Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Ernstige Burn schade in een varkens-Model voor de evaluatie van de klinische Dressing

9.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/57942

⸱

6 november 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

In dit artikel

Samenvatting

Nauw mimic de wijze van brandwonden vereist het samenspel tussen klinische observatie en onderzoek in diermodellen. In deze studie, werd een model van de varkens van ernstige branden schade opgericht om te beoordelen van een experimentele dressing in fysiologische en pathofysiologische instellingen.

Samenvatting

Wondgenezing is een dynamische herstelproces en het meest complexe biologische proces in het menselijk leven. In reactie op schade branden, wijzigingen in de biologische wegen afbreuk doen aan de ontsteking reactie, resulterend in een vertraagde wondgenezing. Verminderde wondgenezing optreedt vaak bij patiënten met diabetes leidt tot ongunstige uitkomsten zoals amputatie. Vandaar, dressings hebben gunstig effect bij de bevordering van branden wond reparatie nodig zijn. Studies over branden wond behandeling zijn echter beperkt wegens gebrek aan goede diermodellen. Onze vorige studie aangetoond wondgenezing prestaties in rat en varkens modellen met behulp van een minimaal invasieve operatietechniek. Deze studie was gericht op het aantonen van een model van de varkens van ernstige branden schade die wond contractie elimineert en meer nauw benadert de menselijke processen van re epithelialization en de vorming van nieuw weefsel. Dit protocol biedt een gedetailleerde procedure voor het maken van consistente brandwonden en behandeling van de wond-genezing prestaties onder de behandeling van een experimentele dressing in een varkens-model. Zes brandwonden zijn symmetrisch gemaakt op het dorsum, die waren bedekt met een klinische dressing bestaat uit vier lagen: een contact binnenlaag van experimentele materialen, een tussenliggende binnenlaag van waterdichte film, een tussenliggende buitenlaag van gaas, en een buitenste laag van hechtende pleister. Na de voltooiing van experimenten, werden wond sluiting, wond gebied, en Vancouver litteken schaal-score onderzocht. De monsters van de huid van elk dier na offer gereseceerd histologisch waren voorbereid en gekleurd met haematoxyline en eosine-kleuring. Antibacteriële activiteit van elke dressing in het kader van de wondgenezing werd ook onderzocht. De toepassing van de klinische dressing op de wonden in varkens model bootst de biologische processen van menselijke wond genezing met betrekking tot de processen van epithelialization, cellulaire proliferatie en angiogenese. Daarom biedt deze varkens-objectmodel een easy-to-learn, kosteneffectieve en robuuste methode voor de beoordeling van het effect van klinische dressings in ernstige branden letsel.

Inleiding

Een blessure branden het inflammatoire proces initieert en induceert complexe pathologische effecten, die talrijke lichaamsfuncties direct na een ongeluk beïnvloeden, wat resulteert in een negatieve impact op de levenskwaliteit van de patiënten. Verminderde wondgenezing veroorzaakt significante morbiditeit en mortaliteit bij patiënten met diabetes mellitus1,2. De meeste patiënten met brandwonden ervaren pijn tijdens branden wond debridement, die bekend als een ondraaglijke proces ondanks het gebruik van krachtige opioïden analgetica3 staat.

In tegenstelling tot andere zoogdieren delen varkens verschillende anatomische en fysiologische kenmerken bij de mens met betrekking tot het proces van angiogenese, epithelialization en cellulaire proliferatie. Dit maakt varkens een potentieel beter model voor bepaalde procedures en studies, en ze worden vaak gebruikt in latere studies die aangetoond veelbelovende resultaten bij muizen. Deze functies hebben geleid tot het toenemende gebruik van varkens als een belangrijke soort in de preklinische testen. Onlangs, een snelle toename van het biomedisch onderzoek met respect tot cardiovasculaire, urine, Integumentair en spijsvertering geconstateerd4,5,6. Deze studie heeft tot doel om aan te tonen van een model van de varkens van ernstige branden letsel dat voorkomt dat de samentrekking van de wond en zorgt voor een nauwere onderlinge aanpassing van de menselijke wond helende processen en de vorming van nieuw weefsel. Zes brandwonden zijn symmetrisch gemaakt op het dorsum, drie aan weerskanten van de wervelkolom van de varkens. Anexperimental dressing werd vervolgens onderzocht in een model van de varkens van ernstige branden verwonding, dat kan worden aangepast om te repliceren menselijke wondgenezing (Figuur 1). De wonden waren bedekt met een klinische dressing, die is samengesteld uit vier lagen: een contact binnenlaag van experimentele materialen, een tussenliggende binnenlaag van waterdichte film, een tussenliggende buitenlaag van gaas en een buitenste laag van hechtende pleister. Een waterdichte film houdt de omgeving van de wond vochtig terwijl het voorkomen van bacteriële infectie en waardoor gassen te doordringen van de dressing. De tussenliggende buitenlaag van gaas werd toegepast op de waterdichte films en beveiligd door een buitenste laag van hechtende pleister. Bij de voltooiing van experimenten, werden wond sluiting, wond gebied, en Vancouver litteken schaal (VSS) score onderzocht. De monsters van de huid van elk dier na offer gereseceerd histologisch waren voorbereid en gekleurd met haematoxyline en eosine (HE) kleuring. Antibacteriële activiteit van elke dressing in het kader van de wondgenezing werd ook onderzocht in dit model. Onze vorige studie heeft aangetoond wondgenezing prestaties in rat en varkens model met behulp van een minimaal invasieve operatietechniek7. Aangezien er dat zes branden wonden op het dorsum binnen elke varkens waren, was elke experimentele dressing getest en geëvalueerd in alle posities te minimaliseren bias aan het genezingsproces gewikkeld in verschillende plekken op het varkens dorsum gerelateerde. Daarom is het model van de varkens van ernstige branden letsel vastgesteld in deze studie biedt een nieuwe aanpak voor de evaluatie van klinische dressings en vergemakkelijkt de ontwikkeling van een nieuwe behandeling voor schade van de branden. Deze studie biedt cruciale hulpmiddelen om de pathofysiologie van branden wondgenezing bloot te leggen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Procedures met betrekking tot dierlijke onderwerpen hebben goedgekeurd door de Commissie van de zorg van het dier op National Defense Medical Center, Taiwan (R.O.C). Deze studie werd uitgevoerd in het laboratorium dier Center op de National Defense Medical Center. Varkens met een gewicht van tussen 20 en 25 kg heeft met succes zijn geïnstrumenteerd met behulp van dit protocol.

1. aanpassing van de dieren aan menselijke behandeling

  1. Na aankomst in de faciliteit, huis van de dieren overrijden maar laat ze met elkaar omgaan.
  2. Bieden de dieren ad libitum toegang tot voedsel en water.
  3. Acclimatiseren varkens menselijke behandeling en vervoer van het dier faciliteit naar het experimentele laboratorium door het hanteren van het dier ten minste eenmaal per dag gedurende één week.
  4. Snel het dier voor ten minste 12 uur voor de operatie ter voorkoming van misselijkheid, braken en aspiratie van maag vloeistoffen.

2. sedatie

  1. Vóór de oprichting van branden wond, verdoven dieren via een intraveneuze injectie met Zoletil 50 (25 mg/kg).

3. intubatie en ventilatie

  1. Plaats het dier op een tabel en/of trolley in sternale positie.
  2. Open de mond van het dier met een mondelinge strooier.
  3. In geval van onvoldoende ontspanning van de kaken of aanwezigheid van het slikken van reflexen, die belemmeren intubatie, masker het zwijn met Isofluraan voor het opwekken van sedatie.
  4. Controleren van bloeddruk, hartslag en lichaamstemperatuur door fysiologische signaal monitor tijdens de operatie om mogelijke complicaties te voorkomen.

4. anesthesie

  1. Induceren en onderhouden van anesthesie; bij voorkeur anesthetize het dier via een intramusculaire injectie van tiletamine en zolazepam (25 mg / kg + 25 mg / kg).
  2. Intubate van het dier met de Endotracheale tube wanneer spier ontspanning, gekenmerkt door verlies van kaak Toon en ooglidreflex reflexed, werd waargenomen.
  3. Houden alle varkens in een verdoving staat bij de instelling van een vaporizer van 0.5-2.5% (v/v) Isofluraan tot het einde van de operatie.
  4. Onderzoeken de diepte van de verdoving door te testen pijn reflexen met een achterpoot teen snuifje voor de operatie. Indien nodig, toevoegen van extra verdoving of wacht een paar minuten. Controleer pijn reflexen regelmatig gedurende de operatie.

5. sterilisatie van de chirurgische Site

  1. Scheren en het reinigen van de huid van het dier over een oppervlakte van ongeveer 25 cm breedte van de wervelkolom helemaal tot aan de oksel aan beide zijden.
  2. Scrub de huid gehydrateerd met Povidon-jodium scrub (75 mg/mL) voor ongeveer 5 min.
  3. Verwijder de zeep Povidon-jodium uit de huid met behulp van natte steriele gauzes.
  4. Het steriliseren van de huid met Povidon-jodium lotion (100 mg/mL).
  5. Dekking van het dier met steriele afdeklakens bacteriële overdracht en besmetting van de chirurgische site achteraf terug te dringen.

6. branden wond creatie

  1. Gebruik een pen chirurgische markering ter gelegenheid van het centrum van zes brandwonden symmetrisch op het dorsum van het varken. Zorg ervoor dat de afstand tussen elke wond branden ten minste groter is dan de straal van de wond (figuur 1A).
  2. Vul een gemodificeerde soldeerbout met 50 mL glycerine en invoegen van een elektronische thermometer erin om de temperatuur te bewaken. Het heet strijkijzer beschikt over een vlak gebied van ongeveer 9 cm2 (figuur 1B).
  3. Opwarmen van de ijzer tot 137-139 ° C met een warmhoudplaat (Figuur 1 c).
  4. Zes uniforme brandwonden maken door het plaatsen van het ijzer op het gemarkeerde gebied zonder toepassing van kracht gedurende 30 seconden (Figuur 1 c).
  5. Wassen van de brandwonden met zoutoplossing 0,9% (Figuur 1 d).
  6. Meten van de afmetingen van de wond en het opnemen van de wond door photomicrography (figuur 1E).

7. bereiding van Dressings

  1. Betrekking hebben op elke wond met de contact binnenlaag van een vier-laags klinische dressing via direct contact. Voor deze laag, gebruikt u de CAPS-bevattende dressing of alternatieve materialen (figuur 1F).
  2. Een waterdichte film op de klinische dressing om te dienen als een barrière tegen bacteriële penetratie (figuur 1F) van toepassing.
  3. Betrekking hebben op elke wond met een gaas (0,5 cm dik) en herstellen met de papieren rompslomp om te dienen als de midden laag van de dressing (figuur 1G).
  4. Beveiligen van de gaas met een buitenste laag van hechtende pleister. Uitbreiden van deze laag naar de romp om te voorkomen dat de verplaatsing van de dressing (Figuur 1 H-1J).

8. na branden zorg en meting

  1. Injecteer de varkens met buprenorfine (0,1 mg/kg, IM) voor pijnbehandeling voor elke 8-12 h, beginnen vóór terugwinning van anesthesie, gedurende één week om potentiële pijn te verminderen.
  2. Toestaan dat de vrije toegang van varken te voeden en water.
  3. Wijzigen van de klinische dressings om de 2 dagen voor de eerste 10 dagen en vervolgens tweemaal per week voor de 6 weken durende studie.
  4. Schoon en meten van wonden voordat het opnieuw toepassen van klinische dressings. Verdoving tijdens dressing wijzigingen beheren.
  5. Opnemen van de wond door photomicrography voor vergelijking van wond genezing tarief om de 2 dagen voor de eerste 10 dagen en vervolgens tweemaal per week voor de 6 weken durende studie.
  6. Bereken de wond opnieuw epithelialization of samentrekking als het percentage van de oorspronkelijke grootte van de wond volgens een eerder beschreven methode. De analyse van de wond sluiting werd uitgevoerd in een dubbel-blind wijze.
  7. Meten van het litteken van de branden met behulp van de VSS, die uit vier variabelen bestaat: vasculariteit, hoogte (dikte), plooibaarheid en pigmentatie op na branden dagen 0, 7, 21 en 42. Elke variabele heeft vier tot zes mogelijke scores. De totaal score varieert van 0 tot en met 14, waarbij een score van 0 geeft normale huid.

9. bacteriële groei experimenten van de weefsels na branden

  1. Swab het wond voor het antibacteriële testen op na branden dagen 0, 7, 21 en 42.
  2. Plaats het staafje in 100 mL steriele zoutoplossing 0,9% en zachtjes vortex tot een homogene suspensie.
  3. Serieel verdunnen (10−1–10−5) het homogenaat en plaat 100 μl van elke verdunning in selectieve en opvangfaciliteiten media, respectievelijk.
  4. Incubeer alle verdunningen onder aërobe omstandigheden bij 37 ° C gedurende 24-72 uur.
  5. Plaat drievoudige aliquots van 10 μL van alle verdunningen op bloed agarplaat aangevuld met 5% schapen bloed te isoleren van aërobe gram-positieve organismen.
  6. Incubeer het monster door verspreiden of het gieten van het monster gelijkmatig op het oppervlak van een agarplaat 's nachts voor het bepalen van het aantal kolonie-vormende eenheden (CFUs).
  7. Lees de platen na een incubatieperiode van de overnachting. De schapen bloed agarplaat omkeren en de onderkant van de schotel verdelen in vier gelijke kwadranten met behulp van een markering en kleine liniaal.
  8. Plaats de plaat op het podium van een Microscoop dissectie en tellen van de kolonies op elke plaat. Per definitie moet een kolonie een minimum van 300 kve te worden geïnventariseerd.
  9. Tellen de bacteriële kolonies in elk van de drie wordt gerepliceerd. Bereken de gemiddelde waarde van de drie repliceert. De kve per plaat bepalen door te vermenigvuldigen met de gemiddelde waarde de eindverdunning factor.

10. euthanasie en weefsel fixatie

  1. Intraveneus injecteren een overdosis van natrium pentobarbital euthanasie oplossing (80 – 120 mg/kg).
  2. Uitvoeren en bloc excisie van branden wond weefsel met de onderliggende spieren en omliggende gewonde weefsel.
  3. Herstellen van weefsels met 10% neutraal gebufferde formaline.
    1. Meng 10 mL formaldehyde (37%) in 90 mL fosfaatgebufferde oplossing (PBS) en winkel in 4 ° C.
    2. Weefsels overbrengen fixeer en swirl van de container om ervoor te zorgen dat alle weefsels worden volledig ondergedompeld in fixeerspray. Het volume van fixeerspray moet 30 maal het volume van weefsel.
    3. Vaststellen dat weefsels 's nachts 4 ˚C.
  4. Weefsels met ethanol dehydrateren en inbedden in paraffineblokken. Voer de volgende stappen op 4 ˚C op een shaker.
    1. Spoel tweemaal met PBS voor 30 minuten.
    2. Dehydrateren weefsels met 70% ethanol voor 8 uur, 's nachts 80% ethanol, 95% ethanol voor 8 uur, waarna in 100% ethanol's nachts.
    3. Incubeer weefsels in 100% ethanol voor een verdere 8 uur.
    4. Incubeer weefsels in drie wijzigingen van xyleen, elk gedurende 30 minuten.
    5. Vervang de xyleen met vers gesmolten (52 ° C) wax en Incubeer bij 52 ° C in de oven gedurende 1 uur.
    6. De wax vervangen door verse wax en Incubeer bij 52 ° C in de oven gedurende 3 uur, en vervolgens nogmaals vervangen en na een nacht bebroeden bij 52 ° C.
    7. Weefsels met twee meer veranderingen van wax elke Incubeer gedurende 1 uur, en dan insluiten van het weefsel en bewaren bij 4 ° C.
  5. Snij en vlekken van de paraffine-ingebedde secties met hij en visualiseren via een lichte Microscoop met 100× vergroting.
    1. Paraffine secties gebruikend rotary microtome maken.
    2. Dewax secties met drie wijzigingen van xyleen, elk gedurende 3 minuten.
    3. Weefsels met 100%, 95%, 80% en 70% ethanol, elke 3 minuten hydrateren, en vervolgens onder te dompelen in gedestilleerd water.
    4. Vlek met haematoxyline gedurende 10 minuten en spoel in stromend kraantjeswater.
    5. Differentiëren met 0,1% zoutzuur ethanol voor 5 minuten, en spoel in leidingwater.
    6. Vlek met 0,5% eosine gedurende 1 minuut.
    7. Dehydrateren weefsels met 70%, 80%, 95% en 100% ethanol gedurende 2 minuten.
    8. Schakel de kleuring met xyleen en droog in de zuurkast.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Branden duur van 30 seconden door heet strijkijzer resulteerde in wonden die rond met een welomschreven marge en uniform bleek met een rand van erytheem (Figuur 1 d waren). Binnen elk dier waren er zes brandwonden op het dorsum. De rangschikking van brandwonden werd afgebeeld in Figuur 1 K. Brandwonden werden volledig bedekt met CAPS-bevattende dressing en gebruikt voor het evalueren van de diepte van littekenvorming na branden d...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

De huidige studie een varkens-model van ernstige branden letsel vastgesteld en onderzocht het model met behulp van een dressing CAPS-bevattende. Onze resultaten suggereren dat deze varkens-model kan worden gebruikt voor het controleren van de klinische prestaties van experimentele dressings, met inbegrip van antibacteriële eigendom. Wond genezing tarief, de wond sluiting, en de antibacteriële activiteit zijn ook geanalyseerd met behulp van VSS, H & E kleuring en antibacteriële test. Het gebruik van dierlijke burn modelle...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gesteund door een subsidie van de Tri-Service General Hospital; National Defense Medical Center, Taiwan (TSGH-C107-042); Ministerie van wetenschap en technologie, Taiwan (meeste 106-2314-B-016-014); en de National Defense Medical Center (MAB-106-055; MAB-106-010; MAB-107-064).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Sedatie:
KetamineMerial2528 ESP10 mL injectieflacon
AzaperoneChina chemical & pharmaceutical47W406100 mL injectieflacon
Atropine Oriental chemical worksIN1208021 mL injectieflacon
Anesthesie:
Tiletamine+ZolazepamVirbacBC915 mL injectieflacon
IsofluraanBaxterN002A225100 mL injectieflacon
Chirurgie:
HaartrimmerMoser--
Povidon-jodium scrub oplossingEver starHA1612024 L vat
Gemodificeerd ijzer---
0,9% zoutoplossingCHI SHENGKC130500 mL injectieflacon
GaasChina Surgical Dressings CenterMO1590008010 x10 cm
CAPSCoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan--
Papiertape3MNDC-8333-1530-012,5 cm x 9,1m
Waterdichte film3MNDC-8333-1600-4010 cm x 10 m
PlasterYoung chemicalBH142601510 cm x 10 m
Dissectie:
Paar standaard scherpe/blunde rechte schaar (14 cm)Shinetec instrumentsST-S114-
Halstead-Mosquito (12,5 cm)Shinetec instrumentsST-H012-
Handgreep(# 4)Shinetec instrumentsST-H004-
Chirurgisch mes(#21)Shinetec instrumentsST-B021-
Post-Fixatie & opslag:
50 ml kunststof centrifugeerbuis Falcon352070-
10% neutraal gebufferd formalinLeica3800604EG-
Bacteriegroei-experimenten 
Bloedagarplaat (BAP) (TSA met 5% schapenbloed) CMP-90 mm Mono

Referenties

  1. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regeneration. 17, 763-771 (2009).
  2. Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regeneration. 17, 1-18 (2009).
  3. Verhaegen, P. D., et al. Differences in collagen architecture between keloid, hypertrophic scar, normotrophic scar, and normal skin: an objective histopathological analysis. Wound Repair Regeneration. 17, 649-656 (2009).
  4. Experimental Surgery and Physiology: Induced Animal Models of Human Disease. Swindle, M. M., Adams, R. J. , Williams and Wilkins. Baltimore. (1988).
  5. Swindle, M. M., Smith, A. C. Swine as Models in Biomedical Research. , Iowa State University Press. Ames. (1992).
  6. Advances in Swine in Biomedical Research. Vols 1-2. Tumbleson, M. E., Schook, L. B. , Plenum Press. New York. (1996).
  7. Wang, C. H., et al. Enhanced wound-healing performance of a phyto-polysaccharide-enriched dressing - a preclinical small and large animal study. International Wound Journal. 14, 1359-1369 (2017).
  8. Rowan, M. P., Cancio, L. C., Elster, E. A., Burmeister, D. M., Rose, L. F., Natesan, S., Chan, R. K., Christy, R. J., Chung, K. K. Burn wound healing and treatment: review and advancements. Journal of Critical Care. 19, 243(2015).
  9. Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 969618, 8(2011).
  10. Gaines, C., Poranki, D., Du, W., Clark, R. A., Van Dyke, M. Development of a porcine deep partial thickness burn model. Burns. 39, 311-319 (2013).
  11. Gnyawali, S. C., Barki, K. G., Mathew-Steiner, S. S., Dixith, S., Vanzant, D., Kim, J., Dickerson, J. L., Datta, S., Powell, H., Roy, S., Bergdall, V., Sen, C. K. High-resolution harmonics ultrasound imaging for non-invasive characterization of wound healing in a pre-clinical swine model. PLoS One. 10 (3), e0122327(2015).
  12. Eaglstein, W. H., Mertz, P. M. New methods for assessing epidermal wound healing: the effects of triamcinolone acetonide and polyethelene film occlusion. Journal of Investigative Dermatology. 71, 332-384 (1978).
  13. Swindle, M. M., Smith, A. C. Comparative anatomy and physiology of the pig. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Sciences. 25, 1-10 (1998).
  14. Swindle, M. M. Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging and Experimental Techniques. , 2nd ed, CRC Press. Boca Raton. (2007).
  15. Mertz, P. M., et al. IL-1 as a potent inducer of wound re-epithelization. Progress in Clinical and Biological Research. 365, 473-480 (1991).
  16. Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation. Science Translation Medicine. 6, 265-266 (2014).
  17. Aryza, M. J., Baryza, G. A. The Vancouver Scar Scale: an administration tool and its interrater reliability. The Journal of Burn & Rehabilitation. 16, 535-538 (1995).
  18. Bystrom, A., Claesson, R., Sundqvist, G. The antibacterial effect of camphorated paramonochlorophenol, camphorated phenol and calcium hydroxide in the treatment of infected root canals. Endodontics & Dental Traumatology. 1, 170-175 (1985).
  19. Reig, A., Tejerina, C., Codina, J., Hidalgo, J., Mirabet, V. Application of a new cicatrization dressing in treating second-degree burns and donor sites. Annals of Burn and Fire Disasters. 4, 174(1991).
  20. Hindy, A. Comparative study between sodium carboxymethyl-cellulose silver, moist exposed burn ointment, and saline-soaked dressing for treatment of facial burns. Annals of Burn and Fire Disasters. 22, 131-137 (2009).
  21. Galiano, R. D., et al. Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells. The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).
  22. Thangarajah, H., et al. The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 13505-13510 (2009).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Brandwondmodel bij varkensgenezing van brandwondenmeting van wondsluitingVancouver Scar Scalehistologisch onderzoekbacteriële kweekanalysemet glycerine verhit ijzersteriele zoutoplossinghechtpleisterverband