Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Driedimensionale inflammatoire menselijk weefsel equivalenten van tandvlees

9.5K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/57157

⸱

3 april 2018

 ,  , 
1Department of Pharmacology, The Nippon Dental University, 2Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Nippon Dental University Hospital

In dit artikel

Samenvatting

Het doel van het protocol is het bouwen van een inflammatoire menselijke tandvlees model in vitro. Dit weefsel model cultiveert samen drie soorten menselijke cellen, HaCaT keratinocyten, gingival fibroblasten en THP-1 macrofagen, driedimensionale omstandigheden. Dit model kan worden toegepast op het onderzoek naar parodontale ziekten, zoals gingivitis en Parodontitis.

Samenvatting

Parodontale ziekten (zoals gingivitis en parodontitis) zijn de belangrijkste oorzaken van tandverlies bij volwassenen. Ontsteking in tandvlees is de fundamentele fysiopathologie van parodontale ziekten. Huidige experimentele modellen van parodontale ziekten zijn vastgesteld in verschillende soorten dieren. Echter verschilt de fysiopathologie van diermodellen van die van de mens, waardoor het moeilijk is om te analyseren van cellulaire en moleculaire mechanismen en evalueren van nieuwe geneesmiddelen voor parodontale ziekten. Hier presenteren we een gedetailleerd protocol voor de wederopbouw van menselijk weefsel van de inflammatoire equivalenten van tandvlees (iGTE) in vitro. Wij bouwen eerst menselijk weefsel equivalenten van tandvlees (GTE) door gebruik te maken van twee soorten menselijke cellen, met inbegrip van menselijke gingival fibroblasten (HGF) en menselijke huid epidermale keratinocyten (HaCaT), drie-dimensionale omstandigheden. We maken een wond-model met behulp van een weefsel perforatie om punch een gat in de GTE. Volgende, menselijke THP-1 monocyten gemengd met collageen gel worden ingespoten in het gat in de GTE. Door adimistration van 10 ng/mL phorbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) voor 72 uur, THP-1 cellen onderscheiden in macrofagen naar formulier inflammatoire foci in GTE (iGTE) (IGTE kunnen ook stumilated met 2 µg/mL lipopolysacchariden (LPS) voor 48 h tot ontsteking ). IGTE is de eerste in vitro model van inflammatoire tandvlees met behulp van menselijke cellen met een driedimensionale architectuur. IGTE weerspiegelt belangrijke pathologische veranderingen (immunocytes werkzaamheden, intracellulaire interacties tussen fibryoblasts, epitheliaale cellen, monocyten en macrofagen) in parodontale ziekten. GTE, gewonde GTE en iGTE kunnen worden gebruikt als veelzijdige tools om te studeren wondgenezing, weefselregeneratie, ontsteking, cel-cel interactie en scherm potentiële geneesmiddelen voor parodontale ziekten.

Inleiding

Parodontale ziekten zijn de belangrijkste oorzaak van tandverlies bij volwassenen. Gingivitis en Parodontitis zijn de meest voorkomende parodontale ziekten. Beide aanwezig biofilm-gemedieerde acute of chronische ontstekingsreactie in het tandvlees. Gingivitis wordt gekenmerkt door een acute ontsteking, overwegende dat parodontitis meestal als chronische ontsteking presenteert. Op het niveau van de histologische activeren bacteriële onderdelen de activering van immune cellen, zoals macrofagen, lymfocyten en plasmacellen mestcellen1,2. Deze immune cellen, met name in macrofagen, interactie met lokale cellen (inclusief gingival epitheliale cellen, fibroblasten, endotheliale cellen en botcellen) wat resulteert in de inflammatoire letsels in parodontale weefsel3,4. Experimentele modellen van parodontale ziekten zijn vastgesteld in verschillende soorten dieren, zoals ratten, hamsters, konijnen, fretten, hoektanden en primaten. Echter verschilt de fysiopathologie van diermodellen van die van de mens, waardoor het moeilijk is om te analyseren van cellulaire en moleculaire mechanismen en evalueren van nieuwe geneesmiddelen voor parodontale ziekten5. Co teelt van Parodontale bacteriën en enkelgelaagde menselijke mondelinge epitheliale cellen is gebruikt om het mechanisme van parodontale infecties6onderzoeken. Niettemin ontbreken enkelgelaagde culturen van mondelinge cellen de driedimensionale (3D) cellulaire architectuur van intact weefsel; Daarom, zij kunnen niet na te bootsen de situatie in vitro .

3D inflammatoire menselijk weefsel equivalenten van tandvlees (iGTE) zijn hier gevestigd parodontale ziekten in vitrote vertegenwoordigen. Deze 3D-model van parodontale ziekten is gevestigd in een tussenpositie tussen enkelgelaagde cel-culturen en dierlijke modellen. Drie soorten menselijke cellen, met inbegrip van HaCaT keratinocyten, gingival fibroblasten en THP-1 macrofagen, zijn samen op collageen gel worden gekweekt, en gestimuleerd door inflammatoire initiatiefnemers te bouwen iGTE. IGTE simuleert nauw de in vivo voorwaarden van celdifferentiatie, interactie van cel-cel en macrofaag activering in het tandvlees. Dit model heeft vele mogelijke toepassingen voor drug screening en testen van nieuwe farmacologische benaderingen in parodontale ziekten, alsmede voor het analyseren van cellulaire en moleculaire mechanismen in de wondgenezing, ontsteking en weefselregeneratie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Dit protocol is ontworpen om menselijke gingival weefsel equivalenten, modellen gingival wond en gingivitis modellen maken. Menselijke huid epidermale keratinocyten (HaCaT) werden vriendelijk geleverd door Professor Norbert E. Fusenig van Deutsches Krebsforschungszentrum (Heidelberg, Duitsland)7. Menselijke gingival fibroblasten (HGFs) werden geïsoleerd uit gingival weefsels volgens de eerder gepubliceerde protocollen8. Geïnformeerde toestemming vooraf was verkregen, en de studie goedgekeurd volgens de richtsnoeren van de Commissie voor ethiek, de Nippon tandheelkundige University School leven tandheelkunde in Tokyo (Authorization Number: NDU-T2012-35). Protocol stappen 1-3 moeten worden uitgevoerd in een cel cultuur kap.

1. bereiding van 3D menselijk weefsel equivalenten van tandvlees (GTE) (figuur 1A)

  1. Mix collageen type-A gel met 10% geconcentreerde MEM-alpha en 10% wederopbouw buffer (2.2 g van NaHCO3 en 4,47 g HEPES in 100 mL 0,05 N NaOH) in een buis 15 mL steriele door pipetteren. Bewaar deze oplossing gemengde collageen op ijs totdat gebruikt.
  2. 24-well cultuur inserts (porie grootte 3.0 µm) in een 24-well plaat plaatsen.
  3. Verwijder HGFs uit het oppervlak van de cultuur met behulp van 0,25% trypsine-EDTA-oplossing. Opschorten van de cellen in 10 mL gestolde voedingsbodem A (MEM-alpha + 20% FBS + 1% GlutaMAX). Cellen tellen door een Bürker-Türk cel teller.
    1. Uitpakken van de gewenste hoeveelheid cellen (1-5 x105 cellen/mL), en vervolgens gedurende 4 min op 190 x g centrifugeren.
    2. Opschorten van de cellen in de gemengde collageen-oplossing. Houd het mengsel op het ijs tot de volgende stap.
  4. 0,5 mL van het mengsel van de cel-collageen (0.5-2.5 x 105 cellen/well) in de cultuur invoegen toevoegen zonder produceren bubbels. Incubeer het mengsel gedurende 10-30 min. in een bevochtigde sfeer met 5% CO2 bij 37 ° C te coaguleren van het mengsel in een gel.
    Opmerking: Voeg het collageen-mengsel in het midden van de cultuur invoegen om ongelijke vorming van collageen gel.
  5. Voeg 1 mL gestolde voedingsbodem in de put en in de insert 0,5 mL. Incubeer de cultuur plaat voor 24u of overnachting in een bevochtigde sfeer met 5% CO2 bij 37 ° C.
  6. HaCaT cellen verwijderen uit het oppervlak van de cultuur met behulp van 0,25% trypsine-EDTA-oplossing. Opschorten van de cellen in 10 mL van medium B (DMEM + 10% FBS + 1% GlutaMAX) en de cellen tellen. Extract het benodigde aantal cellen (1-5 x 105 cellen/mL) met een precisiepipet centrifuge voor 4 min op 190 x g. schorten de cellen in middelgrote B.
  7. Verwijder het medium van de cultuur inserts, waarin het mengsel HGF-collageen door aspiratie. Voeg 0,5 mL celsuspensie HaCaT (0.5-2.5 x 105 cellen/well) op de bovenkant van het mengsel HGF-collageen. Incubeer de culturen voor 24 h of 's nachts.
    Opmerking: Op dit punt van tijd, het medium in de cultuur Nou moet middellange A, terwijl het medium in de cultuur invoegen middellange B. moet
  8. Vervang het kweekmedium met KSR medium (co kweekmedium) (MEM-alpha + 15% KnockOut Serum vervanging + 1% GlutaMAX) + 5% FBS. Voeg 1 mL gestolde voedingsbodem in de cultuur goed en in de cultuur-insert 0,5 mL. Incubeer de culturen voor 24-48 h.
  9. Het kweekmedium vervangen door KSR medium + 1% FBS. Voeg 1 mL in de cultuur goed en 0,5 mL in de cultuur invoegen. Incubeer de culturen voor 24 h of 's nachts.
  10. Vervang het kweekmedium in de cultuur goed met 0,7-1 mL KSR medium. Verwijder het medium volledig uit het invoegen van de cultuur (het oppervlak cultuur mag worden blootgesteld aan lucht). Incubeer de culturen voor 1-2 weken. Het wijzigen van het medium in de cultuur goed twee keer per week.
    Opmerking: Laat niet de middellange niveau boven het oppervlak van de cultuur (de bovenste laag opgebouwd van keratinocyten). Altijd de cultuur oppervlak droog te houden.

2. voorbereiding van de gewonde GTE (figuur 1B)

  1. Een 1-3 mm diameter weefsel perforatie voor te bereiden. Steriliseren het met een autoclaaf bij 121 ° C gedurende 20 minuten.
  2. Duw de weefsel perforatie loodrecht in GTE over 300 µm diepe en punch een gat in het weefsel te simuleren van een wond.
  3. Bij deze stap gebruikt u de gewonde GTE voor het onderzoeken van de wond genezing en weefsels regeneratie. U kunt ook vast GTE 10% formaline neutrale Bufferoplossing met histologische analyses uit te voeren.

3. voorbereiding van de inflammatoire GTE (iGTE) (figuur 1B)

  1. Cultiveren THP-1 cellen volgens de vorige verslag-9.
  2. Mix collageen type-A gel met 10% geconcentreerd RPMI 1640, 10% wederopbouw buffer (2.2 g van NaHCO3 en 4,47 g HEPES in 100 mL 0,05 N NaOH) en 10 ng/mL PMA. Bewaar deze gemengde collageen oplossing op ijs tot gebruik.
  3. Tellen 1-2 x 106 THP-1 cellen en centrifuge voor 4 min op 190 x g. schorten de cellen in 1 mL van de oplossing van de gemengde collageen. Houd het mengsel op het ijs tot de volgende stap.
  4. Voeg 10-30 µL THP-1-collageen mengsel in de gewonde gebied van GTE. Vervang het kweekmedium aan 0.7-1 mL KSR opslagmedium met 10 ng/mL PMA.
  5. Incubeer het mengsel in een bevochtigde sfeer met 5% CO2 bij 37 ° C gedurende 72 uur.
  6. Gebruik van het model voor het onderzoeken van tandvleesontsteking of parodontitis (bijvoorbeeld het toevoegen van potentiële anti-inflammatoire geneeskunde aan iGTE om te zien de gevolgen ervan voor de cytokine versie10). U kunt ook weglaten 72 h PMA-behandeling, voeg 2 µg/mL LPS in de cultuur, en Incubeer het weefsel in een bevochtigde sfeer met 5% CO2 bij 37 ° C gedurende 48 h11,12.

4. fixatie en hele Mount immunokleuring van GTE en iGTE culturen

  1. Fixatie van de culturen.
    1. Verwijder het kweekmedium uit de plaat 24-well. Wassen van de weefsels 2 keer met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS).
    2. Voeg 1 mL van de neutrale bufferoplossing 10% formaline de invoegen en 1 mL ook aan de cultuur. Laat de plaat 24-well in een koelkast bij 4 ° C's nachts.
    3. De volgende dag 10% formaline neutrale bufferoplossing te verwijderen.
    4. Voor hele mount immunokleuring, de weefsels 3 - 4 keer met PBS na fixatie te wassen.
    5. Voor de haematoxyline en eosine (H & E) kleuring en regelmatige immunokleuring, gaat u verder met uitdroging, paraffine insluiten en segmenteren.
      Opmerking: Voor de hele berg immunokleuring, deze stap kan worden weggelaten.
  2. Hele mount immunokleuring
    Opmerking: Dit protocol werd gewijzigd van in verwijzing 13.
    1. Wassen van de weefsels 3 x in PBS 0,5 – 1% Triton, 10-30 min. telkens.
    2. Incubeer de weefsels tweemaal voor 30 min in de blokkeerbuffer (PBS 1% Triton + 10% BSA), bij kamertemperatuur.
    3. Wassen van de weefsels 2 × in de blokkeerbuffer, 5 – 10 min telkens.
    4. 50 µL van primair antilichaam oplossing op de vereiste verdunning/concentratie aan de inserts toevoegen. Gebruik een dun plastic cling-film wilt laten teruglopen van de inserts Voorkom uitdrogen van het weefsel.
    5. Het weefsel Incubeer gedurende 1 tot 2 dagen bij 4 ° C.
    6. Wassen de weefsels 3 keer, 1% gedurende 30 min. in PBS Triton + 10% BSA. Wassen weer 3 keer, gedurende 5 min. in PBS 1% Triton.
    7. Voeg 50 µL van secundair antilichaam in blokkeerbuffer (PBS 1% Triton + 10% BSA) en 5 µL van Hoechst 33342 oplossing (NucBlue Live cel vlek) voor elke toevoeging. Gebruik een dun plastic cling-film wilt laten teruglopen van de inserts Voorkom uitdrogen van het weefsel.
    8. Incubeer gedurende 1 tot 2 dagen bij 4 ° C. Wikkel de 24-well-plaat in een natte papieren handdoek, en zet het dan in een plastic verpakking moet worden gebruikt tijdens de incubatie.
    9. Wassen van de weefsels 3 keer, voor 10 min in PBS 1% triton
    10. Gebruik een scherpe naald te snijden het membraan van het donormateriaal cultuur te verkrijgen van het weefsel. Plaats het membraan in een dia verschijnt.
      Opmerking: Het weefsel moet worden op het membraan.
    11. Voeg 2-3 druppels van fluorescentie mount medium. Betrekking hebben op het weefsel met een cover glas en bewaren bij 4 ° C in het donker tot analyse.
    12. Weefsels met een confocale laser scanning microscopie (LSM) bekijken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

HaCaT cellen weergegeven typische Keratinocyt morfologie onder fase contrast microscopische observatie (figuur 2A). Scanner elektronen microscopische (SEM) beelden bleek dat de HaCaT cel oppervlakken werden gedekt door veel microvilli. Intercellulaire verbindingen tussen HaCaT cellen werden bemiddeld door membraanscheidingsprocessen (figuur 2B). HaCaT cellen uitgedrukt gingival epitheel marker K8/18/EG14, ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Dit protocol is gebaseerd op de methoden van het creëren van gingival weefsel equivalenten en onderhuids vetweefsel equivalenten beschreven door vorige verslagen8,-21,22. Hoewel dit een eenvoudige en gemakkelijke methode is, vereist enkele stappen speciale aandacht. Het mengsel van collageen moet bijvoorbeeld op ijs worden bewaard tot gebruik om te voorkomen dat de formatie van de gel in de oplossing. Bij het toevoegen van het m...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren geen belangenconflict.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gedeeltelijk ondersteund door de Japan Society voor de promotie van wetenschap (JSPS) Grant-in-Aid voor wetenschappelijkonderzoek (26861689 en 17 K 11813). De auteurs bedank Mr. Nathaniel Green voor proeflezen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Collagen type I-ANitta Gelatin IncVoor het maken van dermis van GTE
MEM-alphaThermo Fisher Scientific11900073Celcultuurmedium
Cell Culture Insert (voor 24-well plaat), poriegrootte 3,0 μmCorning, Inc.353096Voor weefselcultuur
GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061Celcultuurreagens
DMEMThermo Fisher Scientific31600034Celcultuurmedium
KnockOut Serum ReplacementThermo Fisher Scientific10828028Celcultuurreagens
WeefselponsShibata system service co., LTDSP-703Voor het ponsen van gaten in GTE
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific31800022Celcultuurmedium
BSASigma-AldrichA3294Voor immunokleuring
Hoechst 33342 (NucBlue Live Cell stain)Thermo Fisher ScientificR37605Voor het labelen van kernen
Fluorescentie montagemediumDakoVoor het monteren van monsters na immunokleuring
Anti-Cytokeratin 8+18 antilichaam [5D3]abcamab17139Voor het identificeren van epitheel
Scanende elektronenmicroscoopHitachi, Ltd.HITACHI S-4000Voor het observeren van de oppervlaktetopografie en samenstelling van monsters
Confocale laserscanningmicroscopieLSM 700; Carl Zeiss Microscopy Co., Ltd.LSM 700Voor het observeren van de immunofluorescentiekleuring van monsters
Anti-Cytokeratin 19 antilichaamabcamab52625Voor het identificeren van epitheel
Anti-vimentin antilichaamabcamab92547Voor het identificeren van fibroblasten en geactiveerde macrofagen
Anti-TE-7 antilichaamMilliporeCBL271Voor het identificeren van fibroblasten in de dermis
Anti-CD68 antilichaamSigma-AldrichSAB2700244Voor het identificeren van macrofagen
Human CD14 AntilichaamR&D SystemsMAB3832-SPVoor het identificeren van macrofagen
Alexa Fluor 594-geconjugeerd secundair geitenanti-konijn antilichaamThermo Fisher ScientificA11012Voor immunofluorescentiekleuring
Alexa Fluor 488-geconjugeerd secundair geitenanti-muis antilichaamThermo Fisher ScientificA11001Voor immunofluorescentiekleuring
EVOS FL CelbeeldvormingssysteemThermo Fisher ScientificVoor het observeren van de immunofluorescentiekleuring van het monster
THP-1 cellenRiken BRC cellbankRCB1189Voor het maken van iGTE
PMA(Phorbol 12-myristaat 13-acetaat)Sigma-AldrichP8139Voor het differentiëren van THP-1 cellen

Referenties

  1. Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease. Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).
  2. Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage. Frontiers in Immunology. 3, 118(2012).
  3. Koh, T. J., DiPietro, L. A. Inflammation and wound healing: The role of the macrophage. Expert reviews in molecular medicine. 13, e23(2011).
  4. Mescher, A. L. Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration. Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).
  5. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental Animal Models in Periodontology: A Review. The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).
  6. Han, Y. W., et al. Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells. Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).
  7. Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).
  8. Xiao, L., Miwa, N. Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment. Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).
  9. Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  10. Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease. J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).
  11. Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli. Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).
  12. Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages. BMC Immunol. 8, 1(2007).
  13. Abcam. Whole mount fluorescent immunohistochemistry. , Available from: http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/whole_mount_fluorescent_ihc.pdf (2017).
  14. Shetty, S., Gokul, S. Keratinization and its disorders. Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).
  15. Klinge, B., Matsson, L., Attström, R. Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study. J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).
  16. Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease. J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).
  17. Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).
  18. Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).
  19. Holness, C. L., Simmons, D. L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins. Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).
  20. Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. Vimentin is secreted by activated macrophages. Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).
  21. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system. Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).
  22. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent. Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Ontstoken gingiva-weefselequivalentenhumane gingivale fibroblastenHaCaT-keratinocytenTHP-1-monocyteninjectie van collageengelweefselpons-wondmodelPMA-differentiatieLPS-stimulatieH&E-kleuringimmunofluorescentiekleuring
Driedimensionale inflammatoire menselijk weefsel equivalenten van tandvlees
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.