Methodenartikel

Bouw van een meerdere lagen mesenchymale stamcellen blad met een 3D dynamische cultuur-systeem

DOI:

10.3791/58624

⸱

20 oktober 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory for Regenerative Medicine, Ministry of Education, Jinan University, 2Department of Developmental and Regenerative Biology, Jinan University, 3Nansha College Preparatory Academy, 4Department of Cardiology, First Affiliated Hospital of Jinan University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit artikel biedt een efficiënt en haalbaar methode voor de opbouw van meerdere lagen stamcel bladen met de cel van de stam van de gunstige eigenschap.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stamcel therapie toont een veelbelovende toekomst in het regenereren van de benadeelde orgel en weefsels, en de cel blad techniek is ontwikkeld ter verbetering van het lage cel retentie en de overleving van de arme binnen de doelzone. Echter tijdens het bouwproces in vitro , is een oplossing voor het behoud van de stamcel topicale en verhoging van het bedrag van de cel binnen de cellaag dringend nodig. Dit protocol presenteert hier een methode voor de bouw van een meerdere lagen cellaag met gunstige stamcel topicale en optimale bruikbaarheid. Decellularized varkens hartzakje (DPP) wordt bereid door fosfolipase een methode decellularization2 (PLA2) als de cel blad steiger en rat beenmerg mesenchymale stamcellen (BMSCs) zijn geïsoleerd en uitgebreid als de geplaatste cellen. De tijdelijke meerdere lagen blad celstructuur is gebouwd met behulp van RAD16-ik peptide hydrogel. Tot slot, de cellaag is gekweekt met een dynamische perfusie-systeem te stabiliseren van de driedimensionale (3D) structuur en de cellaag kon worden verkregen na een 48-urige cultuur in vitro. Dit protocol biedt een efficiënt en haalbaar methode voor de bouw van een vel met meerdere lagen cel van de stam en het blad van de cel kan worden ontwikkeld als een gunstige stamcel therapie product in de toekomst.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stamcel therapie werd gerapporteerd als een effectieve behandeling voor vele ziekten; lage cel retentie en arme overleven binnen de doelzone blijven echter kritieke problemen na injectie van de traditionele cel van de stam. U kunt dit probleem oplossen, ontwikkeld weefsel engineering wetenschappers de cel blad techniek. Een monolayered cellaag met intact extracellulaire matrix bereid was om te beginnen met behulp van de temperatuur-respons cultuur schotel1, en haar follow-up studies rapporteerde de significante verbeteringen van de stamcel retentie en overleven in de infarcted gebied2,3. Onder de werd bouw van de meerdere lagen cellaag gerapporteerd als een doeltreffende strategie ter verbetering van de overleving van de cel en de cel blad therapeutisch effect3,4. Sindsdien hebben wetenschappers gewerkt aan andere cel blad bouwmethoden te ontwikkelen teneinde het bedrag van de cel, stamcel eigenschap en mechanische eigenschap van de bladen van de cel. Tot nu toe, bepaalde soorten cellaag zijn gebouwd en studeerde bij de behandeling van myocardinfarct5,6van de schade van kraakbeen, en huid wond7.

De topicale van stamcellen voor transplantatie toonde een opkomende invloed op benadeelde Weefselregeneratie en andere cel blad bouw strategieën hebben verschillende effecten op de cellen van de stam. Aan de ene kant confluente cel bladen alleen bestond uit high-density stamcellen en natuurlijke extracellulaire matrices kunnen worden verworven door stapelen monolayered cel bladen8 of met behulp van magnetische weefsel engineering technieken9. Aan de andere kant, ontwikkelde onderzoekers verschillende steigers voldoende mechanische sterkte te en te ondersteunen cel groei10,11,12, waardoor een laag stamcel dichtheid om ervoor te zorgen de voeding zaaien aanbod. Echter, ondanks deze benaderingen, de lage efficiënte voeding levering binnen de meerdere lagen celstructuur blad blijft een groot probleem tijdens de bouw in vitro . Dus is een bouwsysteem van efficiënt en haalbaar cel blad dringend noodzakelijk.

Dit protocol beschrijft de stappen ter voorbereiding van de cellaag van een multilayeredmesenchymal-cel van de stam (MSC). In dit bouwsysteem, wordt het blad van de mechanische sterkte van cel verzorgd door een DPP. Op basis van deze steiger, de 3D celstructuur kan worden snel geconstrueerd met RAD16-ik peptide hydrogel, en een dynamische perfusie-systeem wordt gebruikt voor de cultuur van de meerdere lagen cellaag, om te stabiliseren van de 3D blad celstructuur en voldoende voeding aanbod voor de cellen. Met behulp van dit systeem, een meerdere lagen BMSC blad met succes werd voorbereid en een optimaal therapeutisch effect op de rat myocardiaal infarct model13tentoongesteld.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle stamcel en dierlijke experiment procedures werden uitgevoerd volgens de ethische richtsnoeren voor de nationale gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren en goedgekeurd door het Jinan Universiteit Animal Care en gebruik Comité (Guangzhou, China).

1. bereiding van de DPP steiger met de PLA2 Decellularization methode14

Opmerking: Zie figuur 1A voor een schematische voorstelling van de PLA-2 decellularization-methode.

  1. 100 mL 200 U/mL PLA2 oplossing voor te bereiden. Voeg 0,5 g natrium deoxycholate en 2 mL PLA2 in 198 mL van de bufferoplossing carbonaat. Deze oplossing moet binnen 24 uur na de bereiding worden gebruikt.
  2. De verse varkens hartzakje (FPP) verkrijgen bij het slachthuis en terug te keren naar het laboratorium binnen 1 uur.
    Opmerking: De FPP moet worden bewaard bij 4 ° C tijdens het vervoer. 1.2-1.10 stappen moeten worden uitgevoerd met continue schudden in een waterbad met thermostaat-gecontroleerde.
  3. Grondig wassen de FPP met 200 mL fosfaatbuffer (PBS) met 1% penicilline-streptomycine in een bekerglas van 500 mL op 10 ° Cfor 10 min. Herhaal deze stap 2 x.
  4. De FPP gesplitst in twee lagen en verwijderen van het vetweefsel met Tang en schaar.
    Opmerking: Houd de FPP NAT door toevoeging van 50 mL PBS iedere 20 minuten tijdens het verwijderen van het vetweefsel.
  5. Vorm de FPP in 10 x 10 cm2 stukken met een schaar. De FPP met 200 mL van de bufferoplossing carbonaat (CBS) met 1% penicilline-streptomycine in een bekerglas van 500 mL op 10 ° C voor 10 min. Herhaal deze stap 2 x wassen.
  6. De FPP overbrengen in zuiver water en geniet het bij 10° C gedurende 12 h.
  7. Geniet van de 10 x 10 cm2 monsters in 50 mL CBS met 200 U/mL PLA2 en 0,5% (w/v) natrium deoxycholate oplossing bij 37 ° C gedurende 6 uur.
  8. Wassen van de monsters met CBS met 1% penicilline-streptomycine bij 10 ° C gedurende 10 min. Herhaal deze stap 2 x.
  9. Geniet van elk monster in 50 mL CBS met 200 U/mL PLA2 en 0,5% (w/v) natrium deoxycholate oplossing bij 37 ° C gedurende 2 uur.
  10. Wassen de monsters met CBS met 1% penicilline-streptomycine bij 10 ° C gedurende 2 h. Herhaal deze stap voor 10 x ten minste. Leg de monsters op vlakke platen en droog ze tot constant gewicht in een constante temperatuur oven op 55 ° C.
    Opmerking: Het monster moet volledig worden gedroogd. Weeg het DPP monster elke 10 min en herhaal dat 3 x of totdat het gewicht niet meer verandert.
  11. Elk monster DPP vorm in een cirkel met diameter van 10.5 mm met een trephine. Pak elk DPP in een steriele verzegelde zak.
  12. Steriliseren de DPP monsters door gamma bestraling (25 kGy). De DPP monsters bij 4 ° C vóór gebruik opgeslagen.
    Opmerking: Alle monsters kunnen worden opgeslagen voor maximaal zes maanden bij 4 ° C.

2. voorbereiding van de cel blad bouw

  1. Autoclaaf alle instrumenten en weefsel vervoerder onderdelen bij 121 ° C voor 30 min, met inbegrip van 1,5 mL centrifugaal buizen, pincet, pincet, schaar, getande zwarte basen (onderdeel van de drager van de weefsel) en witte spanning ringen (onderdeel van de drager van de weefsel).
  2. 20 mL 10% sacharoseoplossing kiem-vrije voor te bereiden. Gewicht 2 g van sacharose en los van de sucrose in 18 mL ultrazuiver water. Autoclaaf de 10% sacharoseoplossing bij 121 ° C gedurende 30 minuten of filter de oplossing met een 0,22 µm filter.
  3. Autoclaaf de dynamische perfusie systeemapparaten bij 121 ° C gedurende 30 minuten, met inbegrip van een gas uitwisseling van apparatuur, een 500 mL glazen fles, een perfusie cultuur container en het bindweefsel buizen.
  4. Bereiden de gesteriliseerde met autoclaaf instrumenten en weefsel vervoerder onderdelen. De zwarte basisartikel van de drager van weefsel in een cultuur schotel plaatsen
  5. Pak een gedroogde DPP-steiger en zet het in het midden van de zwarte basis. Een ring van wit spanning zetten de DPP-steiger en repareren in de drager van weefsel.
    Opmerking: Zorg ervoor de steiger is helemaal vast in het weefsel drager en er is geen kloof tussen de zwarte basis en de spanning van de witte ring. Als dat niet het geval is, scheiden de vervoerder weefsel en monteren van de steiger weer.
  6. Voeg 100 µL cultuurmedium op het schavot DPP voor rehydratie.
    Opmerking: Indien het schavot niet goed in het weefsel drager is vastgesteld, zal het kweekmedium infiltreren de cultuur schotel.
  7. Het schavot gebracht een incubator 37 ° C en laat ze weken 15 min.

3. voorbereiding van de cellen van de cel blad bouw

Opmerking: Dit protocol is voor de cultuur van de cel met behulp van een schotel van 100 mm. Zie figuur 1B voor een schematische voorstelling van de bouw van de meerdere lagen celstructuur.

  1. BMSCs13te isoleren.
    Opmerking: Deze methode is bedoeld voor de bouw van een meerdere lagen cellaag van MSC. BMSCs van de rat worden in dit protocol gebruikt. De BMSCs zijn geïsoleerd met behulp van de hele beenmerg aanhangend methode, en de BMSCs zijn uitgevouwen in vitro genoeg cel bedrag te verkrijgen.
    1. Autoclaaf de instrumenten bij 121 ° C gedurende 30 minuten, inclusief pincet, getande Tang en schaar. Bereid een 2 mL injectiespuit en BMSC kweekmedium (Dulbecco van gewijzigd Eagle's medium [DMEM], foetale runderserum 10%, 1% glutamine en 1% penicilline-streptomycine).
    2. De drie weken oude mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten door cervicale wervel dislocatie euthanaseren. Geniet van het dier in 100 mL 75% alcohol oplossing in een bekerglas gedurende 5 minuten.
    3. Neem het dier uit het bekerglas en plaats het gevoelig op de operatie tafel. Incise de huid op de rug van het dier met een schaar en pincet. Isoleren van de huid en spier weefsels om de dij dijbeen bloot te stellen.
    4. Isoleren van de dij dijbeen en zet het in 30 mL PBS in een centrifugebuis 50 mL. Plaats twee dij dijbeen in één buis. Vortex de centrifugebuis te grondig wassen van het weefsel. Herhaal deze stap 2 x.
    5. Snijd beide uiteinden van het dijbeen met een schaar en bloot de holte van het beenmerg.
    6. 2 mL BMSC-kweekmedium gecombineerd met een injectiespuit. Plaats de naald in de holte van beenmerg en spoelen van het beenmerg met kweekmedium. Spoelen van elke twee dij dijbeen in één schotel van 100 mm cultuur.
    7. Voor elke 100 mm cultuur schotel, voeg toe 2 mL gestolde voedingsbodem in de cultuur-schotel. Zet de schotel van cultuur in de 37 ° C incubator en statische cultuur gedurende 72 uur.
    8. Neem de cultuur schotel uit de incubator. De bovendrijvende substantie vervangen door 6 mL verse kweekmedium.
    9. Primaire BMSCs onder een microscoop te observeren. Na dit, passage de BMSCs elke 5-7 d.
  2. Nemen de cellen uit de incubator. Observeren van de cellen onder een microscoop en kiezen van geschikte cellen voor cel blad bouw. Wanneer de BMSCs 80% - 90% samenvloeiing bereikt, kunnen de cellen als de geplaatste cellen worden gekozen.
  3. Verwijder het kweekmedium uit de cultuur-schotel. Voorzichtig wassen de cellen met 2 mL warme PBS. Verwijder alle PBS uit de cultuur-schotel en maak zeker niet vloeibaar blijft. Voeg 2 mL trypsine van 0,25% (of een andere dissociating oplossing) aan de schotel en Incubeer bij 37 ° C gedurende 3 minuten.
  4. Stop het trypsine effect door toevoeging van 2 mL gestolde voedingsbodem, en de cellen van de schotel voorzichtig te wassen. Breng de celsuspensie in een nieuwe centrifuge-tube van 15 mL. Centrifugate de cellen bij 225 x g gedurende 5 min.
  5. Verwijder het supernatant. Resuspendeer de cellen met 3 mL 10% (m/v) sacharoseoplossing.
    Opmerking: 10% (m/v) sacharoseoplossing wordt gebruikt om te wassen van de cellen met het oog op een uniforme cel-hydrogel mengsel in de volgende stappen.
  6. 10 µL van de celsuspensie gecombineerd en tellen van het aantal cellen met een hemocytometer. Berekenen van het volume die nodig zijn voor de volgende stap. Voor één cellaag, worden drie miljoen BMSCs gebruikt.
  7. Pak drie miljoen cellen en ze vervolgens overbrengen naar een nieuwe centrifuge-tube van 15 mL. Centrifugeer de cellen bij 225 x g gedurende 5 min.
  8. Verwijder het supernatant. Resuspendeer de cellen met 1 mL 10% (m/v) sacharoseoplossing. Breng de celsuspensie in een centrifugebuis 1,5 mL.
    Opmerking: Met behulp van een centrifuge buis van 1,5 mL is gunstig voor het voorbereiden van het mengsel van cel-hydrogel.
  9. De cellen op 260 xg centrifugeren voor 5 min. volledig verwijderen van het supernatant en verkrijgen van het sediment van de cel.

4. voorbereiding van de BMSCs en de RAD16-ik Peptide Hydrogel mengsel

Opmerking: Zie figuur 1B voor een schematische voorstelling van de bouw van de meerdere lagen celstructuur.

  1. 20 µL van 10% (m/v) sacharoseoplossing aan de centrifugaal tube van 1,5 mL toevoegen. Zachtjes resuspendeer de BMSCs en een uniforme suspensie te verkrijgen.
    Opmerking: Tijdens de resuspensie geen bubbels genereren.
  2. Voeg 20 µL van RAD16-ik peptide hydrogel aan de bovenkant van de schorsing. Roer voorzichtig de RAD16-ik peptide en cel ophanging met het uiteinde van de pipet. Wanneer de celsuspensie en hydrogel zijn vermengd, Pipetteer zacht het mengsel een paar keer.
  3. Neem de DPP-steiger uit het weefsel vervoerder en zachtjes gecombineerd het kweekmedium met een pipet tip.
    Opmerking: Zorg ervoor is volledig gerehydrateerd de DPP-steiger alvorens de cel-hydrogel mengsel toe te voegen.
  4. Het mengsel gecombineerd en gelijkmatig toe te voegen aan de DPP-steiger.
    Opmerking: Het totale volume van het mengsel zou ongeveer 40-50 µL. Het is aanbevolen om het mengsel 10 µL per keer toevoegen vanuit het midden naar de buitenkant van de steiger.
  5. Voeg 1 mL gestolde voedingsbodem aan de bodem van de drager van weefsel. Zet de cellaag in de incubator van de 37 ° C gedurende 5 minuten.
  6. Haal het vel van de cel uit de incubator. Zachtjes Voeg 4 mL gestolde voedingsbodem in de cultuur-schotel en dompel het blad van de cel. Zet de cellaag in de incubator van de 37 ° C gedurende 2 uur van statische cultuur.

5. in Vitro cultuur van een 3D meerdere lagen cellaag met behulp van een systeem van dynamische cultuur

Opmerking: Zie Figuur 1 c voor een schematische voorstelling van de 3D dynamische systeem.

  1. Het dynamische perfusie-systeem, inclusief een peristaltische pomp, gas uitwisseling apparatuur, een 500 mL glazen fles, een perfusie cultuur container en het bindweefsel buizen voor te bereiden. Monteer het dynamische perfusie-systeem zoals weergegeven in Figuur 2.
  2. Voeg 200 mL gestolde voedingsbodem aan de steriele fles. Plaats de cellaag in de kamer van de cultuur-container.
    Opmerking: Let op de richting van de bovenkant van het blad van de cel.
  3. Voeg 3 mL gestolde voedingsbodem in de container van de weefsels en sluiten van de container. Zet het dynamische perfusie-systeem in de incubator en start van de pomp. Het debiet van de peristaltische pomp vastgesteld op 8 mL/min. cultuur, wordt de cellaag in het dynamische perfusie-systeem gedurende 48 uur.

6. het verkrijgen van de cellaag van meerdere lagen MSC

  1. Autoclaaf de instrumenten en het weefsel vervoerder onderdelen bij 121 ° C gedurende 30 minuten, inclusief 1,5 mL centrifugaal buizen, pincet en getande pincet.
  2. Het input kanaal van de fles om te stoppen met de levering van kweekmedium aan de container uitlichten.
    Opmerking: Stop de peristaltische pomp wanneer de cultuur-container leeg is.
  3. Neem de cellaag van de cultuur-container en zet het in een cultuur schotel.
  4. Gebruik één verlostang om te immobiliseren van de vervoerder weefsel en gebruik een andere getande pincet te scheiden van de spanning van de witte ring van de zwarte basis. Ten slotte krijgen de meerdere lagen cellaag van de BMSCs.
  5. Voor korte behoud, kan elke cellaag worden overgedragen aan een centrifugaal tube van 1,5 mL met de pincet. De DPP-steiger moet worden gekoppeld aan de binnenwand van de centrifugaal buis, en de cellaag moet verspreid uit zo veel mogelijk in de centrifugebuis.
  6. Zachtjes toevoegen 1 mL gestolde voedingsbodem in de centrifuge buis om te dompelen de cellaag. Sluit de dop van de centrifugaal buis en slaan de cellaag bij 4 ° C.
    Opmerking: De cellaag moet worden getransplanteerd of zo spoedig mogelijk geanalyseerd. Het is aanbevolen om gebruik van de cellaag binnen 4 uur.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het schema van de opbouw van meerdere lagen stamcel blad is afgebeeld in Figuur 1. Voorbereiding van de cel blad steiger door de PLA2 decellularization methode is de eerste stap. Gebaseerd op de steiger, is een tijdelijke 3D celstructuur gebouwd door het mengen van de cellen van de stam met de RAD16-1 peptide hydrogel. Het verkrijgen van een meerdere lagen cellaag met gunstige stamcel topicale en optimale mechanische sterkte, is de cellaag gekweekt...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol rapporteert een efficiënte methode voor de bouw van een meerdere lagen MSC blad. Deze cellaag vertoont optimale mechanische sterkte, hoge celdichtheid seeding en gunstige stamcel topicale. BMSCs als een voorbeeld gebruikt, is de 3D celstructuur snel gebouwd met RAD16-ik peptide hydrogel. Na wordt gekweekt in het dynamische perfusie-systeem, het meerdere lagen BMSC blad met succes wordt verkregen en de BMSCs handhaven een hoog expressie van markeringen in een cel van de stam.

Bouw ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (subsidie nummer 31771064); de wetenschap en de technologie Planning Project van de provincie Guangdong (subsidie nummers 2013B010404030, 2014A010105029 en 2016A020214012); de wetenschap en de technologie Planning Project van Guangzhou (subsidie nummer 201607010063); en de Undergraduate innovatie en ondernemerschap trainingsprogramma (subsidie nummer 201610559028); de National Science Foundation voor jonge wetenschappers van China (verlenen nummer 31800819).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Phospholipase A2Sigma-AldrichP6534
Sodium deoxycholateSigma-AldrichD6750-100G
Phosphate bufferGibco BRL89033
Penicillin streptomycin / amphotericin Gibco BRL15640055
Buffer bicarbonateSigma-AldrichC3041
Table concentratorChangzhou Aohua Instrument Co.KT20183
Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)Corning Cellgro10-014-CVR
South American fetal bovine serum Gibco BRL10270-106/P30-3302
L-GlutamineCorning Cellgro25-005-CI
0.25% Trypsin/2.21 mM EDTACorning Cellgro25-053-CI
Biosafety cabinetEsco,SingaporeAC2-2S1
Constant temperature incubator Esco,SingaporeCLS-170B-8
Centrifuge tube Corning430790
EP tubeAxygen31617934
Centrifugal machineTOMOS1-16R 
SucroseSigma-AldrichS9378-500G
Pura Matrix BD354250
Dynamic perfusion culture systemMinucells and MinutissueD-93077
Peristaltic pumpIsmatecIPC N8
Pump tubingIsmatecNr.1306
MINUSHEET 1300 Regensburgweefseldragercomponenten 
MINUSHEETRegensburgdynamisch perfusiesysteem 
MINUSHEET 0006Regensburggaswisselingsapparatuur 
MINUSHEET 0002Regensburg500 mL glazen fles 
MINUSHEET 1301perfusiecultuurcontainer 

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Miyahara, Y., et al. Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction. Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).
  2. Narita, T., et al. The use of cell-sheet technique eliminates arrhythmogenicity of skeletal myoblast-based therapy to the heart with enhanced therapeutic effects. International Journal of Cardiology. 168 (1), 261-269 (2013).
  3. Narita, T., et al. The Use of Scaffold-free Cell Sheet Technique to Refine Mesenchymal Stromal Cell-based Therapy for Heart Failure. Molecular Therapy. 21 (4), 860-867 (2013).
  4. Matsuo, T., et al. Efficiently Piled-Up Cardiac Tissue-Like Sheets With Pluripotent Stem Cell-Derived Cells Robustly Promotes Cell Engraftment and Ameliorates Cardiac Dysfunction After Myocardial Infarction. Circulation. 128 (22), (2013).
  5. Alshammary, S., et al. Impact of cardiac stem cell sheet transplantation on myocardial infarction. Surgery Today. 43 (9), 970-976 (2013).
  6. Chen, G. P., et al. The use of a novel PLGA fiber/collagen composite web as a scaffold for engineering of articular cartilage tissue with adjustable thickness. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67a (4), 1170-1180 (2003).
  7. Cerqueira, M. T., et al. Human Adipose Stem Cells Cell Sheet Constructs Impact Epidermal Morphogenesis in Full-Thickness Excisional Wounds. Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).
  8. Sasagawa, T., Shimizu, T., Sekiya, S., Yamato, M., Okano, T. Comparison of angiogenic potential between prevascular and non-prevascular layered adipose-derived stem cell-sheets in early post-transplanted period. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (2), 358-365 (2014).
  9. Ishii, M., et al. Multilayered adipose-derived regenerative cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for myocardial infarction. International Journal of Cardiology. 175 (3), 545-553 (2014).
  10. Godier-Furnemont, A. F., et al. Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).
  11. Liu, Y., et al. Electrospun nanofibrous sheets of collagen/elastin/polycaprolactone improve cardiac repair after myocardial infarction. American Journal of Translational Research. 8 (4), 1678-1694 (2016).
  12. Arana, M., et al. Epicardial delivery of collagen patches with adipose-derived stem cells in rat and minipig models of chronic myocardial infarction. Biomaterials. 35 (1), 143-151 (2014).
  13. Wang, Y., et al. Preparation of high bioactivity multilayered bone-marrow mesenchymal stem cell sheets for myocardial infarction using a 3D-dynamic system. Acta Biomaterialia. 72, 182-195 (2018).
  14. Wu, Z., et al. The use of phospholipase A(2) to prepare acellular porcine corneal stroma as a tissue engineering scaffold. Biomaterials. 30 (21), 3513-3522 (2009).
  15. Degano, I. R., et al. The effect of self-assembling peptide nanofiber scaffolds on mouse embryonic fibroblast implantation and proliferation. Biomaterials. 30 (6), 1156-1165 (2009).
  16. Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. Building stem cell niches from the molecule up through engineered peptide materials. Neuroscience Letters. 519 (2), 138-146 (2012).
  17. Cui, X. J., et al. Transplantation of Mesenchymal Stem Cells with Self-Assembling Polypeptide Scaffolds Is Conducive to Treating Myocardial Infarction in Rats. Tohoku Journal of Experimental Medicine. 222 (4), 281-289 (2010).
  18. Jun, I., et al. Spatially Assembled Bilayer Cell Sheets of Stem Cells and Endothelial Cells Using Thermosensitive Hydrogels for Therapeutic Angiogenesis. Advanced Healthcare Materials. 6 (9), (2017).
  19. Chen, C. H., et al. Porous tissue grafts sandwiched with multilayered mesenchymal stromal cell sheets induce tissue regeneration for cardiac repair. Cardiovascular Research. 80 (1), 88-95 (2008).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Mesenchymal Stem Cell Sheet3D Dynamic Culture SystemDecellularized Porcine PericardiumBone Marrow Mesenchymal Stem CellsRAD16 I Peptide HydrogelDynamic Perfusion SystemCell Sheet ScaffoldStem Cell BioactivityMultilayered Cell StructureStem Cell Viability

Gerelateerde artikelen