Methodenartikel

Microdissection van primaire renale weefsel segmenten en integratie met nieuwe steiger-vrije constructie technologie

DOI:

10.3791/57358

⸱

27 maart 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Surgery, Medical University of South Carolina

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weefsel-engineered renale constructies bieden een oplossing voor het tekort aan organen en de schadelijke effecten van dialyse. Hier beschrijven we een protocol bij micro ontleden lymfkliertest nieren voor isolatie van cortico-Wallenberg segmenten. Deze segmenten zijn steiger-vrije cellulaire constructies, vorming van renale organoids ingeplant.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Niertransplantatie is nu een reguliere therapie voor einde-fase nierziekte. Met ongeveer 96.000 mensen op de wachtlijst en slechts een kwart van deze patiënten bereiken van transplantatie, is er echter een grote behoefte voor alternatieven voor degenen met falende organen. Ter vermindering van de schadelijke gevolgen van dialyse samen met de totale gezondheidskosten die het oploopt, is actief onderzoek voortdurend op zoek naar alternatieve oplossingen voor orgaantransplantatie. Implanteerbare weefsel-engineered renale cellulaire constructies zijn een dergelijke haalbare benadering ter vervanging van verloren renale functionaliteit. Beschreven voor de eerste keer, hier is de microdissection van lymfkliertest nieren voor isolatie van levende corticomedullary renale segmenten. Deze segmenten zijn geschikt voor snelle integratie binnen steiger-vrije endotheel-fibroblast constructies waarmee snelle verbinding met host therapieën eenmaal geïmplanteerd kan. Volwassen muis nieren waren verkregen van levende donoren, gevolgd door de stereoscoop microdissection verkrijgen van renale segmenten 200-300 µm in diameter. Meerdere renale constructies werden vervaardigd gebruikend primaire renale segmenten geoogst van slechts één nier. Deze methode geeft aan een procedure die functionele nier weefsel van organen die anders zouden worden weggegooid kon redden.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chronische nierziekten (CKD) is één van de huidige grote volksgezondheid uitdagingen wereldwijd1. De prevalentie van Cementovenstof in de Verenigde Staten is meer dan 14% van de totale bevolking, met meer dan 600.000 Amerikanen lijden aan de meest ernstige vorm, eind-fase nierziekte (ESRD)2. De huidige behandelingsopties beschikbaar voor mensen met ESRD omvatten dialyse en de nieren transplantatie. Hoewel ongeveer 25.000 patiënten ondergaan niertransplantatie elk jaar, zijn een groot aantal patiënten toegevoegd jaarlijks leidt tot een grote ongelijkheid tussen degenen die wachten op een levensreddende orgel en die ontvan....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle dierlijke chirurgische procedures die hieronder worden beschreven zijn door de institutionele Animal Care en gebruiken Comité (IACUC) op de medische universiteit van South Carolina voorafgaand aan elk dier chirurgie of het gebruik van alle dierlijke weefsels goedgekeurd.

1. lymfkliertest Nefrectomie

  1. Don een chirurgisch masker en bouffant kap voor het minimaliseren van het risico van besmetting. Steriliteit handhaven tijdens de set-up van het chirurgische gebied.
    1. Plaats niet-fenêtré afdeklakens op de operatietafel.
    2. Open de verpakking van gesteriliseerde met autoclaaf instrumenten op de steriele gordijnen. De....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het protocol beschreven produceert ongeveer 50 renale segmenten per piramidale 2 mm3 sectie van renale weefsel. De renale segmenten die zijn verwerkt en beeld hebben buisvormige en glomerulaire componenten in verschillende verhoudingen (Zie Figuur 2). De intact segmenten werden onderworpen aan een test om te bepalen van de levensvatbaarheid van de verschillende segmenten eenmaal elke 24 uur per dag voor drie dagen. Groen-fluorescerende calceïne-AM .......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Methoden die worden gebruikt om ingenieur levend renale weefsel constructies sterk uiteen ten aanzien van zowel het type van cellen en biomaterialen gebruikt, en in veel gevallen lopen zijn verouderd of niet goed gekarakteriseerd in de literatuur7. Terwijl velen maken gebruik van benaderingen van de cel van de stam of Recapitulerend afzonderlijke onderdelen van de renale architectuur in isolement, het vooruitzicht van kunstmatig het herscheppen van een gehele orgaan met meer dan 26 verschillende g.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NIH institutionele postdoctorale opleiding Grant, NIH-HL-007260

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Non-fenestrated Sterile FieldBusse Hospital Disposables696
Fenestrated Sterile FieldBusse Hospital Disposables697
Halsted Mosquito Forceps 5 CurvedMiltexMil-7-4"Hemostat" in manuscript
Extra Fine Graefe Forceps, Curved with teethFine Science Tools11155-10Fine forceps met tanden
Extra Fine Graefe Forceps, Serrated (without teeth)Fine Science Tools11152-10Fijne pincet zonder tanden
Fine Scissors - Tungsten CarbideFine Science Tools14568-09Iris schaar
Betadine Surgical Scrub with Pump, Povidone-iodine 7.5%Purdue Products L.P.67618-151-17
Sterile Cotton Gauze Pad (4" x 4")Fisher Healthcare22-415-469
Dulbecco's Phosphate Buffered SolutionCorning21-030-CV
Penicillin/Streptomycin Solution, 100XCorning30-002-Cl
Isoflurane, USPManufacturer: Piramal, Distributor: McKesson2254845
Nair Hair RemoverNair22600-23307Haarverwijderingscrème in tekst
200 Proof EthanolDecon Laboratories2705Verdund tot 70% Ethanol-oplossing
BioLite 60mm Tissue Culture DishThemo-Scientific130181
Press'n SealGlad12587-70441Gebruikt voor Stereoscoop
SZX16 Stereo MicroscopeOlympusSZX16
Fiber Optic IlluminatorCole Parmer41720-20
Self-Supporting Dual-Light Pipe, 23" L GooseneckCole ParmerEW-41720-60
Scalpel Handle #3MiltexMil-4-7
Sterile Rib-Back Carbon Steel Blade, Blade Size 15Bard-Parker371115
31 1/2 Gauge NeedleThermoFisher Scientific14-826FBecton Dickinson 305106
Dulbecco's Modified Eagle's MediumCorning10-017-CV
Fetal Select 100% Bovine SerumAtlas BiologicalsFS-0500-AD
Normal Human Dermal FibroblastsLonzaCC-2511
Human Adipose Microvascular Endothelial CellsSciencell Research Laboratories7200
Surgical Loupes (2.5x)Orascoptic(N/A) Custom Order
FGM-2 (Fibroblast Basal Medium with FGM-2 SingleQuots Added)LonzaCC-3131, CC-4126
EGM-2 (Endothelial Basal Medium with EGM-2 SingleQuots Added)LonzaCC-3156, CC-4176
Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit for Mammalian CellsThermoFisher ScientificL3224
Anti-Cytokeratin-18 AntibodyAbcamab668
Goat anti-Mouse IgG, Alexa Fluor 633ThermoFisher ScientificA-21052
Goat anti-Rabbit IgG, Alexa Fluor 546ThermoFisher ScientificA-11010
Anti-Von Willebrand Factor AntibodyAbcamab6994
Albumin, Fluorescein isothiocyanate ConjugateSigma AldrichA9771-50MG
Hoescht 33342BD Pharmingen561908
Background BusterInnovex BiosciencesNB306

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jha, V., et al. Chronic kidney disease: global dimension and perspectives. Lancet. 382 (9888), London, England. 260-272 (2013).
  2. 2016 USRDS Annual Data Report: Epidemiology of Kidney Disease in the United States. U.S.R.D. , Available from: https://www.usrds.org/2016/download/v2_ESRD_16.pdf (2016).
  3. Hart, A., et al.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Microdissectie van nierweefselsteigerloze constructenprimaire niersegmentenisolatie van muisniertoepassingen van weefselengineeringdissectie met stereoscoopendotheel fibroblastconstructenlevensvatbaarheidsassayalbumine reabsorptievon Willebrand factor

Gerelateerde artikelen