Methodenartikel

Subclavian ader punctie als een alternatieve methode van bloed monster collectie bij ratten

14.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58499

⸱

18 november 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor het verzamelen van bloedmonsters van de rat subclavian ader.

Samenvatting

Bloedinzameling met genoeg bloed volume is essentieel in dierproeven. Bloedinzameling van de ader van de staart van ratten is populair en minder stressvol vergeleken met andere meer agressieve methoden zoals retro-orbitaal plexus monster collectie. Echter wordt deze bloed collectie methode soms beperkt door een onbevredigende slagingspercentage. Hier introduceren we een methode voor bloedinzameling via de subclavian ader punctie. De subclavian ader ligt net onder het sleutelbeen en deze ader is groot genoeg om te voldoen aan de eisen van het volume van bloed collectie. Onze resultaten tonen aan dat deze methode veilig en die van toepassing zijn voor bloedmonsters van de collectie met het bloed van de vereiste volume is. Bloedinzameling via de subclavian ader punctie kan dienen als een alternatieve bloed collectie methode in het geval van mislukte staart veneuze bloedmonsters bij ratten.

Inleiding

Bloedinzameling is essentieel in het dierlijke onderzoek. De aders van de doelgroep voor bloedinzameling omvatten de retro-orbitaal plexus, de halsslagader, de saphenous ader, staart bloedvaten en de halsslagader1,2,3,4. Soms kon bloed worden verkregen van de abdominale aorta, vena cava of zelfs het hart5,6,7. Bij dergelijke gelegenheden, de dieren moeten worden opgeofferd en kunnen niet worden gebruikt voor verdere observatie; Dus, deze methoden worden gebruikt minder in dagelijkse experimenteel werk. Bloedinzameling van de ader van de staart van ratten is populair en minder stressvol ten opzichte van de hierboven genoemde methoden8.

Echter is bloedinzameling van de ader van de staart soms beperkt door een onbevredigende slagingspercentage. Af en toe, is het ook moeilijk om genoeg bloed-volume door deze methode. Zoals de subclavian ader groot genoeg is en net onder het sleutelbeen bot ligt, kunnen subclavian ader punctie een alternatieve methode voor het bloed bemonstering als routine bloed vergaringsmethoden mislukt zijn. Hier introduceren we een methode van bloed collectie door middel van subclavian ader punctie bij ratten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Deze studie werd goedgekeurd door de centrale Zuid-Universiteit ethisch comité voor onderzoek van het dier uit het tweede Xiangya ziekenhuis (Changsha, China). Het manuscript werd voorbereid volgens aankomen (dier onderzoek: rapportage van In Vivo experimenten) richtsnoeren9.

1. materiaal en dier voorbereiding

  1. Voorbereiden van benodigde materialen: epileren agent, 75% ethanol, plakband, bloed collectie buis, 2,5 mL spuit verbonden met naald (24 G, 0.6 mm x 25 mm), haar scheerapparaat, elektronische schaal en gauge (Zie Tabel van materialen).
  2. Gebruik 20 Sprague-Dawley (SD) ratten, leeftijd 8-10 weken en gewicht 153-200 g (Zie Tabel van materialen). Ratten volgens de richtsnoeren voor de zorg en het gebruik van proefdieren10te handhaven.
  3. Huis ratten onder standaardomstandigheden met gratis toegang tot voedsel en drinkwater. Houd ze in 530 cm2 kooien met hout-scheren beddengoed (2 ratten per kooi). Houden van dieren in een temperatuur gecontroleerde kamertemperatuur van ongeveer 25 ° C.
  4. Narcose induceren (natrium pentobarbital 40 mg/kg) in alle dieren door intraperitoneale injectie vóór de punctie subclavian ader.
  5. Plaats de rat in een liggende positie. Bevestigen van de achterste ledematen in een comfortabele positie en monteren van bovenste extremiteit evenwijdig aan de aslijn van de lichaam net naast de kofferbak.
    Opmerking: Geen mechanische ventilatie is nodig voor deze procedure (Figuur 1).
  6. Reinig beide zijden van de infraclavicular-ruimte te verwijderen bont (met haar scheerapparaat en epileren agent, Zie Tabel van materialen) en zichtbaar vuil. Veeg de nek en borstwervels huid met 75% ethanol. Houd het gebied voor punctie schoon en droog met gaas.

2. bloed verzameling Procedure

Opmerking: Beide zijden van de ader van de subclavian zijn geschikt voor punctie, en hier kiezen we de rechterkant voor punctie. De locatie en richting van het juiste sleutelbeen worden geïdentificeerd door de exploitant van de linker duim (Figuur 2). De suprasternal fossae zijn zachtjes aangeraakt met de wijsvinger, zoals de suprasternal fossae is in de richting van de naald (Figuur 2).

  1. Spoel een steriele 2,5 mL injectiespuit met heparine oplossing (10 IU/mL).
  2. Ga naar de site van de punctie 0.5 mm caudal aan de buitenste regio van de 1/3 van de juiste sleutelbeen (Figuur 3). Verplaats de spuit zachtjes in de huid van de punctie-site. Zodra de naald de infraclavicular huid treedt, toepassing onderdruk met de exploitant van de rechterhand (Figuur 4).
    Opmerking: Het volume van de gemiddelde en maximale bloed zijn 1,0 mL en 1,4 mL, respectievelijk. De richting van de naald is gepositioneerd richting de suprasternal fossae en moet bijna parallel aan de clavicula gewoon posterieure ernaar. Meestal is de subclavian ader bereikbaar door het invoegen van de naald ongeveer 2 mm in deze richting. Zodra de naald de ader ingaat, treedt bloed de spuit onder negatieve druk.
    1. Onderdruk handhaven totdat voldoende hoeveelheid bloed wordt getekend (Figuur 5).
  3. Als de subclavian veneuze bloed collectie niet succesvol is, terugtrekken van de naald naar het subcutane gebied en draai de richting van de naald iets interieur aan het borstbeen.
    1. Als drie pogingen mislukken, Vermijd de subclavian ader vanaf dezelfde kant en gebruik van de contralaterale zijde voor bloedmonsters.
  4. Na de bloedinzameling, verwijder de naald punctie en druk uitoefenen op de site van de lekke band voor 1-2 minuten om te stoppen met bloeden.
    Opmerking: De druk moet zeer zacht om te voorkomen dat verstikking.

3. bloed monster Processing

  1. Breng het bloedmonster in een antistollingsmiddel beklede vacuüm buis (EDTA) en Centrifugeer gedurende 10 min bij 1600 x g voor het verzamelen van plasma.
  2. Gecombineerd het supernatant om een schone buis en sla bij-80 ° C (Figuur 6).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Een totaal van 20 SD ratten (mannelijke n = 10, vrouwelijke n = 10) hier werden gebruikt. Bloed collectionwas uitgevoerd door ervaren ondernemers, die hebben meer dan 20 bloed bemonsteringen uitgevoerd vanaf de subclavian ader bij ratten, en de exploitanten van de beginner, die hebben geen subclavian ader punctie ervaring in ratten of andere dieren. Voor activiteiten keek beginners ten minste 3 procedures gedaan door bekwame operatoren.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Hier introduceren we een alternatieve methode om bloed te onttrekken aan de subclavian ader en we laten zien dat deze methode is van toepassing, haalbaar en veilig voor bloedmonsters bij ratten. Deze methode is afgeleid van de pacemaker-implantatie van de voorsprong voor patiënten11lekke subclavian ader. De subclavian ader ligt gewoon posterior en caudal aan het sleutelbeen en is een voortzetting van de axillaire ader. Het loopt van de buitenste rand van de eerste rib naar de mediale rand van voor...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

Dit werk werd gesteund door de subsidie uit nationale Natural Science Foundation van China nr. 81670269, nr. 81500355 en nr. 81500226.

Dankbetuigingen

Geen verklaard.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
rattenHunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd (Changsha, Hunan Province, China) 
statistische softwareSPSS Statistics 17
onthaarmiddelFrance Yi Sha Cosmetics Co.,Ltd(Guangzhou, Guangdong Province,China)
2,5 mL injectiespuitShandong Weigao Group Medical Polymer Co.,Ltd(Weihai,Shandong Province,China)
haarscheerderShanghai FLYCO Electric Co., Ltd(Shanghai,China)
pleister3M Deutschland GmbH(EdisonstraBe 6,59157 Kamen, Germany)
Pentobarbital natriumMerck
75% ethanolDepartment of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South University
bloedafnamebuisjeHubei Jinxing Technology&Development Co.,Ltd (Wuhan Hubei Province,China) (2ml)
elektronische weegschaalDongguan Shengheng Electronics Co.,Ltd (Dongguan,Guangdng Province,China)
canvas handschoenenvoor anesthesie
hepaïneNanjing Xinbai Pharmaceutical  Co.,Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) (2mL, 12500 IU)
fysiologische zoutoplossingHunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd(Yueyang,Hunan Province,China) (100ml)

Referenties

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Bloedafname bij rattenstaartvene bemonsteringretro orbitale plexusinfraclaviculaire ruimtefossa sterni superiorgehepariniseerde spuitplasma isolatiesuccespercentage analysealternatieve bloedafname

Gerelateerde artikelen