We beschrijven de diverse stappen implantaat chronische silicon sondes en het optekenen van plaats cellen in muizen die running hoofd-gefixeerd op een loopband cue-verrijkt-apparaat zijn.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Implantatie van chronische Silicon sondes en opname van Hippocampal plaats cellen in een verrijkte loopband-apparaat
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Een belangrijke voorwaarde voor het begrijpen van de hersenfunctie is de identificatie van gedrag en cel activiteit correleert. Silicon sondes zijn geavanceerde elektroden voor grootschalige elektrofysiologische opname van neuronale activiteit, maar de procedures voor hun chronische implantatie nog steeds onderontwikkeld zijn. De activiteit van cellen van de hippocampal plaats te correleren met het dier positie in de omgeving is bekend, maar de onderliggende mechanismen zijn nog onduidelijk. Om te onderzoeken plaats cellen, beschrijven hier we een reeks technieken die variëren van de vervaardiging van apparaten voor chronische silicon sonde implantaten aan de opvolging van plaats veld activiteit in een cue-verrijkt loopband-apparaat. Een micro-station en een hoed zijn gebouwd door montage en bevestiging samen 3D-gedrukte plastic onderdelen. Een sonde silicium is gemonteerd op de micro-drive, schoongemaakt en bekleed met kleurstof. Een eerste operatie wordt uitgevoerd om te herstellen van de hoed op de schedel van een muis. Kleine monumenten zijn vervaardigd en aan de riem van een loopband. De muis is getraind om te draaien hoofd-vaste op de loopband. Een tweede operatie wordt uitgevoerd om het implantaat de silicium-sonde in de hippocampus, na welke breedband elektrofysiologische signalen zijn opgenomen. Ten slotte is de sonde silicon herstelde zich en gereinigd voor hergebruik. De analyse van de plaats cel activiteit in de loopband onthult een verscheidenheid van mechanismen van veld, waarin het voordeel van de aanpak.
Inleiding
Silicon sondes presenteren verschillende voordelen voor elektrofysiologische opnamen, waaronder het feit dat ze zijn ontworpen met scherpe profielen minimaliseren van weefselschade en dat deze een nauwkeurige lay-out van dichtbevolkte verpakt opname sites1, 2,3,4. Ze worden gebruikt voor het bestuderen van verschillende systemen in verschillende soorten, waaronder mensen3,5,6, met uiteenlopende benaderingen1,
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
alle methoden die worden beschreven door de Animal Care en gebruik Comité van het Korea Instituut voor wetenschap en technologie zijn goedgekeurd.
1. voorbereiding van de Micro-aandrijving en de elektrode
- monteren van de micro-aandrijving.
- Afdrukken de delen van de micro-drive (schuif, lichaam en shell) 14 met behulp van een high-resolution 3D-printer. Zorg ervoor dat de onderdelen geen defecten.
- Herstellen van de schuifregelaar in het lichaam van de micro-station met een schroef (maat 000-120 x 1/4).
- Soldeer een moer (maat 000-120 000-120/64 Hex) op het pu....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een muis werd eerst opgeleid om uit te voeren op een twee meter lange riem verstoken van signalen (Figuur 1 c). Na de implantatie van de elektrode, een nieuwe band van dezelfde lengte maar presenteren 3 paren van signalen werd geïnstalleerd op de loopband, om het genereren van allocentric ruimtelijke vertegenwoordigingen12,14. Breedband signalen werden opgenomen op een sampling rate van 30.000 Hz, met.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Chronische opname van neuronale activiteit is van cruciaal belang voor het begrijpen van neurale processen zoals velden hippocampal plaatsen. Onze aanpak voor het uitvoeren van chronische silicon sonde implantantation onderscheidt zich van andere methoden7,18,19,20 door het feit dat het relatief eenvoudig te herstellen van de elektrode pakket at het einde van het experiment. Terwijl plaats cell.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
Dit werk werd gesteund door de Korea Instituut voor wetenschap en technologie in de institutionele programma (projecten nr. 2E26190 en 2E26170) en het Human Frontier Science Program (RGY0089/2012).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Silicon Probe | Neuronexus | Buzsabi32 | Opname-elektrode |
| Opnamesysteem | Intantech | RHD2132/RHD2000 | |
| 3D-printer | Asiga | Pico Plus 27 | Hoge resolutie printer voor micro-drive |
| 3D-printer | Stratasys | Mojo | Lage resolutie printer voor hoedcomponenten |
| Stereotaxisch apparaat | Kopf | Model 963 | |
| Binoculaire microscoop | Leica | M60 | |
| Loopbandapparaat | We bouwen ze |
Referenties
- Schjetnan, A. G., Luczak, A. Recording large-scale neuronal ensembles with silicon probes in the anesthetized rat. J Vis Exp. (56), (2011).
- Buzsaki, G. Large-scale recording of neuronal ensembles. Nat Neurosci. 7 (5), 446-451 (2004).
- Suner, S., Fellows, M. R., Vargas-Ir....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
