Slapende en actieve kanker cel fenotypen werden gekenmerkt met behulp van kwantitatieve fase imaging. Cel proliferatie, migratie en morfologie assays werden geïntegreerd en geanalyseerd in één eenvoudige methode.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Een Time-lapse, Label-vrije, kwantitatieve fase Imaging studie van slapende en actieve menselijke kankercellen
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De overname van het fenotype van de angiogenic is een essentieel onderdeel van de ontsnapping uit de tumor rustperiode. Hoewel verschillende klassieke in vitro testen (bijvoorbeeld, proliferatie, migratie en anderen) en in vivo modellen zijn ontwikkeld om te onderzoeken en karakteriseren van angiogenic en niet-angiogenic cel fenotypen, zijn deze methoden tijd en intensieve arbeid, en vereisen vaak dure reagentia en instrumenten, alsmede aanzienlijke deskundigheid. In een recente studie gebruikten we een nieuwe kwantitatieve fase imaging (QPI) techniek te voeren time-lapse en labeling-gratis karakterisaties voor angiogenic en niet-angiogenic menselijke Osteosarcoom KHOS cellen. Een panel van cellulaire parameters, met inbegrip van de morfologie van de cel proliferatie en motiliteit, werden kwantitatief gemeten en geanalyseerd met behulp van QPI. Deze roman en kwantitatieve benadering biedt de mogelijkheid om voortdurend en niet-gebeurt studie relevante cellulaire processen, gedrag, en kenmerken van kankercellen en andere celtypes in een eenvoudige en geïntegreerde wijze. Dit verslag beschrijft onze experimentele protocol, met inbegrip van de voorbereiding van de cel, QPI acquisitie en data-analyse.
Inleiding
Een van de vroegste controlepunten in de ontwikkeling en de vooruitgang van een solide tumor is de overname van het fenotype van de angiogenic, een kenmerk van kanker. Deze progressie omvat allerlei biochemische en moleculaire processen1,2,3. Een technische uitdaging in de studie van deze belangrijke stap in de tumor progressie is het gebrek aan tools om continu en kwantitatief karakteriseren en onderscheid maken tussen angiogenic en niet-angiogenic fenotypes van levende kankercellen op onpartijdige wijze. De traditionele testen wordt gebruikt om te onderzoeken het cellulaire....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle methoden die hier worden beschreven zijn door de Boston Children's Hospital institutionele bioveiligheid Comité goedgekeurd.
1. cel voorbereiding
-
Ontdooien KHOS-A en -N cellen
- Opwarmen kweekmedium, dat wil zeggen, de Dulbecco bewerkt Eagle medium aangevuld met 10% (vol/vol) foetaal kalfsserum (FBS) en 1% (vol/vol) penicilline/streptomycine.
- Nemen van de cryogene flesjes van cellen uit de vloeibare stikstof tank, de onderkant van de flesjes onderdompelen in warm water in een waterbad 37 ° C en zachtjes schudden de cryogene flesjes om het ontdooien te versnellen. Houd het deksel v....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Figuur 1 toont een typische cel morfologie karakterisering. Afbeeldingen worden gepresenteerd als holographs (figuur 1A-B) en 2D-afbeeldingen (Figuur 1 c-D). Optische cel diktes (berekend op basis van de brekingsindex en optische weglengte) zijn gekwantificeerd via lijn-profiel of een hele cel meting. Scatter percelen van het gebied en de dikte van KHOS-A en KHOS-N c.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
In deze studie beschrijven we een in vitro, niet-invasieve en label-vrije methode QPI met kwantitatief karakteriseren de fenotypen van het angiogenic en niet-angiogenic van menselijke Osteosarcoom cellen. Meerdere cellulaire parameters hebben gelijktijdig met deze geïntegreerde, hoge-doorvoer methode, met inbegrip van cel gebied, de dikte van de cel, cel volume, proliferatie tarief, verdubbeling van de tijd, migratie directheid, beweeglijkheid, snelheid, migratie en motiliteit is geanalyseerd.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
De auteurs mijn dankbaarheid uitspreken voor de steun van de Breast Cancer Research Foundation en de Advanced Medical Research Foundation.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| T75 flacon | Corning, NY, USA | 353136 | |
| 6-well platen | Corning, NY, USA | 3506 | |
| Dulbecco’s gemodificeerd Eagle-medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 11965092 | |
| Foetaal bovien serum (FBS) | Atlanta Biologicals, GA, USA | S11550 | |
| Penicilline Streptomycine | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 15140122 | |
| Fosfaat buffer oplossing (PBS) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 10010023 | |
| Beckman Z1 Coulter teller | Beckman Coulter, IN, USA | Z1 | |
| HoloMonitor M4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Zweden | M4 | Microscoop |
| Hololid | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Zweden | PHI 8020 | |
| HStudioM4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Zweden | HStudioM4 | Software |
Referenties
- Folkman, J. Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease. Nature Medicine. 1 (1), 27-31 (1995).
- Hanahan, D., Folkman, J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis. Cell. 86 (3), 353-364 (1996).....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
Meer artikelen verkennen
