In Vitro Differentiatie van muis granulocyt-macrofaag-kolonie-stimulerende Factor (GM-CSF)-produceren van T-Helper (THGM) cellen

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

In Vitro Differentiatie van muis granulocyt-macrofaag-kolonie-stimulerende Factor (GM-CSF)-produceren van T-Helper (T_HGM) cellen

6.7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58087

⸱

10 september 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol te differentiëren lymfkliertest granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing T-helper (T_HGM) cellen van naïef CD4 + T-cellen, met inbegrip van isolatie van naïeve CD4 + T cellen, differentiatie van T_HGM, en analyse van gedifferentieerde T_HGM cellen. Deze methode kan worden toegepast op de studies van de verordening en de functie van T_HGM cellen.

Samenvatting

De granulocyt-macrofaag-kolonie-stimulerende factor (GM-CSF)-produceren van T-helper (T_HGM)-cel is een nieuw geïdentificeerde T helper cel deelverzameling die overwegend scheidt van GM-CSF zonder het produceren van interferon (IFN) γ of Interleukine (IL)-17 en komt tot spelen een essentiële rol in de auto-immune neuroinflammation. Een methode van isolatie van naïeve CD4 + T cellen van een eencellige opschorting van splenocytes en T_HGM cel generatie uit naïef CD4 + T cellen zou een nuttige techniek in de studie van T-cel-gemedieerde immuniteit en auto-immune ziekten. Hier beschrijven we een methode die muis naïef CD4 + T cellen in T_HGM cellen bevorderd door IL-7 onderscheidt. Het resultaat van de differentiatie werd beoordeeld door de analyse van de cytokines expressie met behulp van verschillende technieken, met inbegrip van intracellulaire cytokine kleuring gecombineerd met stroom cytometry, een kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (PCR), en Enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Met behulp van de T_HGM differentiatie protocol zoals beschreven hier, ongeveer 55% van de cellen uitgedrukt GM-CSF met een minimale uiting van IFNα of IL-17. De overheersende uitdrukking van GM-CSF door T_HGM cellen werd verder bevestigd door de analyse van de uitdrukking van GM-CSF, IFNα en IL-17 op zowel eiwitten als mRNA niveaus. Dus, deze methode kan worden gebruikt om te onderscheiden van de naïeve CD4 + T cellen aan T_HGM cellen in vitro, die nuttig zal zijn in de studie van biologie van de cel van de T_HGM.

Inleiding

CD4 + T-helper (T_H) cellen zijn essentiële onderdelen van het immune systeem, cruciale rol in de verdediging van de gastheer tegen microbiële ziekteverwekkers, in kanker toezicht, en autoimmuniteit¹^,²^,³. Na activatie van T-cel receptor (TCR), naïef CD4 + T cellen kunnen worden onderscheiden in T_H1, T_H2, T_H 17, of regelgevende T (Walter) cellen onder de invloed van verschillende cytokine milieus²^,⁴^, ⁵. onlangs een nieuwe subset van T_H