Kwantitatieve analyse van neuronale dendritische Arborization complexiteit in Drosophila

Summary

Dit protocol is gericht op kwantitatieve analyse van complexiteit van de neuronale dendritische arborization (NDAC) in Drosophila, die kan worden gebruikt voor studies van dendritische morfogenese.

Abstract

Dendrites de vertakte projecties van een neuron worden en dendritische morfologie weerspiegelt synaptic organisatie tijdens de ontwikkeling van het zenuwstelsel. Drosophila larvale neuronale dendritische arborization (da) is een ideaal model voor het bestuderen van de morfogenese van neurale dendrites en genfunctie in de ontwikkeling van het zenuwstelsel. Er zijn vier klassen van da neuronen. Klasse IV is het meest complex met een vertakkende patroon dat betrekking heeft op bijna het hele gebied van de larvale lichaam muur. Wij hebben eerder het effect van het monddood maken van de ortholog van de Drosophila van SOX5 op klasse IV neuronale dendritische arborization complexiteit (NDAC) met behulp van vier parameters gekenmerkt: de lengte van dendrites, de oppervlakte van de dendriet dekking, de totaal aantal van takken, en de vertakkende structuur. Dit protocol stelt de workflow van NDAC kwantitatieve analyse, bestaande uit de larvale dissectie, confocal microscopie en afbeelding analysemethodes ImageJ softwarematig. Verder inzicht in da neuronale ontwikkeling en de onderliggende mechanismen zal verbetering van het inzicht van neuronale functie en aanwijzingen over de fundamentele oorzaken van neurologische en neurologische aandoeningen.

Introduction

Dendrites, die de vertakte projecties van een neuron, betrekking hebben op het veld dat van het neuron zintuiglijke en synaptische ingangen van andere neuronen^{1,2 omvat}. Dendrites zijn een belangrijk onderdeel van synapse formation en spelen een cruciale rol in de integratie van synaptic ingangen, evenals de elektrochemische stimulatie in een neuron teeltmateriaal. Dendritische arborization (da) is een proces waarmee vormen de neuronen nieuwe dendritische bomen en takken maken nieuwe synapsen. De ontwikkeling en de morfologie van de da, zoals tak dichtheid en groepering patronen, resultaat van scriptingregel b....

Protocol

1. experimentele voorbereiding

1. Voorbereiding van de volgende reagentia: Dulbecco van fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS); Triton-X-100; 0,2% PBST (PBS + 0,2% Triton X-100); 32% paraformaldehyde (PFA), verdund tot 4% wordt afgesloten vóór gebruik; silicone-elastomeer base en genezen agent; antifade montage medium (bvverlengen goud); en vingernagel Pools.
2. Voorbereiding van de volgende apparatuur: dissectie Microscoop, twee scherpe pincet en een paar van schaar voor microdissection, een aantal pinnen voor microdissection, een petrischaal voor het maken van de dissectie schotel, Microscoop dia's en coverslips, een confocal microscoop, en een....

Results

De dendrites van da neuronen waren gelabeld door co-overexpressing GFP (UAS-GFP; ppk-GAL4) in de da neurale soma en dendritische arbors voor GFP fluorescentie imaging analyse. De morfologie van da neuron dendrites was beeld door een omgekeerde confocal microscoop (Figuur 2).

De dendrites van da neuronen werden opgespoord met behulp van Fiji ImageJ software. Het bestand werd gebruikt voor het schatte.......

Discussion

Dendrites die de epidermis innervate zijn de input gebieden van neuronen en hun morphologies bepalen hoe de informatie is ontvangen en verwerkt door individuele neuronen. Ontwikkeling dendriet morfologie weerspiegelt gene modulatie van dendriet organisatie. De Drosophila larvale da neuron van het perifere zenuwstelsel is een belangrijk model voor het bestuderen van dendriet ontwikkeling omdat: 1) de functionele gelijkenis met zoogdieren^11,12; 2) vier kla.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Phosphate buffered saline(PBS)	Gibco Life Sciences	10010-023
TritonX-100	Fisher Scientific	9002-93-1
Paraformaldehyde(PFA)	Electron Microscopy Sciences	15714-S
Sylgard 184 silicone elastomer base and curing agent	Dow Corning Corportation	3097366-0516;3097358-1004
ProLong Gold Antifade Mountant	Thermo Fisher Scientific	P36931
Fingernail polish	CVS	72180
Stereo microscope	Nikon	SMZ800
Confocal microscope	Nikon	Eclipse Ti-E
Petri dish	Falcon	353001
Forceps	Dumont	11255-20
Scissors	Roboz Surgical Instrument Co	RS-5611
Insect Pins	Roboz Surgical Instrument Co	RS-6082-25
Microscope slides and cover slips	Fisher Scientific	15-188-52