Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie

17.2K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/56512

⸱

30 oktober 2017

 ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Nebraska Medical Center, 2Department of Biomedical Sciences, GA-PCOM

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van geheel, intact muis borstklieren om te onderzoeken van de extracellulaire matrix (ECM) expressie en ductaal morfologie. Muis #4 abdominale klieren werden gehaald uit de 8-10 week oude vrouwelijke nullipaar muizen, vast in neutraal gebufferde formaline, gesegmenteerd en gekleurd met behulp van immunohistochemistry voor ECM eiwitten.

Samenvatting

Het doel van deze procedure was om te oogsten van de #4 abdominale borstklieren van vrouwelijke nullipaar muizen teneinde ECM expressie en ductaal architectuur. Hier is een klein zakje onder de huid gemaakt met behulp van Mayo schaar, waarmee een scheiding van de klieren in het onderhuidse weefsel van de onderliggende buikvlies. Visualisatie van de klieren was geholpen door het gebruik van 3.5 x-R chirurgische micro loupes. De pelt werd omgekeerd en gespeld terug waardoor identificatie van de intact borstklier vet pads. Elk van de #4 abdominale klieren was ronduit ontleed door te schuiven van het scalpel blad lateraal tussen de subcutane laag en de klieren. Onmiddellijk na de oogst, de klieren werden geplaatst in 10% neutraal gebufferde formaline voor latere bewerking. Excisie van de hele klier is voordelig omdat het voornamelijk het risico elimineert uit te sluiten van belangrijke weefsel bestrijkende interacties tussen ductaal epitheliale cellen en andere microenvironmental cellulaire populaties die kunnen worden gemist in een gedeeltelijke biopsie. Een nadeel van de methode is het gebruik van seriële secties uit vaste weefsels die analyses van ductaal genuitdrukking en eiwit expressie naar een discrete locatie in de klier beperkt. Wijzigingen in ductaal architectuur en eiwit expressie in 3 dimensies (3D) is als zodanig niet makkelijk verkrijgbare. De techniek is over het algemeen van toepassing op studies vereisen geheel intact lymfkliertest borstklieren voor downstream onderzoeken zoals ontwikkelingsstoornissen ductaal morfogenese of borst kanker.

Inleiding

Borstkanker wordt gekenmerkt door een aanzienlijke mate van weefsel fibrose1,2,3,4. Hierna de ECM, deze niet-cellulair entiteit wordt gevonden in wisselend in alle weefsels en bestaat voornamelijk uit een complexe Zitschalen van fibrillar en niet-fibrillar collagens, elastine en glycoproteïnen naast verschillende signalering moleculen die zijn afgezonderd in deze matrix. Homeostatische omstandigheden, is de afzetting en de aantasting van de ECM streng gecontroleerd. 5 tijdens borst tumorvorming, het evenwicht van ECM afzetting en afbraak wordt verstoord. Tumoren van de borst zijn als zodanig gemeld uitspreken overvloedige ECM eiwitten zoals collagens, fibronectin en tenascin-C o.a.. 6 de abnormale uitdrukking van deze proteïnen naast verhoogde patronen van matrix crosslinking is gedocumenteerd ter bevordering van de borst tumor progressie, metastase en therapie resistentie1,3, 4,7,8,9.

Om te beoordelen ECM samenstelling en ductaal morfologie, werd isolatie van intact borstklieren uitgevoerd. Hier hebben we vrouwelijke nullipaar muizen gebrekkig gebruikt voor caveolin-1, een integraal membraan eiwit die is gekoppeld aan een agressieve borstkanker tumor handtekening10,11,12, en controle over vrouwelijke nullipaar B6 muizen. Histologische verwerking en kleuring van deze weefsels toegestaan de identificatie van verschillende ECM eiwitten samen met de karakterisering van ductaal morfologie.

Over het geheel genomen geeft het isolement van geheel, intact borstklieren onderzoekers de mogelijkheid te onderzoeken weefsel bestrijkende morfologische of cellulaire veranderingen naar aanleiding van exogene of endogene factoren. Nadelen van de techniek worden geassocieerd met analyses van 2 dimensie (2D) weefselsecties in tegenstelling tot een 3D perspectief, die een vollediger beeld van de complexe morfologie van de ductaal boom zou opleveren. Gezien de complexiteit van cel-cel en cel-ECM interacties die in de melkklier plaatsvinden, is het isolement van de klieren van het geheel, intact gunstig voor het efficiënt analyseren ductaal morfologie en eiwit expressie in verschillende regio's van de borstklier RattenUitrustingen klier.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

procedures met betrekking tot dierlijke onderwerpen in dit protocol werden herzien en goedgekeurd door het institutionele Animal Care en gebruik Comité van de Philadelphia College of Osteopatisch Medicine en alle technieken werden uitgevoerd onder strikte ethische richtsnoeren.

1. steekproef aanbestedingen en verwerking

  1. Selecteer passende dierlijke onderwerp en plaats een CO 2 zaal. Gebruik voor dit experiment, 8-10 week oude vrouwelijke nullipaar B6. CG-Cav1tmMIs/J en C57BI/6J.
  2. Inschakelen gasstroom tot 30-40%. Zodra het dier zichtbaar bewusteloos is na ongeveer 2 minuten, open de gas klep aan de volledige druk voor een extra 5 min.
    Opmerking: Bevestigen dier dood door het observeren van de zichtbare tekenen van de ademhaling (bv. de beweging van de borstkas) voor een periode van 10 minuten na beëindiging van de CO 2 levering. Als het dier nog leeft, kan het terug in de CO 2-kamer worden geplaatst. Cervicale dislocatie kan ook gebruikt worden, hoewel dit niet raadzaam is als bloed kan ophopen rond de borstklieren bemoeien met de dissectie en resultaten.
  3. Na offer, pin karkas in een liggende positie en verzadigen met 70% ethanol.
  4. Knijpen de pelt net boven het schaambeen met pincet en nick met een kleine chirurgische schaar. De schaar, roterende gesneden de pelt langs de ventral midline verplaatsen caudal craniale.
  5. Met grotere schaar of een hemostat, bot ontleden de subcutane fascia bilateraal, met voorzichtigheid niet aanprikken van het buikvlies. U snijdt langs de horizontale marges aan beide distale uiteinden van de incisie.
  6. Pin de pelt kleppen open en spuit weer met 70% ethanol.
    Opmerking: Hoewel het gebruik van 70% ethanol toegestaan beter visueel onderscheid tussen de klier en de omringende subcutane weefsel, voorzichtig om te voorkomen dat het drogen van het weefsel als gevolg van gebruik van deze oplossing. Om te voorkomen drogen, verwijdert u de klier in een time frame niet meer bedragen dan 4 min. Als alternatief voor 70% ethanol, de onderzoeker kan ook vervangen door een algemene isoleren buffer, zoals 1 x PBS, om te voorkomen dat weefsel opdroging.
  7. Zoeken de borstklieren van belang, schuif een #4 scalpel mes langs de binnenkant van de kleppen van pelt, snijden de melkklier en bijbehorende cutane adipeus vrij van de dermis.
    Opmerking: 3.5 x chirurgische micro loupes kan steun bij gemakkelijker visualisatie van de klieren.
  8. Direct dompelen nieuw geïsoleerd klier in conische buis met 10:1 oplossing-weefsel volume van 10% neutraal gebufferde formaline voor 24-48 h.
    Opmerking: Afhankelijk van de opzet van de studie, veel alternatieve fixatives kunnen worden gebruikt zoals paraformaldehyde, ethanol voor genomic studies en verkrijgbare RNA behoud van buffers.
  9. Volg institutionele protocollen voor het insluiten van paraffine, dienen de monsters naar een leverancier voor verwerking, insluiten, en snijden/dia montage. Afdeling weefsels op 5 µm.
    Opmerking: Als gevolg van overtollige obesitas omliggende klier, kunt u overwegen verwijderen 100-200 µm van weefsel voor segmenteren en kleuring.

2. Weefsel Staining

  1. Immunohistochemistry
    1. plaats dia's te worden gekleurd op warmte blok vastgesteldop 58 ˚C voor 1 h te smelten paraffine.
      Let op: Smelten van paraffine dia kan wegvloeien. In de gaten of plaats van vegen onder de dia te vangen afvoer wax.
      Opmerking: Deze stap is niet essentieel en kan worden overgeslagen. Als de resultaten zijn niet zoals verwacht, het toevoegen van deze stap terug resultaten kan verbeteren.
    2. Incubate dia's in een dia jar met 100% xyleen voor 30 min zorgen voor volledige onderdompeling. Eenmaal herhaald.
      Opmerking: op dit punt, visuele inspectie moet worden uitgevoerd om ervoor te zorgen dat weefselsecties vrij van vetweefsel en paraffine zijn. Als extra adipeus weefsel of wax blijkt, moet de dia opnieuw worden ondergedompeld in xyleen. Wees voorzichtig om te minimaliseren van toegevoegde blootstelling aan xyleen, omdat dit leiden inkrimping van het weefsel tot kan.
    3. Hydrateren weefsels in een pot van de dia met 100% ethanol voor 10 min. eenmaal herhaald.
    4. Zet dia's aan een dia jar met 95% ethanol voor 10 min. eenmaal herhaald.
    5. Dia's aan een dia pot met 75% ethanol voor 5 min. verplaatsen
    6. Dia's aan een dia pot met 50% ethanol voor 5 min. verplaatsen
    7. 10 mM Natriumcitraat oplossing (pH 6.0) in een hete plaat of een magnetron koken en giet in Coplin jar.
      Let op: Zorgvuldig oplossing terwijl verwarming controleren en verzorgen om te voorkomen dat kook. Container zullen erg warm. Bescherming te gebruiken om te voorkomen dat brandwonden.
    8. Langzaam plaats dia's Coplin jar, zorgen voor volledige onderdompeling, en Incubeer bij 100 ° C gedurende 10 minuten ophalen epitopes. Verwijderen en zorgvuldig droog dia.
    9. Tekent een barrière rond weefsel met een hydrofobe marker. Voeg genoeg endogene enzym blocker (waterstofperoxide en natriumazide, beschikbaar commercieel) te dekken weefsel en incubeer gedurende 10 min.
    10. Submerge dia's in 1 x fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) gedurende 10 minuten
    11. Toevoegen genoeg serum 10% ezel in 1 x PBS te dekken weefsel en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur in een bevochtigde kamer.
      Opmerking: Het experiment kan hier onderbroken worden door de dia's op te slaan in de bevochtigde zaal bij 4 ° C's nachts. Terwijl donkey serum bleek optimale kleuring resultaten oplevert, kan de onderzoeker wil verschillende testsera zoals bovien serumalbumine (BSA), geit serum of paard serum om optimale resultaten. Als BSA, de onderzoeker deze vers vóór gebruik moet bereiden.
    12. Overtollige blocker uit dia's decanteren en behoorlijk verdunde primair antilichaam in 1% serum rechtstreeks toevoegen aan dia's ervoor te zorgen dat het weefsel in de oplossing gelijkmatig bedekt is. Incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur in een bevochtigde kamer.
      Opmerking: Deze stap kan worden voortgezet voor langere tijdsduur met vochtige kamer bewaard bij 4 ° C. Zorg ervoor op te nemen van de juiste negatieve controle dia's (bijvoorbeeld een dia met geen primair antilichaam, bekend antigeen-negatieve weefsel, etc.) bij deze stap.
    13. Zorgvuldig wassen van dia's door stroomt ongeveer 1 mL diH 2 O over weefsel en incubeer in 1 verandering van 1 x PBS voor 5 min.
    14. Overtollige PBS decanteren en genoeg horseradish peroxidase label weefsel en incubeer gedurende 30 min. in een bevochtigde kamer toevoegen.
      Opmerking: Bij deze stap, de onderzoeker kan wil overgaan tot fluorescerende vlekken met behulp van fluorescently geconjugeerd secundaire antilichamen. Indien dit is gewenst, de volgende stappen moeten dienovereenkomstig worden gewijzigd.
    15. Zorgvuldig wassen van dia's door stroomt ongeveer 1 mL diH 2 O over weefsel en incubeer in 1 verandering van 1 x PBS voor 5 min.
    16. Maken diaminobenzidine (DAB) plus chromogeen oplossing volgens de voorgestelde verhouding van fabrikant en meng door vortex.
      Opmerking: Veel kant en klare kits zijn commercieel beschikbaar afgezien van degene die in dit protocol worden gebruikt.
    17. Decant overmaat buffer van dia's en voeg 2-3 druppels (10-50 µL) chromogeen vlek direct naar weefsels en Incubeer gedurende 5 min. in vochtige kamer. Dia's door vloeiende ongeveer 1 mL diH 2 O grondig te wassen over weefsel.
      Let op: DAB-chromogeen is zeer giftig. Vermijd direct contact van de vlek met huid en verzamelen stroom uit in gevaarlijke afvalstoffen.
  2. Haematoxyline en eosine (H & E)
    1. laatste spoeling na chromogeen incubatie, dia's in Harris Haematoxyline voor 2-2,5 min. spoelen dia voorzichtig onder leidingwater voor 1-2 min. onderdompelen
      Opmerking: zorgen om rechtstreekse waterstraal op weefsels.
    2. Submerge dia's voor 2-3 s in differentiatie oplossing (0,25 mL zoutzuur in 100 mL 70% ethanol). Spoel van dia's voorzichtig onder de kraan water voor ongeveer 1-2 min.
    3. Onderdompelen van dia's in blauwe agent (4.5 mg calciumcarbonaat in 100 mL leidingwater, pH aangepast aan 9.4) voor 60 s. Rinse dia's in 95% ethanol voor 30 s.
    4. Submerge dia's in alcoholische eosine Y gedurende 2-3 minuten
    5. Weefsel in 2 wijzigingen van 95% ethanol voor 1 min elke uitdrogen.
    6. Weefsel van de Dehydrate in 1 wijzigen van 100% ethanol voor 1 min.
    7. Zorgvuldig droog dia's met een pluisvrij doekje. Toepassing 1 druppel (ongeveer 100-200 µL) van kunststof, niet-waterige, hars gebaseerde montage media naar dia en breng dekglaasje aan.
      Opmerking: Indien een verschillende kleuringstechniek werd verkozen, een montage van verschillende media kan worden verlangd. Bijvoorbeeld, als de onderzoeker koos een TL-geconjugeerde secundair antilichaam, een waterige mount zou idealere.
    8. Toestaan van dia's instellen 's nachts bij kamertemperatuur.
  3. Picrosirius rood (PSR) Staining
    1. Selecteer dia's die moeten worden gekleurd en volgen van immunohistochemistry protocol via stap 6 (50% ethanol soak).
    2. Submerge dia's in PSR vlek voor 1 h.
    3. Onderdompelen van dia's in 0,5% azijnzuur voor 1-2 s, tweemaal om te onderscheiden van vlek.
    4. Weefsels in 2 wijzigingen van 95% ethanol voor 1 min elke uitdrogen.
    5. Weefsels van de Dehydrate in 1 wijzigen van 100% ethanol voor 1 min.
    6. Schakelt u dia's door kort opgedeeld in 100% xyleen voor over 3-4 s.
    7. Zorgvuldig droog dia's met een pluisvrij doekje. Toepassing 1 druppel (ongeveer 100-200 µL) van kunststof, niet-waterige, hars gebaseerde montage media naar dia en breng dekglaasje aan.

3. Proef de analyse

  1. Ductaal analyse
    1. Selecteer dia's gekleurd voor α-SMA. Met behulp van een lichte Microscoop uitgerust met een camera gemonteerd doelstelling, het verzamelen van representatieve beelden met 20 X vergroting.
    2. Using ImageJ (NIH), onderscheiden en tellen van leidingen in elk beeld. Dit kunnen handmatig worden geïnventariseerd of een een numerieke score kan toewijzen aan individuele leidingen. Toewijzen van een numerieke score, ImageJ openen en selecteer Plugins. Selecteer vervolgens analyseren en cel item te kiezen uit het drop down menu. Klik op Initialize en markeer Type 1 om te beginnen met het labelen van leidingen. Wanneer u klaar bent, selecteer resultaten weergeven van de ductaal graaf.
      Nota: zorg om te controleren of structuren zijn Ductaal en niet vasculaire.
    3. In ' meting instellen ' opties, Controleer ' omtrek ' en ' gebied ".
    4. Met het freehand vormgereedschap, tekent u een lijn rond elke buis op het myoepithelial compartiment (zichtbaarheid geholpen door α-SMA vlek). Selecteer ' maatregel ' en neem de omtrek en oppervlakte.
    5. Opnieuw met behulp van het freehand vormgereedschap, teken een lijn langs de apicale zijde van de ductaal epitheel binnen het interieur van de lumen. Selecteer ' maatregel ' en neem de omtrek en oppervlakte.
    6. Aftrekken de omtrek van de luminal afdeling van de omtrek van het compartiment van de myoepithelial met het oog op de omtrek van de ductaal epitheel. Aftrekken van het gebied van de luminal afdeling van het gebied van het compartiment van de myoepithelial te verkrijgen op het gebied van het ductaal epithelium.
  2. Immunohistochemistry analyse
    1. helderveld afbeeldingen uploaden naar een analytische software, zoals ImageJ of FIJI Suite.
      Opmerking: Dit protocol beschrijft de stappen voor de kleuring van de analyse met behulp van ImageJ en de plugin IHC Toolbox.
    2. Open IHC werkset in het menu Plugin. In de " Selecteer Model " keuzelijst met invoervak dat opent, selecteert u de juiste vlek (d.w.z. H-DAB, PSR, enz.). Selecteer de " kleur " optie te isoleren van de vlek. Hiermee opent u een resultaatvenster.
      Opmerking: Deze methode is geschikt als een proteïne van belang in de extracellulaire of cytosolische ruimten ligt, of afhankelijk is van het plasma-membraan. Als de proteïne van belang nucleaire is, selecteren " kernen " wordt gevraagd de plugin voor het analyseren van de afbeelding voor positief gebeitst kernen.
    3. Gebruiken de kleur Chooser Slide om te zorgen voor goede isolatie van de vlek zonder achtergrond opgenomen in of uitgesloten van de buitensporige vlek.
      Opmerking: Als de automatische modus niet kan detecteren van de vlek of niet leidt een aanvaardbare afbeeldingen tot, teken een vierkant regio van belang (ROI) over een geïdentificeerde gekleurd regio. Selecteer op het IHC Toolbox venster, " trein " direct van de plugin om de juiste doelgroep.
    4. De afbeelding omzetten in 16-bits. Ga naar Image → Type → 16bits.
    5. Drempel de afbeelding. Ga naar Image → aanpassen → Auto drempel.
    6. Stel de schaal van de meting van het beeld door een streep ROI direct boven de bar van de schaal in de afbeelding vervolgens de lengte toe te wijzen. Om de schaal lat, ga naar analyseren → schaal instellen. Ingang van het aantal pixels per de gewenste eenheid van lengte (bijvoorbeeld 120 pixels per 50 µm).
    7. Meten van de resulterende gebied en grijze waarde betekenen. Ga naar analyseren → Set metingen en het verzamelen van de meting door te klikken op analyseren → maatregel.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Vrouwelijke muizen hebben 5 paar melkklieren. Er is met name één paar van cervicale klieren (#1), twee paren van thoracale klieren (#2 en #3), één paar abdominale klieren (#4), en 1 paar inguïnale klieren (#5)(Figuur 1). Hier, we geïsoleerd van de #4 klieren zoals ze duidelijk herkenbaar zijn. In sommige gevallen werden zowel #4 en #5 klieren geïsoleerd samen zoals het onderscheid tussen de twee was moeilijk. Om te isoleren intact #4 abdomina...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In de krant, hebben we een techniek om te isoleren van de borstklieren intact muis voor downstream histologische analyses van ECM expressie en ductaal morfologie beschreven. Met betrekking tot de analyses van ductaal morfologie maakt deze methode het snelle onderzoek van ductaal het platform gebaseerd off van gebeitst histologische secties. Andere methoden van ductaal analyses, is afhankelijk van injecties van kleurstoffen om de visualisatie van de ductaal boom, methoden die technisch uitdagende en tijdrovend kunnen zijn...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

De auteurs wil erkennen April Wiles en Dr. Roger Broderson voor hulp bij het dierlijke necropsie en isolatie van de klier, respectievelijk. Financiering voor dit werk werd gesteund door de Philadelphia College of Osteopatisch Medicine centra voor chronische aandoeningen of Aging.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
LichtmicroscoopOlympusBX43
MicroscoopcameraOlympusDP73
BeeldanalysesoftwareOlympuscellSens Entry software
NIHImageJ
3.5x-R chirurgische micro loepRose Micro SolutionsVergroting naar keuze van onderzoeker
Mayo schaarMedlineDYND04035
KleurbakFisher Scientific121
KleurschaalFisher Scientific112
Coplin pottenFisher Scientific19-4
GlazenvellenFisher Scientific12-550-15Maat geschikt voor weefsel
IHC EnVision+ Kit (HRP, Muis, DAB+)DakoK400611-2
Picrosirius Rood KitAbcamAB150681
Eosine Y, alcoholischSigma-AldrichHT110132
Harris HematoxylinenSigma-AldrichHHS16
EzelserumEMD MilliporeS30
10% Neutraal Gebufferd FormalineSigma-AldrichHT501128
Xyleen, ReagenskwaliteitSigma-Aldrich214736
Ethanol, 200 proofSigma-Aldrich792780geschikt voor moleculaire biologie
Fosfaat Buffered Saline, 1xGibco10010023
Natrium CitraatFisher ScientificS279-500
Calcium CarbonaatSigma-Aldrich202932
Permanent Montage MediumDakoS1964
Eukitt's Montage MediumSigma-Aldrich3989
Fibronectin antilichaamAbcamAB23750
Tenascin-C antilichaamAbcamAB108930
Alpha Gladde Spier Actine antilichaamAbcamAB124964
Dako Envision Dual Link System HRPDakoK4065

Referenties

  1. Gao-Feng Xiong, R. X. Function of cancer cell-derived extracellular matrix in tumor progression. J Cancer Metastasis Treat. 2, 357-364 (2016).
  2. Place, A. E., Jin Huh, S., Polyak, K. The microenvironment in breast cancer progression: biology and implications for treatment. Breast Cancer Res. 13 (6), 227(2011).
  3. Provenzano, P. P., et al. Collagen reorganization at the tumor-stromal interface facilitates local invasion. BMC Med. 4 (1), 38(2006).
  4. Provenzano, P. P., et al. Collagen density promotes mammary tumor initiation and progression. BMC Med. 6, 11(2008).
  5. Cox, T. R., Erler, J. T. Remodeling and homeostasis of the extracellular matrix: implications for fibrotic diseases and cancer. Dis Model Mech. 4 (2), 165-178 (2011).
  6. Ioachim, E., et al. Immunohistochemical expression of extracellular matrix components tenascin, fibronectin, collagen type IV and laminin in breast cancer: their prognostic value and role in tumour invasion and progression. Eur J Cancer. 38 (18), 2362-2370 (2002).
  7. Barkan, D., et al. Metastatic growth from dormant cells induced by a col-I-enriched fibrotic environment. Cancer Res. 70 (14), 5706-5716 (2010).
  8. Levental, K. R., et al. Matrix crosslinking forces tumor progression by enhancing integrin signaling. Cell. 139 (5), 891-906 (2009).
  9. Wang, J. P., Hielscher, A. Fibronectin: How Its Aberrant Expression in Tumors May Improve Therapeutic Targeting. J Cancer. 8 (4), 674-682 (2017).
  10. Qian, N., et al. Prognostic significance of tumor/stromal caveolin-1 expression in breast cancer patients. Cancer Sci. 102 (8), 1590-1596 (2011).
  11. Simpkins, S. A., Hanby, A. M., Holliday, D. L., Speirs, V. Clinical and functional significance of loss of caveolin-1 expression in breast cancer-associated fibroblasts. J Pathol. 227 (4), 490-498 (2012).
  12. Witkiewicz, A. K., et al. An absence of stromal caveolin-1 expression predicts early tumor recurrence and poor clinical outcome in human breast cancers. Am J Pathol. 174 (6), 2023-2034 (2009).
  13. Macias, H., Hinck, L. Mammary gland development. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 1 (4), 533-557 (2012).
  14. Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Curr Protoc Neurosci. , Appendix 4 Appendix 4I (2009).
  15. Cannata, D., et al. Elevated circulating IGF-I promotes mammary gland development and proliferation. Endocrinology. 151 (12), 5751-5761 (2010).
  16. Thompson, C., Rahim, S., Arnold, J., Hielscher, A. Loss of caveolin-1 alters extracellular matrix protein expression and ductal architecture in murine mammary glands. PLoS One. 12 (2), 0172067(2017).
  17. Williams, C. M., Engler, A. J., Slone, R. D., Galante, L. L., Schwarzbauer, J. E. Fibronectin expression modulates mammary epithelial cell proliferation during acinar differentiation. Cancer Res. 68 (9), 3185-3192 (2008).
  18. Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. Intraductal injection for localized drug delivery to the mouse mammary gland. J Vis Exp. (80), (2013).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Trefwoorden

Isolatie van de melkklierductale architectuurimmunohistochemische kleuringeiwitexpressiehistologische analyseImageJ analysetumorbiologie
Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleid

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.