Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model

Jaesung P. Choi; Xi Yang; Matthew Foley; Xian Wang; Xiangjian Zheng

doi:10.3791/56476

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model

10.2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/56476

⸱

4 september 2017

Jaesung P. Choi¹^,² , Xi Yang³ , Matthew Foley⁴ , Xian Wang¹ , Xiangjian Zheng¹^,²^,³

¹Lab of Cardiovascular Signaling, Centenary Institute, ²Faculty of Medicine, Sydney Medical School, University of Sydney, ³Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, ⁴Australian Centre for Microscopy & Microanalysis, University of Sydney

In dit artikel

Samenvatting

Dit protocol toont de inductie van cerebrale cavernous malformatie ziekte in een muismodel en gebruik contrast enhanced micro computertomografie voor het meten van de laesie Last. Deze methode verbetert de waarde van gevestigde Muismodellen te bestuderen van de moleculaire basis en mogelijke therapieën voor cerebrale cavernous misvorming en andere cerebrovasculaire ziekten.

Samenvatting

Mutaties in het CCM1 (aka KRIT1), CCM2, of CCM3 (aka PDCD10) gene cerebrale cavernous malformatie (CCM) bij de mens veroorzaken. Muismodellen voor CCM ziekte hebben opgericht door tamoxifen geïnduceerde schrapping van Ccm genen in postnatale dieren. Deze Muismodellen bieden waardevolle hulpmiddelen voor het onderzoek naar moleculaire mechanisme en therapeutische benaderingen voor CCM ziekte. Een nauwkeurige en kwantitatieve methode te beoordelen van de laesie lasten en progressie is essentieel voor het benutten van de volledige waarde van deze dierlijke modellen. Hier tonen we de inductie van CCM ziekte in een muismodel en het gebruik van het contrast enhanced X-ray micro computertomografie (micro-CT) methode aan maatregel CCM laesie last in muis hersenen. Op postnatale dag 1 (P1), we gewend 4-hydroxytamoxifen (4e) activeren van Cre recombinase activiteit van de Cdh5-CreErt2-transgenic te klieven van het floxed-allel voor Ccm2. CCM laesies in muis hersenen werden geanalyseerd op P8. Voor micro-CT, werd jodium gebaseerd Lugoljodium oplossing gebruikt om het contrast in hersenweefsel verbeteren. Wij hebben de parameters van de scan geoptimaliseerd en gebruikt een voxel dimensie van 9,5 µm, die leiden tot een minimale grootte van ongeveer 25 µm. Deze resolutie is voldoende voor het meten van CCM laesie volume en aantal wereldwijd en accuraat, en bieden hoge kwaliteit 3D-toewijzing van CCM letsels in de hersenen van de muis. Deze methode verbetert de waarde van de gevestigde Muismodellen te bestuderen van de moleculaire basis en mogelijke therapieën voor CCM en andere cerebrovasculaire ziekten.

Inleiding

CCM dun zijn ommuurde, vasculaire misvormingen in de hersenen met een prevalentie van maximaal 0,5% in de menselijke populatie¹uitgezet. CCM kan worden overgenomen als een dominante stoornis als gevolg van verlies-van-functie mutaties in één van drie genen: CCM1 (aka Krit1), CCM2en CCM3 (ook wel PDCD10genoemd)²^,³^,⁴ ^,⁵^,⁶. Deze genen zijn aanwezig in een honkslag signalering complex.

Verschillende modellen ontwik....