Hier presenteren we een protocol van elastische kleuring om elastische vezels te identificeren in pT3N0M0 maagkanker weefsels op formalin-vaste, paraffine-ingesloten secties. Vervolgens beschrijven we een methode om te bepalen of tumorcellen buiten de elastische lamina vallen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Elastische kleuring op paraffine-ingesloten Dia's van pT3N0M0 maagkanker weefsel
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De elastische lamina, die zich meestal in de submesotheliale laag bevindt, grenzend aan de peritoneum mesotheliale cellen, is amfifiele op hematoxyline en eosine (H & E) kleuring, maar kan worden gevisualiseerd door middel van elastische kleuring. Een van de belangrijke voordelen van elastische kleuring is dat het gemakkelijk is om te bepalen of tumorcellen buiten de elastische lamina zijn binnengevallen. Dit helpt bij het onderzoeken van de omvang van de peritoneale oppervlakte invasie, waardoor de pT3-en pT4 stadia in gastro-intestinale kanker worden onderscheiden. In deze studie presenteren we een protocol voor het identificeren van elastische vezels in de formalin-Fixed, paraffine-ingesloten pT3N0M0 maagkanker weefsel secties. We bereiden 5-μm paraffine profielen op die op dia's zijn bevestigd en vervolgens worden alle dia's gedeparaffineerd en opnieuw gehydrateerd tijdens de kleurings procedure. Vervolgens worden alle secties geoxideerd door kaliumpermanganaat, gebleekt door oxaalzuur, gekleurd door elastische kleuring, en tegengekleurd door van Gieson's. Tot slot onderzoeken we het effect van vlekken; elastische lamina is gekleurd blauw-zwart en collageenvezels zijn rood gekleurd, terwijl de kankercellen gekleurd zijn in verschillende tinten geel. We beschrijven ook in detail de methoden die worden gebruikt voor het bepalen van de positionele relatie tussen kankercellen en elastische lamina. Deze methode is eenvoudig, laag-kosten, en wijd toepasbaar in de identificatie van peritoneale oppervlakte invasie in gastro-intestinale kanker vanwege zijn uitstekende selectiviteit voor elastische vezels en authentieke resultaten.
Inleiding
Volgens de tumor, node, en metastasen (TNM) kanker staging-systeem, de prognose van maagkanker op pathologisch stadium pT4 is significant slechter dan dat bij pT3 (8e UICC/AJCC)1. Bij maagkanker is de classificatie van de primaire tumor (pT) meestal afhankelijk van de diepte van de tumorinvasie2. Pathologische fase pT3 maagkanker wordt gedefinieerd als kanker binnendringt door de Muscularis propria in subserosale weefsels, overwegende dat pT4 maagkanker wordt gedefinieerd als kanker penetreren aan het oppervlak van de viscerale peritoneum. De aanwezigheid van de peritoneale oppervlakte invasiviteit is de sleutel....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Tussen 1994 en 2005 werden Patiëntenmonsters geselecteerd door twee ervaren gastro-intestinale pathologen in het gelieerde kanker ziekenhuis van Xiangya school of Medicine, Central South University, van patiënten die een Gastrectomie van maag Neoplasmata hebben ondergaan, met een postoperatieve pathologische diagnose van maagkanker op het pT3N0M0 stadium (volgens de zevende TNM-fasering). Deze studie werd goedgekeurd door de ethische beoordelingscommissie.
1. snijden
- Plaats het paraffine blok in een vaste houder van de slede microtome, die naar achteren en naar voren over het blad kan bewegen. Stel de optimale hoek tussen het blok....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Een succesvolle elastische kleuring onthult duidelijk elastische lamina en kankercellen in pT3 maagkanker. Figuur 1 -laag-vermogen, microscopisch gecontroleerd na elastine oplossing kleuring, voorafgaand aan van gieson's contra vlek volgens het protocol vermeld-toont de elastische lamina dicht bij de serosale mesotheliale cellen en is blauw-zwart gekleurd in de vorm van filamenten, en er is nog een zekere afstand tussen de tumorcellen en de elastische lamina........
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Deze methode die hier wordt voorgesteld, biedt een nauwkeurige benadering voor het identificeren van de subserosale elastische lamina. De methode kan worden gebruikt om te evalueren of tumorcellen de elastische lamina hebben binnengevallen in pT3N0M0 maagkanker12. Elastische lamina is roodachtig in H & E-gekleurd secties, die niet gemakkelijk kunnen worden onderscheiden van collageenvezels, en andere bestaande hulp diagnosemethoden, zoals cytologie en immunohistochemie, hebben ook een beperkte dia.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs bedanken de steun gedeeltelijk van de National Natural Science Foundation (NO. 81401902 en NO. 81501992) en de Hunan Natural Science Foundation (NO. 2017SK2134, NO. 2018JJ2238). Het manuscript is geschreven door Guang lei. Het hele experiment wordt uitgevoerd door Guang lei en Haiyan Yang. De auteurs bedanken de hulp van pathologen en van Fellows die de gegevens van patiënten opvolgen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Elastin-Van Gieson staining kit | Baso | BA4083B | Geschikt voor het kleuren van elastische vezels, collageenvezels en myovezels |
| Permount TM Mounting Medium | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | Geschikt voor montage |
| Ethanol | LMAI Bio | LM64-17-5 | 100% |
| Xyleen | LMAI Bio | LX820585 |
Referenties
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , Springer. New York, NY. (2017). <....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
