Een efficiënte Sample voorbereiding methode om koolhydraten Ion signalen in Laser Matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie massaspectrometrie

Summary

Een protocol voor het verbeteren van koolhydraten ion signalen in de Spectrometrie van de massa van de MALDI door hervorming kristallijnen structuren tijdens preparatietechnieken voor monster wordt aangetoond.

Abstract

Bereiding van de monsters is een kritische proces in de Spectrometrie van de massa (MS) analyse van koolhydraten. Hoewel laser matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie (MALDI) MS is de methode van keuze in koolhydraten analyse, arme ion signaal en gegevens reproduceerbaarheid van koolhydraten monsters blijven ernstige problemen. Kwantitatieve analyse van koolhydraten is een effectieve analytische protocol bieden superieure datakwaliteit noodzakelijk. Deze video toont monster voorbereiding protocollen ter verbetering van de signaalsterkte en het minimaliseren van gegevens variatie van koolhydraten in MALDI-MS. Na het drogen en kristallisatie van monster druppels, wordt de morfologie van het kristal hervormd door methanol vóór massaspectrometrische analyse. De verhoging in koolhydraten signaal wordt onderzocht met MALDI imaging massaspectrometrie (IMS). Experimentele resultaten tonen aan dat de crystal Reformatie kristallijnen structuren past en koolhydraten analyten herverdeelt. In vergelijking met de gedroogde druppel voorbereiding methode in conventionele MALDI-MS, hervorming koolhydraten crystal morphologies met methanol shows significant beter signaal intensiteit, ion afbeelding distributie en stabiliteit van de gegevens. Aangezien de protocollen blijkt hierin geen veranderingen in de samenstelling van de steekproef, zijn ze over het algemeen van toepassing op verschillende koolhydraten en matrices.

Introduction

Koolhydraten-analyse is een belangrijke en uitdagende onderwerp. Koolhydraten en daarvan afgeleide producten spelen een belangrijke rol in levende organismen^1,2,3. Deze moleculen hebben gecompliceerd structuren en zijn vatbaar voor ontleden. Velen van hen kunnen niet duidelijk worden gekenmerkt door problemen in scheiding en opsporing. Hoewel laser matrix-bijgewoonde (MALDI) desorptie/ionisatie massaspectrometrie (MS) is toegepast op de analyse van een breed scala van biomoleculen, vanwege haar gevoeligheid en begrijpelijke resultaten⁴, blijft analyse ....

Protocol

1. steekproef plaat voorbehandeling

1. Reiniging van de monster-plaat
   1. Draag nitril handschoenen om verontreiniging van de steekproef plaat tijdens het reinigen te voorkomen.
   2. Handwas de monster-plaat met 100.0 mL schoonmaakmiddel (1.0 mg/mL).
   3. Handwas de monster-plaat met gedistilleerd-gedeïoniseerd water (DDW).
   4. Spoel het oppervlak van de plaat monster met 30.0 mL MeOH.
   5. Zet de plaat monster in een bekerglas van 600 mL en vul met DDW totdat de monster plaat is volledig ondergedompeld in water.
   6. Zet het bekerglas in een ultrasoon bad (Zie tabel van materialen<....

Results

Representatieve SEM beelden van SLe^A vermengd met DHB bereid met behulp van DD en herkristallisatie methoden zijn afgebeeld in Figuur 1. Een typische morfologie van DHB is zoals opgesteld door de DD methode grote naald-vormige kristallen op de rand en de fijne kristallijnen structuren in het centrum van monster vlekken. De typische lengtes van dergelijke kristallen naald-vormige zijn ~ 100 µm. Na herkristallisatie door MeOH heeft het monster een gr.......

Discussion

Voorbeeld heterogeniteit is dat een cruciaal probleem in MALDI-MS. DD is het meest gebruikte monster voorbereiding methode, maar de resulterende kristallen zijn zeer heterogeen. Dergelijke monsters blijkt slecht schot-voor-schot en monster-naar-sample signaal reproduceerbaarheid. Daarom is zoeken naar "sweet spots' in monster gebieden tijdens data-acquisitie een gemeenschappelijke procedure in sommige experimenten. Dergelijke heterogene monsters zijn ongeschikt voor de kwantificering van routinematige analyses.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagent
Detergent powder	Alconox	242985
Methanol	Merck	106009
Acetonitrile	Merck	100003
2,5-dihydroxybenzoic acid (DHB)	Alfa Aesar	A11459
sialyl-lewis A (SLeA)	Sigma-Aldrich	S1782
Maltoheptaose	Sigma-Aldrich	M7753
Pipette tips	Mettler Toledo	17005091
Microcentrifuge tube	Axygen	MCT-150-C
Equipment
Milli-Q water purification system	Millipore	ZMQS6VFT1
Powder-free nitrile gloves	Microflex	SU-690
600 mL beaker	Duran	2110648
Ultrasonic cleaner	Delta	DC300H
Hygrometer	Wisewind	5330
Nitrogen gas flowmeter	Dwyer	RMA-6-SSV
K-type thermocouples	Digitron	311-1670
Vortex mixer	Scientific Industries	SI-0236
Mini centrifuge	Select BioProducts	Force Mini
Pipette	Rainin	pipet-lite XLS
Stereomicroscope	Olympus	SZX16
Temperature controllable drying chamber	This lab
Ultraflex II TOF/TOF mass spectrometer	Bruker Daltonics
MTP 384 target plate polished steel BC	Bruker Daltonics	8280781
Flexcontrol Version 3.4	Bruker Daltonics		Control software
Fleximaging Version 2.1	Bruker Daltonics		Imaging software
Flexanalysis Version 3.4	Bruker Daltonics		Analysis software