label, eenheden en kleur. Klik op "Next."
- Gebruikersinformatie over het onderwerp en de meting (dat wil zeggen, naam en onderwerp nummer, operator, toezicht op tijd, opmerkingen, etc.) invullen "informatie in het dialoogvenster bestand" en klik op "Next" om te voltooien de meetconfiguratie.
Opmerking: Een meting venster wordt automatisch gemaakt door de software (figuur 1B). - Handmatig vooraf de elektrode aan de alvleesklier. Zorg ervoor dat de afstand tussen de sonde en alvleesklier weefsels binnen 1 mm. Een ongepaste afstand geeft een kunstmatig verhoogd of verminderde bloed stroom lezing.
- Klik op het pictogram van de werkbalk "Start" te beginnen met opnemen van de gegevens van bloed microvasculaire perfusie eenheden (PU). Het verzamelen van de gegevens van de PU voortdurend voor 1 min elke run. Klik op 'Stop' als u wilt stoppen van de meting. Selecteer "Bestand" → "Opslaan als" om de naam en sla het bestand klaar meting.
- Handmatig verplaatsen de sonde na elke run om additieve effecten en de gelokaliseerde uitputting van contractiele te voorkomen en ontspanning capaciteit. Herhaal stap 4.1-4.4 om te oogsten Multi-Point (dat wil zeggen, drie willekeurig gekozen punten uit de alvleesklier weefsel) microvasculaire PU gegevens voor elke muis. Meten van de PU-gegevens van een niet-reflecterende plaat als een controle van de basislijn.
- Sluit de buikspier-laag en de huidlaag met een hechtdraad. Plaats de dieren in schone kooien achter de experimenten.
- Houd het dier warm door het plaatsen van de kooi herstel half-op de verwarming pad.
Opmerking: Let op warmte, hygiëne, vloeistof en voedselinname en infectie. Muizen met 2 mg/kg gedurende 48 uur Carprofen als postoperatieve pijn management beheren. Euthanasie uitvoeren door het injecteren van 150 mg/kg natrium pentobarbital i.p. Wanneer muizen worden waargenomen te zijn in een staat van ernstige pijn of leed dat niet kan worden verlicht.
5. berekening van de Parameters van de microvasculaire Vasomotion
- De opdracht "Uitvoer" van de laser Doppler software de tijd en PU onbewerkte gegevens exporteren als een *.xlsx bestand en open het bestand in een werkblad.
- Berekenen van de gemiddelde basislijn perfusie unit (PUb) (zie stap 4.6).
- De gemiddelde bloedverspreiding (PUeen) voor 1 min van een meting als volgt berekenen: gemiddelde bloedverspreiding (PUeen) = PU - PUb (vergelijking 1).
- Bereken de frequentie (cycli/min) voor elke 1 min van meting.
Opmerking: De frequentie van de microvasculaire vasomotion wordt gedefinieerd als het aantal pieken die hebben plaatsgevonden in een golf microvasculaire vasomotion per minuut. - Bereken de amplitude (ΔPU) voor elke 1 min van meting.
- De amplitude van de microvasculaire vasomotion berekenen als het verschil tussen het maximum (PUmax) en de minimum (PUmin): Amplitude (ΔPU) = PUmax - PUmin (vergelijking 2).
- Bereken de relatieve snelheid (PU) voor elke 1 min van meting.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een foto van de microvasculaire vasomotion meting laser Doppler apparatuur uitgerust met een halfgeleider-laserdiode wordt weergegeven in figuur 1A. De software van de interface van de gebruiker wordt weergegeven in figuur 1B. Met behulp van de methode die hierboven vermeld, werden de hemodynamische parameters van de alvleesklier islet microvasculaire vasomotion voor zowel niet-diabetische controle en diabetesmuizen ontdekt. Een ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In de gevallen waarbij microvasculaire dysfunctie (bijvoorbeeld diabetes, acute pancreatitis, perifere microvasculaire ziekten, enz.), leiden bepaalde ziekten tot verminderde doorbloeding. Dan veranderingen in de bloedstroom zijn er belangrijke indicatoren, zoals microvasculaire vasomotion, die een afspiegeling van de functionele status van de microcirculatie. De specifieke indicator, microvasculaire vasomotion, wordt meestal gedefinieerd als de trilling van de microvasculaire Toon in microvasculaire be...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door subsidies van de Peking Unie medische College Jeugd Fonds en de fundamentele middelen voor onderzoek voor de centrale universiteiten (Grant nr. 3332015200).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| MoorVMS-LDF2 | Moor Instruments | GI80 | PeriFlux 5000 (Perimed Inc.) kan worden gebruikt als alternatief apparaat om gegevens te verzamelen |
| MoorVMS-PC Software | Moor Instruments | GI80-1 | Software van MoorVMS-LDF2 |
| Calibratiestandaard | Moor Instruments | GI-cal | Calibratietool |
| Calibratiebasis | Moor Instruments | GI-cal | Calibratietool |
| Calibratieflux standaard | Moor Instruments | GI-cal | Calibratietool |
| One Touch UltraEasy glucometer | Johnson and Johnson | #1955685 | Hyperglykemie bevestigen |
| One Touch UltraEasy strips | Johnson and Johnson | #1297006 | Hyperglykemie bevestigen |
| Streptozotocin | Sigma-Aldrich | S0130 | Oplossen in natriumcitraatbuffer (pH 4.3) |
| Pentobarbital natrium | Sigma-Aldrich | P3761 | Werkconcentratie 3 % |
| Ethanol | Sinopharm Inc. | 200121 | Werkconcentratie 75 % |
| Sucrose | Amresco | 335 | Werkconcentratie 10 % |
| Medische gaas | China Health Materials Co. | S-7112 | Chirurgisch |
| Blunt-nose forceps | Shang Hai Surgical Instruments Inc. | N-551 | Chirurgisch |
| Chirurgische tapes | 3M Company | 3664CU | Chirurgisch |
| Gaas spons | Fu Kang Sen Medical Device CO. | BB5447 | Chirurgisch |
| Schaar | Yu Lin Surgical Instruments Inc. | 175C | Chirurgisch |
| Huidschaar | Carent | 255-17 | Chirurgisch |
| Hechtdraad | Ning Bo Surgical Instruments Inc. | 3325-77 | Chirurgisch |
| Spuit en 25-G naald | MISAWA Inc. | 3731-2011 | Schaal: 1 ml |
Referenties
- Aalkjaer, C., Nilsson, H. Vasomotion: cellular background for the oscillator and for the synchronization of smooth muscle cells. Br J Pharmacol. 144 (5), 605-616 (2005).
- Serne, E. H., de Jongh, R. T., Eringa, E. C., IJzerman, R. G., Stehouwer, C. D. Microvascular dysfunction: a potential pathophysiological role in the metabolic syndrome. Hypertension. 50 (1), 204-211 (2007).
- Carmines, P. K. Mechanisms of renal microvascular dysfunction in type 1 diabetes: potential contribution to end organ damage. Curr Vasc Pharmacol. 12 (6), 781-787 (2014).
- Holowatz, L. A. Human cutaneous microvascular ageing: potential insights into underlying physiological mechanisms of endothelial function and dysfunction. J Physiol. 586 (14), 3301(2008).
- De Boer, M. P., et al. Microvascular dysfunction: a potential mechanism in the pathogenesis of obesity-associated insulin resistance and hypertension. Microcirculation. 19 (1), 5-18 (2012).
- Nilsson, G. E., Tenland, T., Oberg, P. A. Evaluation of a laser Doppler flowmeter for measurement of tissue blood flow. IEEE Trans Biomed Eng. 27 (10), 597-604 (1980).
- Chen, D., et al. Relationship between the blood perfusion values determined by laser speckle imaging and laser Doppler imaging in normal skin and port wine stains. Photodiagnosis Photodyn Ther. 13 (1), 1-9 (2016).
- Fuchs, D., Dupon, P. P., Schaap, L. A., Draijer, R. The association between diabetes and dermal microvascular dysfunction non-invasively assessed by laser Doppler with local thermal hyperemia: a systematic review with meta-analysis. Cardiovasc Diabetol. 16 (1), 11-22 (2017).
- Yaginuma, N., Takahashi, T., Saito, K., Kyoguku, M. The microvasculature of the human pancreas and its relation to Langerhans islets and lobules. Pathol Res Pract. 181 (1), 77-84 (1986).
- Brissova, M., et al. Islet microenvironment, modulated by vascular endothelial growth factor-A signaling, promotes beta cell regeneration. Cell Metab. 19 (3), 498-511 (2014).
- de Moraes, R., Van Bavel, D., Gomes Mde, B., Tibirica, E. Effects of non-supervised low intensity aerobic excise training on the microvascular endothelial function of patients with type 1 diabetes: a non-pharmacological interventional study. BMC Cardiovasc Disord. 16 (1), 23-31 (2016).
- Humeau-Heurtier, A., Guerreschi, E., Abraham, P., Mahe, G. Relevance of laser Doppler and laser speckle techniques for assessing vascular function: state of the art and future trends. IEEE Trans Biomed Eng. 60 (3), 659-666 (2013).
- Park, H. S., Yun, H. M., Jung, I. M., Lee, T. Role of Laser Doppler for the Evaluation of Pedal Microcirculatory Function in Diabetic Neuropathy Patients. Microcirculation. 23 (1), 44-52 (2016).
- Sun, P. C., et al. Microcirculatory vasomotor changes are associated with severity of peripheral neuropathy in patients with type 2 diabetes. Diab Vasc Dis Res. 10 (3), 270-276 (2013).
- Pan, Y., et al. Effects of PEMF on microcirculation and angiogenesis in a model of acute hindlimb ischemia in diabetic rats. Bioelectromagnetics. 34 (3), 180-188 (2013).
- Jumar, A., et al. Early Signs of End-Organ Damage in Retinal Arterioles in Patients with Type 2 Diabetes Compared to Hypertensive Patients. Microcirculation. 23 (6), 447-455 (2016).
- Nguyen, H. T., et al. Retinal blood flow is increased in type 1 diabetes mellitus patients with advanced stages of retinopathy. BMC Endocr Disord. 16 (1), 25-33 (2016).
- Forst, T., et al. Retinal Microcirculation in Type 1 Diabetic Patients With and Without Peripheral Sensory Neuropathy. J Diabetes Sci Technol. 8 (2), 356-361 (2014).
- Hu, H. F., Hsiu, H., Sung, C. J., Lee, C. H. Combining laser-Doppler flowmetry measurements with spectral analysis to study different microcirculatory effects in human prediabetic and diabetic subjects. Lasers Med Sci. 31 (1), 1-8 (2016).
- Klonizakis, M., Manning, G., Lingam, K., Donnelly, R., Yeung, J. M. Effect of diabetes on the cutaneous microcirculation of the feet in patients with intermittent claudication. Clin Hemorheol Microcirc. 61 (3), 439-444 (2015).
- Khazraei, H., Shafa, M., Mirkhani, H. Effect of ranolazine on cardiac microcirculation in normal and diabetic rats. Acta Physiol Hung. 101 (3), 301-308 (2014).
- Fujita, T., et al. Increased inner ear susceptibility to noise injury in mice with streptozotocin-induced diabetes. Diabetes. 61 (11), 2980-2986 (2012).
- Wiernsperger, N., Nivoit, P., De Aguiar, L. G., Bouskela, E. Microcirculation and the metabolic syndrome. Microcirculation. 14 (4-5), 403-438 (2007).
- Chawla, L. S., et al. Vascular content, tone, integrity, and haemodynamics for guiding fluid therapy: a conceptual approach. Br J Anaesth. 113 (5), 748-755 (2014).
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
