Methodenartikel

Decellularization van gehele menselijk hart binnen een hydrofoor tasje in een omgekeerde richting

DOI:

10.3791/58123

⸱

26 november 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Regenerative Medicine Research, Texas Heart Institute, 2Lifegift Organ Donation Center, 3Biomedical Engineering, Texas A&M University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deze methode kan decellularization voor een complexe solide orgel met behulp van een eenvoudig protocol gebaseerd op osmotische schok en perfusie van Ionische detergent met minimale orgel matrix verstoring. Het bestaat uit een roman decellularization-techniek voor menselijke harten binnen een hydrofoor etui met real-time bewaking van flow dynamics en cellulaire puin uitstroom.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De ultieme oplossing voor patiënten met hartfalen einde-fase is orgaantransplantatie. Maar bij immuunsuppressie is vereist, donor harten zijn beperkt en uiteindelijk afwijzing kan optreden. Het maken van een functioneel, kon autologe bio-kunsthart deze uitdagingen oplossen. Biofabrication van een hart dat bestaat uit de steiger en cellen is een optie. Een natuurlijke steiger met weefsel-specifieke samenstelling evenals micro - en macro-architectuur kan worden verkregen door decellularizing harten van mensen of grote dieren zoals varkens. Decellularization omvat cellulaire puin terwijl behoud 3D extracellulaire matrix en therapieën en "cellularization" waardoor op een later timepoint spoelen. Inspelend op onze roman vinden dat decellularization perfusie van complexe organen is mogelijk, wij een meer "fysiologisch" methode ontwikkeld om niet-transplanteerbaar menselijke harten door ze te plaatsen binnen een hydrofoor etui, in een omgekeerde decellularize oriëntatie, onder gecontroleerde druk. Het doel van het gebruik van een hydrofoor zakje is druk om kleurovergangen te maken over de aortaklep het gesloten houden en verbeteren van myocardiale perfusie. Gelijktijdige beoordeling van de dynamiek van de stroom en cellulaire puin verwijdering tijdens decellularization konden we ten aanzien van zowel vloeistof instroom en uitstroom van puin, waardoor het genereren van een steiger die kan worden gebruikt voor eenvoudige cardiale reparatie (bijvoorbeeld als een patch of ventiel steiger) of als een geheel-orgel-steiger.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hartfalen leidt tot een hoge mortaliteit bij patiënten. De ultieme behandelingsoptie voor einde-fase hartfalen is allo-transplantatie. Echter, er is een lange wachtlijst voor transplantatie als gevolg van de tekort van donor-organen, en patiënten gezicht na transplantatie horden variërend van levenslang bij immuunsuppressie tot chronische orgel afwijzing1,2. Bioengineering functionele harten door repopulatie decellularized mens en middelgrote hart met een patiënt eigen cellen kunnen omzeilen deze horden3.

Een belangrijke stap in "engineering" een hart is de oprichting van een steiger met passende vasculaire en parenchymal structuur, de samenstelling en de functie voor het begeleiden van de uitlijning en de organisatie van geleverde cellen. In aanwezigheid van het geschikte kader, moeten cellen uitgezaaid op het schavot herkennen van het milieu en de verwachte functie uitvoeren als onderdeel van dat orgaan. Volgens ons omvat decellularized orgel extracellulaire matrix (dECM) de nodige kenmerken van het ideale schavot.

Door gebruik te maken van intrinsieke therapieën, kan complexe geheel-orgel-decellularization worden bereikt via antegrade of retrograde perfusie4 om te verwijderen van cellulaire componenten met behoud van de gevoelige 3D extracellulaire matrix en therapieën2, 5,6,7. Een functionele therapieën is belangrijk in bioengineering hele organen gewoon zoals het is in vivo, voor nutriënten distributie en afval verwijdering8. Coronaire perfusie decellularization heeft bewezen effectief te zijn in het creëren van decellularized harten van ratten4of varkens4,7,9,10,11 ,12,13, en mensen5,7,14,15,16. Integriteit van de kleppen, atria en andere "thin" regio's kan echter nadelig beïnvloeden.

Mens-grootte decellularized hart steigers kunnen worden verkregen van varkens met behulp van druk control7,9,10,11,12 of infusie flow rate control13, 17 encontrole van menselijke donoren druk met5,7,14,15. Decellularization van menselijke donor hart doet zich voor meer dan 4-8 dagen onder druk gecontroleerd op 80-100 mmHg in staande oriëntatie5,15,16 of meer dan 16 dagen onder druk gecontroleerd op 60 mmHg14 . Onder antegrade, druk-gecontroleerde decellularization, speelt de bekwaamheid van de aortaklep een cruciale rol bij het handhaven van de efficiëntie van de coronaire perfusie en stabiele druk in de aorta hoofdmap. Onze vorige werk is gebleken dat de richting van het hart invloed op de efficiëntie van de coronaire perfusie tijdens de procedure decellularization en dus de integriteit van de steiger in het einde9.

Als een voortzetting van onze eerdere werk9introduceren we een nieuw concept waarin een hartzakje-achtige zakje is toegevoegd ter verbetering van de gehele-hart decellularization. We beschrijven de decellularization van menselijke harten geplaatst binnen hydrofoor zakjes, omgekeerd georiënteerd, en onder druk gecontroleerd op 120 mmHg bij de aorta wortel. Dit protocol omvat het toezicht op het profiel van de stroom en de verzameling uitstroom media gedurende de decellularization procedure voor de evaluatie van de efficiëntie van de coronaire perfusie en cel puin verwijderen. Biochemische tests worden vervolgens uitgevoerd om te testen van de effectiviteit van de methode.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle experimenten vasthouden aan de richtsnoeren van de Commissie ethiek van de Texas Heart Institute.

1. orgel voorbereiding

Opmerking: In samenwerking met LifeGift, een non-profitorganisatie orgel procurement organisatie in Texas (http://www.lifegift.org), schonk menselijke harten niet geschikt is voor transplantatie werden gebruikt voor onderzoek met goedgekeurde toestemming.

  1. Om het hart aanschaffen, intraveneus infuus 30.000 U heparine aan het hart. Veilig hechtdraad cardioplegia canule in de aorta en hechten een geklemd perfusie-lijn. Perforate de inferior vena cava (IVC) om te ventileren van het rechterdeel van het hart. Snijd de linker superieure longader of de linker atriale aanhangsel om te ventileren van de linker kamers van het hart.
  2. Infundeer 1 L cardioplegia of EDTA zoutoplossing. Ontleden aortaboog takken, superieure vena cava (SVC) en andere pulmonary aders om het hart van elke bijlage vasculaire of omliggende weefsel vrij te geven. Het goed heparinized hart in iced zoutoplossing dompelen.
  3. Inspecteren van het gedoneerde menselijke hart (anteriorly zowel posteriorly, Figuur 1). Het hart op een ontleden lade plaatsen en te inspecteren op structurele schade of anatomische misvormingen. Als de lever-en/of longen werden aangeschaft voor transplantatie, kan het hart met een korte vena cava inferior en/of afwezigheid van links atriale achterste muur presenteren.
  4. Interne inspectie voor eventuele gebreken - atriale septal defect (ASD), ventriculaire septal defect (VSD) of misvorming van de klep (aorta, pulmonale, mitralisklep, tricuspidalis) uitvoeren.
  5. Als een septal defect aanwezig is, moet u deze corrigeren met passende hechtingen (figuur 2A, 2B). De correctie van septal gebreken is nodig om de voortgang van de decellularization via de longslagader (PA) uitstroom troebelheid meting. Correctie van het septal defect verwijdert links naar juiste shunt, vandaar de uitstroom uit PA vertegenwoordigt de uitstroom van de coronaire circulatie via de coronaire sinus.
  6. Afbinden superior en inferior vena cava met 2-0 zijde hechtdraad (figuur 2C).
  7. Het ontleden van de aorta (Ao) uit de buurt van de belangrijkste PA (figuur 2D) voor de latere cannulation.
  8. Plaats verbindingslijnen, gebaseerd op de diameter van het vaartuig, de (Figuur 3) naar Ao en PA en hen veilig met 2-0 zijde hechtingen (figuur 4A).
  9. Plaats een buis lijn via de linkerboezem (figuur 4B) en naar de linker ventrikel (LV) (Figuur 3), met behulp van een van de longader lichaamsopeningen.
  10. Sluit een infusie-lijn aan de connector geplaatst in de Ao en de uitstroom lijn in de PA (Figuur 3).
  11. Plaats het bereid hart in een polyester zak in omgekeerde richting (ondersteboven).
  12. Plaats het zakje met hart verpakkingsgasssen perfusie en sluit het deksel (figuur 4C).
  13. Elk van de lijnen verbinden met de respectieve poorten in de rubberstop (gebaseerd op de diameter van de container) en plaats deze op het deksel van de container van de perfusie te verzegelen het polyester zakje (figuur 4C en figuur 5B).
  14. Perfuse 1 x fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) (136 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM nb2HPO4 en 1,8 mM KH2PO4 in gedistilleerd water, pH 7.4) via de poort van de infusie van de rubberstop om te controleren of de uitstroom van de PA en aan de lijn ingevoegd in LV.
  15. Gebruik deze stroom te reinigen van het orgaan van eventuele resterende sporen van bloed in de therapieën. Als stroom niet waargenomen wordt, scherpen de verbindingslijnen als ze misschien wel los.

2. de systeeminstellingen en orgel Decellularization Procedure

  1. Monteren van de bioreactor en plaats in een staande afdrukstand (Figuur 5). De perfusie-systeem omvat een personal computer (PC), evenredige-integraal-afgeleide (PID) controller, een peristaltische pomp voor Ao infusie, een bioreactor perfusie, een druk hoofd container voor LV perfusaat retentie (2L aspirator fles met bodem pistool), en een peristaltische pomp voor afvoer overtollige vocht uit de druk hoofd container en voor het verzamelen van de uitstroom van PA.
  2. In het rubber septum, verbinden met de lijn van de infusie, druk-hoofd lijn, PA-uitstroom lijn en bioreactor zuig lijn de rubber dop oppervlakte poorten geplaatst op de top van de perfusie bioreactor (figuur 5A).
  3. Decellularize hart onder constante druk van 120 mmHg gemeten aan de aorta wortel. Gemiddelde druk van de LV moet binnen de 14-18 mmHg gedurende het hele decellularization proces.
  4. Decellularize harten als volgt: 4 h van hypertonic oplossing (500 mM NaCl), 2 h van hypotone oplossing (20 mM NaCl), 120 h van het natrium dodecyl sulfaat (SDS 1%) oplossing, en een laatste wassen met 120 L 1 X PBS (figuur 6A).
  5. Decellularize de harten onder constante druk controle (120 mmHg). Infusie debiet in Ao is afhankelijk van de hart en bedraagt gemiddeld, 98.06±16.22 mL/min voor hypertonic oplossing, 76.14±7.90 mL/min voor hypotone oplossing, 151.50±5.76 mL/min voor SDS en 185.24±7.10 mL/min voor PBS. De totale verbruikte hoeveelheid elk reagens gemiddelden 23.36±5.70 L voor hypertonic oplossing en 9.13±1.26 L voor hypotone oplossing gebracht.
  6. Recirculate de laatste 60 L van 1% SDS (1 L per gram gewicht van het hart) tot het einde van SDS perfusie. Figuur 6A toont een tijdlijn voor het proces van decellularization, aanleiding kunnen geven tot eindpunten voor gegevensverzameling: tarief toezicht (Ao en PA) en uitstroom collectie (PA en niet-PA) van druk hoofd tijdens decellularization stromen.
  7. Aangezien de SVC en IVC als ligatuur zijn verbonden, is het redelijk te veronderstellen dat alle vloeistof verzameld van de PA is het resultaat van werkelijke coronaire perfusie (figuur 5B). Het debiet van perfusaat uit de PA door het debiet van geïnfundeerd oplossing direct te verdelen in Ao om coronaire perfusie efficiëntie te bepalen:
    Coronaire perfusie efficiëntie = figure-protocol-1 (%).
  8. Vergelijkende analyse van het perfusaat verkregen uit de PA en de LV en de geïnfundeerd oplossingen in tweevoud laden 200 μl per putje in een duidelijke bodemplaat 96-Wells en het lezen van de absorptie bij 280 nm. De waarde van de absorptie, empirisch geselecteerd na het uitproberen van verschillende waarden, werd gevonden om het beste genormaliseerde waarden.
  9. De troebelheid van schone geïnfundeerd reagens als het besturingselement gebruiken. De troebelheid van het perfusaat uitstroom wegspoeling van cel vuil vertegenwoordigt en direct tijdens decellularization als een hulpprogramma voor het bijhouden van het proces kan worden gekwantificeerd.
  10. Voeg tijdens de laatste wash met 10 L 1 X PBS, 500 mL steriele geneutraliseerde 2,1% Perazijnzuur zuuroplossing, geneutraliseerd met 10N NaOH, wat leidt tot een 0,1% Perazijnzuur zure oplossing (v/v) in PBS. Gebruik deze oplossing om de steiger te steriliseren.

3. evaluatie van Decellularized hart

Opmerking: Na decellularization, representatieve harten zal worden gebruikt voor coronair angiogram beeldvorming en biochemische tests.

  1. Uitvoeren van Coronaire Angiografie van de representatieve decellularized menselijk hart te onderzoeken de intactheid van de coronaire therapieën. Kortom, met behulp van een fluoroscope, afbeelding decellularized menselijk hart na injectie van contrast agent door coronaire ostial canule in de belangrijkste rechter en linker kransslagaders.
  2. Het ontleden van het decellularized hart om monsters uit 19 gebieden de resterende deoxyribonucleic acid (DNA), glycosaminoglycaan (GAG) en SDS niveaus in decellularized weefsels te evalueren. Neem de voet van het hart van de ventrikels en ontleden de ventrikels in 4 gelijke delen (Figuur 6 c). Verdeel elke sectie in de voorste en achterste rechterventrikel (RV), de voorste en achterste LV en het hart septum (IVS). Het weefsel bevattende de apex is ontleed in de LV en RV voor bemonstering.
  3. Gesneden weefselmonsters voor DNA, GAG en SDS assays (~ 15 mg van versgewicht).
  4. Double-stranded DNA (dsDNA) te halen door het verteren van monsters in 1 M NaOH gedurende 3 uur bij 65 ° C en breng pH op 7 met behulp van 10 x Tris-EDTA (TE) buffer en 1 M zoutzuur (HCl).
  5. Kwantificeren van dsDNA een dsDNA Assay kit met een kalf thymus standaard (Zie Tabel van materialen). Lees monsters in tweevoud fluorescentie microplate lezer gebruikt (excitatie bij 480 nm en emissie bij de 520 nm). Bereken het percentage van de resterende dsDNA in de decellularized harten door het vergelijken van dsDNA concentratie in elk weefsel dat in dode foetussen (% dode foetussen).
  6. Krijgen sulfated GAGs in oplossing door het verteren van weefselmonsters een extractievloeistof papaïne (0,2 M natriumfosfaat buffer met EDTA Dinatrium zout, cysteïne HCl, natriumacetaat en papaïne) bij 65 ° C gedurende 3 uur. GAG inhoud (in tweevoud) meten met behulp van een glycosaminoglycaan Assay Kit.
  7. Lyophilize monsters voor SDS assay in een verwarmde vacuüm en maatregel drooggewicht. 200 µL ultrazuiver water toevoegen aan elk gedroogde monster en homogeniseren om uit te pakken van de resterende SDS in oplossing. Meng deze SDS-oplossing met chloroform en een methyleenblauwoplossing (12 mg methyleenblauw in 1 L 0,01 M HCl). De SDS zal in de organische laag door binding aan de kleurstof methyleenblauw scheiden.
  8. Met behulp van een fluorescentie microplate lezer, lees de extinctie (655 nm) van het standards and monsters in tweevoud voor de berekening van de residuele SDS. Normaliseren deze SDS waarde aan weefsel drooggewicht.
  9. Foto's van dikke regio's (dat wil zeggen, LV, RV en septum) van menselijk hart met niet-lineaire optische microscopie (NLOM), cellulaire verwijdering na decellularization te bevestigen. Het NLOM-setup wordt gedetailleerd beschreven in onze eerdere publicaties18,19,20. NLOM ons in staat stelt aan beeld cel elastine, collageen en myosin vezels via haar twee-foton fluorescentie (TPF) en de tweede-harmonische generatie (SHG) zenders zonder gebruik te maken van een exogene vlek of kleurstof21.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Na een 7-daagse decellularization met antegrade aorta perfusie onder constante druk van 120 mmHg draaide het menselijk hart doorschijnend (figuur 6B). Het hart was Grove ontleed in 19 secties voor biochemische (DNA, GAG en SDS) analyse (Figuur 6 c) voor de evaluatie van het eindproduct van de decellularized.

Tijdens het proces van decellularization, was de infusie debie...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Om onze kennis is dit de eerste studie verslag omgekeerde decellularization van menselijke harten binnen een hydrofoor etui met time-lapse toezicht op stroom tarief en cel puin verwijderen. Het pericard-achtige zakje houdt de richting van het hart stabiel gedurende de hele procedure decellularization. Inlaten en omkeren van de hele hart binnen een zakje voorkomt uitdroging en minimaliseert overmatige krachten op de aorta (van hart gewicht) wanneer vergeleken met de conventionele rechtop Langendorff perfusie decellulariza...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dr. Taylor is de oprichter en aandeelhouder van Miromatrix Medical, Inc. Deze relatie wordt beheerd overeenkomstig het beleid van belangenconflict door de Universiteit van Minnesota en Texas Heart Institute; de andere auteurs hebben geen conflict van belang om te vermelden.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit onderzoek werd gesteund door de Houston Endowment grant en de Texas Emerging Technology Fund. De auteurs erkennen de overheidsopdrachten orgel LifeGift, Inc. en van de donor gezinnen om dit onderzoek mogelijk te maken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
2-0 zijden hechtdraadEthiconSA85HHechtdraad gebruikt om superieure en inferieure vena cava te binden
1/4" x 3/8" connector met luerNovoSci332023-000Verbindt aorta en longslagader
Masterflex platina-gehard siliconen slangCole-ParmerHV-96410-16Slang om hartkamers/aders te verbinden
Infusie- en uitstroomlijnSmiths MedicalMX452FLVoor het doorstromen van oplossingen door het vaatstelsel
Polyester zakje (Ampak 400 Series SealPAK Zakjes)Fisher scientific01-812-17Pericard-achtig zakje om het hart te bevatten tijdens decellularisatie
Snapware Square-Grip CanisterSnapware10221-liter container gebruikt voor het perfunderen van het hart
Zwarte rubberen stoppenVWR59586-162Om de perfusiecontainer te verzegelen
PeristaltiekpompHarvard Apparatus881003Om vloeistof door de instroomlijnen te pompen en vloeistoffen af te tappen
2 L aspiratiefles met zijarmVWR89001-532Voor het bewaren van oplossingen/perfusiemiddel
Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay kitLife TechnologiesP7589Voor het kwantificeren van dsDNA
Calf thymus standaardSigmaD4522DNA standaard
Blyscan Glycosaminoglycan Assay KitBiocolor LtdBlyscan #B1000GAG-assaykit
Plate readerTecanInfinite M200 ProVoor analytische tests
GE fluoroscopieGeneral ElectricOEC 9900 EliteAngiogram
VisipaqueGE13233575Contrastmiddel
```

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Writing Group Members. Executive Summary: Heart Disease and Stroke Statistics--2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), 447-454 (2016).
  2. Zia, S., et al. Hearts beating through decellularized scaffolds: whole-organ engineering for cardiac regeneration and transplantation. Critical Reviews in Biotechnology. 36 (4), 705-715 (2016).
  3. Zimmermann, W. H. Strip and Dress the Human Heart. Circulation Research. 118 (1), 12-13 (2016).
  4. Ott, H. C., et al. Perfusion-decellularized matrix: Using nature's platform to engineer a bioartificial heart. Nature Medicine. 14 (2), 213-221 (2008).
  5. Sanchez, P. L., et al. Acellular human heart matrix: A critical step toward whole heart grafts. Biomaterials. 61, 279-289 (2015).
  6. Peloso, A., et al. Current achievements and future perspectives in whole-organ bioengineering. Stem Cell Research & Therapy. 6, 107(2015).
  7. Guyette, J. P., et al. Perfusion decellularization of whole organs. Nature Protocols. 9 (6), 1451-1468 (2014).
  8. Momtahan, N., Sukavaneshvar, S., Roeder, B. L., Cook, A. D. Strategies and Processes to Decellularize and Cellularize Hearts to Generate Functional Organs and Reduce the Risk of Thrombosis. Tissue Engineering Part B-Reviews. 21 (1), 115-132 (2015).
  9. Lee, P. F., et al. Inverted orientation improves decellularization of whole porcine hearts. Acta Biomaterialia. , (2016).
  10. Momtahan, N., et al. Automation of Pressure Control Improves Whole Porcine Heart Decellularization. Tissue Eng Part C Methods. , (2015).
  11. Weymann, A., et al. Development and Evaluation of a Perfusion Decellularization Porcine Heart Model - Generation of 3-Dimensional Myocardial Neoscaffolds. Circulation Journal. 75 (4), 852-860 (2011).
  12. Weymann, A., et al. Bioartificial heart: A human-sized porcine model--the way ahead. PLoS One. 9 (11), e111591(2014).
  13. Remlinger, N. T., Wearden, P. D., Gilbert, T. W. Procedure for decellularization of porcine heart by retrograde coronary perfusion. Journal of Visualized Experiments. (70), e50059(2012).
  14. Guyette, J. P., et al. Bioengineering Human Myocardium on Native Extracellular Matrix. Circulation Research. 118 (1), 56-72 (2016).
  15. Sanchez, P. L., et al. Data from acellular human heart matrix. Data Brief. 8, 211-219 (2016).
  16. Garreta, E., et al. Myocardial commitment from human pluripotent stem cells: Rapid production of human heart grafts. Biomaterials. 98, 64-78 (2016).
  17. Wainwright, J. M., et al. Preparation of Cardiac Extracellular Matrix from an Intact Porcine Heart. Tissue Engineering Part C-Methods. 16 (3), 525-532 (2010).
  18. Larson, A. M., Yeh, A. T. Ex vivo characterization of sub-10-fs pulses. Optics Letters. 31 (11), 1681-1683 (2006).
  19. Lee, P. F., Yeh, A. T., Bayless, K. J. Nonlinear optical microscopy reveals invading endothelial cells anisotropically alter three-dimensional collagen matrices. Experimental Cell Research. 315 (3), 396-410 (2009).
  20. Lee, P. F., Bai, Y., Smith, R. L., Bayless, K. J., Yeh, A. T. Angiogenic responses are enhanced in mechanically and microscopically characterized, microbial transglutaminase crosslinked collagen matrices with increased stiffness. Acta Biomaterialia. 9 (7), 7178-7190 (2013).
  21. Wu, Z., et al. Multi-photon microscopy in cardiovascular research. Methods. 130, 79-89 (2017).
  22. Ramanathan, T., Skinner, H. Coronary blood flow. Continuing Education in Anaesthesia Critical Care & Pain. 5 (2), 61-64 (2005).
  23. Murthy, V. L., et al. Clinical Quantification of Myocardial Blood Flow Using PET: Joint Position Paper of the SNMMI Cardiovascular Council and the ASNC. Journal of Nuclear Cardiology. 25 (1), 269-297 (2018).
  24. Molina, D. K., DiMaio, V. J. Normal organ weights in men: Part I-the heart. The American Journal of Forensic Medicine and Pathology. 33 (4), 362-367 (2012).
  25. Molina, D. K., DiMaio, V. J. Normal Organ Weights in Women: Part I-The Heart. The American Journal of Forensic Medicine and Pathology. 36 (3), 176-181 (2015).
  26. Robertson, M. J., Dries-Devlin, J. L., Kren, S. M., Burchfield, J. S., Taylor, D. A. Optimizing cellularization of whole decellularized heart extracellular matrix. PLoS One. 9 (2), e90406(2014).
  27. Robertson, M. J., Soibam, B., O'Leary, J. G., Sampaio, L. C., Taylor, D. A. Cellularization of rat liver: An in vitro model for assessing human drug metabolism and liver biology. PLoS One. 13 (1), e0191892(2018).
  28. Baghalishahi, M., et al. Cardiac extracellular matrix hydrogel together with or without inducer cocktail improves human adipose tissue-derived stem cells differentiation into cardiomyocyte-like cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. , (2018).
  29. Perea-Gil, I., et al. In vitro comparative study of two decellularization protocols in search of an optimal myocardial scaffold for recellularization. American Journal of Translational Research. 7 (3), 558-573 (2015).
  30. Freytes, D. O., O'Neill, J. D., Duan-Arnold, Y., Wrona, E. A., Vunjak-Novakovic, G. Natural cardiac extracellular matrix hydrogels for cultivation of human stem cell-derived cardiomyocytes. Methods Molecular Biology. 1181, 69-81 (2014).
  31. Oberwallner, B., et al. Preparation of cardiac extracellular matrix scaffolds by decellularization of human myocardium. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (9), 3263-3272 (2014).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Perfusie decellularisatiehypertonische oplossinghypotonische oplossingnatriumdodecylsulfaatPBS wasbeurtstromingsdynamiek

Gerelateerde artikelen