Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo

8.3K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/58660

⸱

5 februari 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Ministry of Education for Developmental Genes & Human Diseases, Institute of Life Sciences and School of Medicine, Southeast University, 2State Key Laboratory of Bioelectronics, Jiangsu Key Laboratory for Biomaterials & Devices, School of Biological Science & Medical Engineering, Southeast University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Beschrijven we een methode van het gebruik van polyethyleneimine (PEI)-gecoat superparamagnetische ijzeroxide nanodeeltjes voor transfecting macrofagen met siRNA. Deze nanodeeltjes kan efficiënt siRNA leveren aan macrofagen in vitro en in vivo en stilte doel genexpressie.

Samenvatting

Vanwege hun cruciale rol bij het reguleren van de immuunrespons, macrofagen hebben voortdurend onderwerp geweest van intensief onderzoek en vertegenwoordigen een veelbelovend therapeutisch doel in vele aandoeningen, zoals kanker, auto-immune ziekten en atherosclerose. RNAi-gemedieerde gene zwijgen is een waardevolle benadering van keuze sonde te manipuleren macrofaag functie; echter de transfectie van macrofagen met siRNA wordt vaak beschouwd als worden technisch uitdagende en paar methodologieën gewijd aan de overdracht van siRNA aan macrofagen zijn momenteel beschikbaar. Hier presenteren we een protocol superparamagnetische ijzeroxide polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes (PEI-SPIONs) te gebruiken als een voertuig voor de beoogde levering van siRNA aan macrofagen. PEI-SPIONs zijn in staat van bindende en volledig condenserend siRNA wanneer de gewichtsverhouding Fe: siRNA 4 bereikt en hoger. In vitro, deze nanodeeltjes kan efficiënt leveren siRNA in primaire macrofagen, alsmede in de macrofaag-achtige RAW 264.7 cellijn, zonder afbreuk te doen aan levensvatbaarheid van de cellen in de optimale dosis voor transfectie, en, uiteindelijk, ze veroorzaken siRNA-gemedieerde doel gene zwijgen. Naast wordt gebruikt voor in vitro siRNA transfectie, vormen PEI-SPIONs ook een veelbelovende instrument voor het leveren van siRNA macrofagen in vivo. Met het oog op de gecombineerde functies van magnetische eigenschap en het gen-zwijgen vermogen, worden systemisch toegediende PEI-SPION/siRNA deeltjes verwacht niet alleen te moduleren macrofaag functie, maar ook om macrofagen image gemaakt en bijgehouden worden. Kortom, PEI-SPIONs een eenvoudige, veilige en effectieve nonviral platform voor siRNA levering aan macrofagen vertegenwoordigen zowel in vitro als in vivo.

Inleiding

Macrofagen zijn een soort aangeboren immuun cellen verdeeld in alle weefsels van het lichaam, zij het in verschillende hoeveelheden. Door overlegging van een verscheidenheid van cytokines en andere bemiddelaars, zij een kritische rol spelen in de verdediging van de gastheer tegen invasie microbiële ziekteverwekkers, weefselherstel na verwonding en bij het handhaven van de weefsel homeostase1. Macrofagen zijn vanwege hun belang, voortdurend het onderwerp van intensief onderzoek. Ondanks de prevalentie in genregulatie en functie studies, siRNA-gemedieerde gene zwijgen is echter minder kans om te slagen in macrofagen, omdat deze cellen — met name primaire macrofagen — zijn vaak moeilijk te transfect. Dit kan worden toegeschreven aan een relatief hoge mate van toxiciteit meest gevestigde transfectie benaderingen waarin het celmembraan chemisch is is gekoppeld (bijvoorbeeldmet polymeren en lipiden) of fysiek (bijvoorbeelddoor electroporation en Gene geweren) verstoord te laten siRNA moleculen Kruis het membraan, daardoor drastisch verminderen van2,3van de levensvatbaarheid van de macrofagen. Macrofagen zijn bovendien speciale fagocyten rijk aan afbraakroutes enzymen. Deze enzymen kunnen schade aan de integriteit van siRNA, verzwakken haar silencing efficiëntie zelfs als gen-specifieke siRNA is afgeleverd in de cel3,4. Daarom moet een effectieve macrofaag-gerichte siRNA delivery systeem ter bescherming van de integriteit en stabiliteit van siRNA tijdens levering4.

Het wordt steeds duidelijker dat disfunctionele macrofagen zijn betrokken bij het opzetten en de progressie van bepaalde gemeenschappelijke klinische stoornissen zoals auto-immune ziekten, kanker en atherosclerose. Om deze reden, modulerende macrofaag functie met, bijvoorbeeld, siRNA, is ontstaan als een aantrekkelijke methode voor de behandeling van deze stoornissen5,6,7. Hoewel veel vooruitgang is geboekt, is een grote uitdaging van siRNA gebaseerde behandeling strategie de specificiteit van de arme cel van systemisch toegediende siRNA en de onvoldoende siRNA ICT door macrofagen, die bijgevolg tot ongewenste bijwerkingen leiden. In vergelijking met gratis nucleïnezuur therapeutics die meestal geen optimale cel selectiviteit en leiden vaak tot uit-target bijwerkingen, drug-geladen nanodeeltjes (NPs), vanwege hun spontane neiging van worden gevangen door het reticuloendotheliaal systeem, kan worden ontworpen voor passieve targeting macrofagen in vivo, waardoor verbeterde therapeutische effectiviteit met minimale bijwerkingen8. Huidige NPs onderzocht voor de levering van molecules van RNA omvatten anorganische nanocarriers en verschillende liposomen polymeren9. Onder hen toont polyethyleneimine (PEI), een type van kationische polymeren staat bindend en nucleïnezuren condenserend in gestabiliseerde NPs, de hoogste RNA capaciteit9,10te leveren. PEI nucleïnezuren beschermt tegen aantasting van het enzymatische en nonenzymatic hun overdracht bemiddelt tussen de celmembranen en bevordert hun intracellulaire vrijlating. Hoewel aanvankelijk geïntroduceerd als een DNA levering reagens, PEI bleek later een aantrekkelijk platform voor in vivo siRNA levering, hetzij lokaal of systemisch9,10.

Superparamagnetische ijzeroxide nanodeeltjes (SPIONs) hebben aangetoond grote belofte in de medische biologie, vanwege hun magnetische eigenschappen, biocompatibiliteit, vergelijkbare grootte op biologisch belangrijke objecten, hoge oppervlakte-gebied-te-volumeverhouding, en gemakkelijk aan te passen oppervlak voor bioagent bijlage11. Bijvoorbeeld, vanwege hun potentiële nut als contrast agent en snelle opname door macrofagen, zijn SPIONs ontstaan als een favoriete klinische instrument om beeld weefsel macrofagen12. Terwijl de SPIONs zijn ook uitvoerig bestudeerd als nucleïnezuur levering voertuigen11,13,14,15, om onze kennis, bevat de literatuur weinig rapporten van SPIONs als een drager voor macrofaag-gerichte siRNA levering. Voor de levering van het gen door SPIONs, is hun oppervlak meestal bekleed met een laag van hydrofiel kationische polymeren waarop negatief geladen nucleic zuren kunnen worden via een elektrostatisch proces aangetrokken en vastgebonden. Hier presenteren we een methode voor de synthese van SPIONs waarvan oppervlak wordt gewijzigd met laag-moleculair-gewicht (10 kDa), vertakte PEI (PEI-SPIONs). Deze magnetische nanoplatforms zijn dan aangewend om te condenseren siRNA, vorming van PEI-SPION/siRNA complexen waarmee siRNA vervoer in de cel. We reden dat spontane fagocytose van SPIONs door de cellen van de reticuloendotheliaal systeem16, in combinatie met het sterke vermogen van bindende en PEI-SPIONs geschikt voor het efficiënte vervoer van siRNA in condenserend nucleic zuren door PEI, maakt macrofagen. De hier gepresenteerde gegevens ondersteunen de haalbaarheid PEI-SPION/siRNA-gemedieerde gene monddood maken in macrofagen in cultuur, alsmede in vivo.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle methoden waarbij levende dieren werden uitgevoerd overeenkomstig het dier zorg en gebruiken van richtsnoeren voor het zuidoosten Universiteit, China.

1. bereiding van PEI-SPIONs

  1. Voorbereiding van oliezuur gemodificeerde SPIONs
    1. Los FeCl3•6H2O en FeSO4•7H2O in water onder de bescherming van N2.
      1. Voeg 28 g FeCl3•6H2O en 20 g FeSO4•7H,2O in 80 mL gedeïoniseerd water in een bekerglas. N2 introduceren in het water door een glazen buis en roer tot de vaste stof is opgelost.
      2. Verwarm het reactiemengsel tot 72 ° C in een opzwepende tempo van 800 rpm, gevolgd door toevoeging van 40 mL ammonia water (28%). Roer gedurende 5 min.
    2. Voeg 9 mL oliezuur ontkleuring in de bovengenoemde oplossing en roer het bij 72 ° C gedurende 3 uur.
    3. Koel de oplossing op kamertemperatuur (RT). Het neerslaan van de oplossing via magnetische scheiding.
    4. Was het neerslag met SPIONs 3 x met absolute ethylalcohol en, vervolgens, het verspreiden van het precipitaat op in 100 mL N-hexaan.
  2. Voorbereiding van dimercaptosuccinic zuur gemodificeerde SPIONs
    1. Toevoegen van 800 mg oliezuur (OA)-gewijzigd SPIONs verspreid in 200 mL N-hexaan en 400 mg dimercaptosuccinic zuur (DMSA), gedispergeerd in 200 mL aceton, in een drie-nek maatkolf in een waterbad bij 60 ° C.
      Opmerking: Om te bepalen van de concentratie van OA gemodificeerde SPION verkregen uit de vorige stap, neem een klein volume (b.v. 1 mL) van de SPION dispersie, vormen de N-hexaan en weegt het resulterende poeder.
    2. Voeg 200 µL van triethylamine ontkleuring in de bovengenoemde oplossing met roeren bij 1000 omwentelingen per minuut en maagzuur.
    3. Na 5 h van roeren en maagzuur, krijgt u een zwarte neerslag door magnetische scheiding.
    4. De hydrofiele SPIONs in gedeïoniseerd water homogeen verspreiden door de pH van de oplossing met behulp van tetramethylammoniumhydroxide aan te passen.
  3. Voorbereiding van PEI-SPIONs
    1. Toevoegen van de SPION DMSA-bewerkt colloïdale oplossing ontkleuring in PEI oplossing (10 kDa) in een maatkolf van 500 mL drie-nek onder mechanische roeren bij 1000 omwentelingen per minuut gedurende 2 uur (WFe: WPEI = 1:3).
      Opmerking: De kosten en de grootte van PEI-SPIONs afhankelijk van de verhouding van WFe naar WPEI. De W-Fe: WPEI verhouding van 1:3 kan een goed uitgangspunt voor de synthese van PEI-SPIONs geschikt voor siRNA levering.
    2. Toevoegen van de resulterende oplossing in een buis van de ultrafiltratie met een molecuulgewicht cutoff van 100 kDa en een inhoud van 15 mL; vervolgens, centrifuge op 5400 x g gedurende 10 minuten totdat de resterende oplossing 1 mL is. Voeg gedeïoniseerd water toe aan de oplossing voor het maken van het volume 15 mL opnieuw en herhaal het bovenstaande proces 10 x te verkrijgen van het eindproduct. Vervolgens, filtreer de oplossing door een filter van 0.22-μm en slaan het eindproduct bij 4 ° C.
    3. Bepaal de concentratie van de Fe van PEI-SPIONs door de colorimetrische methode met behulp van phenanthroline17. PEI-SPIONs met gedeïoniseerd steriel water tot een concentratie van 1 mg Fe/mL verdund en op te slaan bij 4 ° C.
    4. Verdun 10 μL van de PEI-SPION oplossing (1 mg Fe/mL) tot 1 mL met gedeïoniseerd water; vervolgens test de hydrodynamische grootte en zeta potentiële door een dynamische licht-verstrooiing apparaat.
      Opmerking: Bereiden PEI-SPIONs in het bereik van ongeveer 30-50 nm. In deze grootte lijkt het effect van de NP-grootte op siRNA bindende en cellulaire opname niet significant te zijn. PEI-SPIONs rekening houdend met een gemiddelde zeta potentieel meer dan +37 mV kan giftige in het dosisinterval voor transfectie, en een bepaling van de cytotoxiciteit moet worden uitgevoerd om veiligheid te garanderen. De oppervlakte lading en hydrodynamische grootte van de nanodeeltjes kunnen een gewenste bereik worden bestuurd door de PEI-inhoud aan te passen.

2. voorbereiding en Agarose de Elektroforese van het Gel van PEI-SPION/siRNA NPs

  1. Verdunde siRNA met RNase-gratis water tot het opleveren van een eindconcentratie van 20 μM (0,26 μg/l).
  2. Vijf RNase-vrije microcentrifuge buizen label 0, 1, 2, 4 en 8 voorbereiden. De etiketten vertegenwoordigen verschillende Fe: siRNA gewicht ratio's. Pipetteer 3 μL van siRNA oplossing voor alle buizen (~0.8 μg van siRNA/buis).
  3. 0, 0.8, 1.6, 3.2 en 6,4 μg Fe in de vorm van PEI-SPIONs aan de buizen met 0, 1, 2, 4 en 8, respectievelijk het label toevoegen. Houd het volume van de totale steekproef voor elke buis minder dan 20 μL. Meng door zachtjes op en neer pipetteren.
  4. Incubeer de mengsels op RT gedurende 30 minuten om PEI-SPION/siRNA complexvorming. Tijdens deze periode, maken een 3% agarose gel met hoge zuiverheid agarose.
    Opmerking: Extra PEI-SPION/siRNA complexen met andere Fe: siRNA ratio's (b.v.5 of 6) kunnen worden voorbereid en getest.
  5. Voeg 1 μl van 6 x DNA-laden buffer per 5-μL monster en meng voorzichtig. Laden van alle monsters en draaien van elektroforese op 5 V/cm totdat het bromophenol blauw zoveel tweederde van de lengte van de gel migreert. Vlek de gel met ethidiumbromide (EB) voor 15-20 min.
    Opmerking: Vers bereide elektroforese buffer en EB oplossing moeten worden gebruikt.
  6. Visualiseren van siRNA banden onder een UV-imaging systeem. Controle van de Fe: siRNA verhoudingen op welke siRNA vormen complexen met PEI-SPIONs en, dientengevolge, de bands vertegenwoordigen gratis siRNA zijn achtergebleven of niet aantoonbaar.

3. de transfectie van RAW264.7 macrofagen In Vitro

  1. Cultuur muis macrofaag-achtige RAW264.7 cellen in een 10-cm schotel met behulp van DMEM voltooien gemiddeld met 10% foetale runderserum (FBS) per 100 U/mL penicilline per 100 μg/mL streptomycine bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator.
  2. Een dag voorafgaand aan de transfectie, gecombineerd worden overgedragen door de cellen en spoel ze af met fosfaat gebufferde zoutoplossing (pH 7.4). Voeg 1 mL trypsine van 0,25% naar de 10-cm schotel. Trypsinize RAW264.7 cellen voor ongeveer 5-10 minuten bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator.
  3. Wanneer de meerderheid van de cellen hebben losgekoppeld (na 5-10 min), voeg 5 mL van DMEM compleet medium naar de schotel naar de inactivering van de trypsine. Pipetteer omhoog en omlaag te verspreiden van cel clusters in afzonderlijke cellen.
  4. De celsuspensie overbrengen in een steriele 15 mL conische buis. Centrifugeer het bij 300 x g gedurende 3 minuten op RT. Verwijder de bovendrijvende substantie.
  5. Resuspendeer de cellen met 5 mL verse DMEM volledige voedingsbodem en cellen tellen.
  6. Plaat 9 x 104 cellen per goed in een 6-well plaat met 2 mL van volledige DMEM medium en Incubeer bij 37 ° C in een 5% CO2 incubator gedurende ongeveer 24 uur.
    Opmerking: Als een plaat van een verschillende grootte, de vergulde celdichtheid in verhouding tot de relatieve oppervlakte zodanig aanpassen dat de cellen 80% confluentie ten tijde van de transfectie bereiken.
  7. Als cel confluentie is 80%, het medium van de cellen verwijderen en vervangen door 1 mL van de volledige medium DMEM per putje. Terug de plaat naar de incubator totdat PEI-SPION/siRNA complexen zijn opgesteld en klaar voor gebruik (ongeveer 30 min zijn).
  8. Bereiden van PEI-SPION/siRNA complexen: berekent het bedrag van PEI-SPION/siRNA complexen die nodig zijn voor een experiment van de transfectie. Meng in een 1.5-mL RNase-vrije microcentrifuge buis, een passend bedrag van PEI-SPIONs met siRNA bij een bepaalde Fe: siRNA verhouding. Bijvoorbeeld, ter voorbereiding van PEI-SPION/siRNA NPs met 100 µg Fe bij een Fe: siRNA-verhouding van 4, voeg 100 µL (1 mg Fe/mL) van PEI-SPIONs tot 96 μL van siRNA (0,26 μg/l), gevolgd door het mengen zachtjes met een micropipet. Incubeer gedurende 30 min op RT.
    Opmerking: Bereiden een volume van PEI-SPION/siRNA complex dat is 10% meer dan de totale definitieve massa aan account voor eventuele incidentele verliezen. Maak PEI-SPION/siRNA complexen op lage Fe: siRNA ratio's, waaronder siRNA moleculen zijn volledig geladen op PEI-SPIONs en, vandaar, kleine hoeveelheden PEI-SPIONs kunnen worden gebruikt om te minimaliseren van potentiële cytotoxiciteit. Proefprojecten (gel retardatie assay) voor de optimalisatie van de Fe: siRNA verhouding zijn noodzakelijk.
  9. Nemen de 6-well plaat boven de incubator (stap 3.7). Een vereiste volume van PEI-SPION/siRNA complex ontkleuring toevoegen aan elk putje en swirl van de plaat voorzichtig zodat een gelijkmatige verdeling. Terug de plaat naar de incubator tot de beoordeling van de cellulaire opname of gene vechtpartij efficiëntie (1-3 d).
    Opmerking: Transfecting macrofagen met PEI-SPION/siRNA bij een concentratie van ~ 15 μg Fe/mL kunnen transfectie efficiëntie maximaliseren terwijl het minimaliseren van potentiële cytotoxiciteit.

4. systemische levering van siRNA aan macrofagen in ratten met experimentele artritis

  1. Het verkrijgen van specifieke pathogenen vrije mannelijke Wistar ratten die 7 oud weken. Koeien de rats voor 7 d vóór gebruik en hen te voorzien van voldoende voedsel en water. Induceren adjuvans artritis (AA) in de rats als eerder beschreven18.
  2. PEI-SPION/siRNA complexen zoals beschreven in stap 3.8 voor te bereiden.
  3. Injecteren de PEI-SPION/siRNA NPs (0.3 mg van siRNA/kg) in de AA ratten via de ader van de staart. Beoordelen de cellulaire opname via, bijvoorbeeld stroom cytometry weefsel ook via, bijvoorbeeld, een real-time fluorescentie imaging systeem, of therapeutische effecten op basis van, bijvoorbeeld, radiografische, klinische en histologische analyses op gewenste tijdstip punten18.
    Opmerking: Voor cellulaire en weefsel ook studies, behandelen de ratten met een enkele injectie van de gewenste NPs; voor therapeutische studies, de ratten te injecteren met de NPs geteste 1 x per week gedurende drie opeenvolgende weken.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

De grootte en de zeta potentieel van PEI-SPIONs bereid met dit protocol werden in het bereik van 29-48 nm (polydispersiteit index: 0.12 - 0.23) en 30-48 mV, respectievelijk. Ze waren stabiel in water bij 4 ° C voor meer dan 12 maanden zonder duidelijk aggregatie. Om te beoordelen hun siRNA bindend vermogen, waren PEI-SPIONs gemengd met siRNA op verschillende Fe: siRNA gewicht verhoudingen. Figuur 1 laat zien dat wanneer de gewichtsverhouding Fe: siRNA bereikt...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Macrofagen zijn vuurvast tot transfect door veelgebruikte nonviral benaderingen, zoals electroporation, kationische liposomen, en lipide-soorten. Hier beschreven we een betrouwbare en efficiënte methode om transfect van macrofagen met siRNA. Met behulp van het huidige protocol, kunnen meer dan 90% van macrofaag-achtige RAW 264.7 cellen (figuur 2B) en rat peritoneale macrofagen18 zijn transfected met siRNA zonder aanzienlijke waardevermindering van de levensvatbaarheid...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gesteund door de nationale Natural Science Foundation van China (81772308) en de nationale sleutel onderzoek en ontwikkeling programma van China (nr. 2017YFA0205502).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMEMGibcoC11995500BTVerwarm in 37°C waterbad voor gebruik
Fetaal bovien serumGibcoA31608-02
Penicilline/streptomycine (1,5 ml)Gibco15140122
Tetrazolium-gebaseerde MTS-testkitPromegaG3582Voor cytotoxiciteitsanalyse
RAW 264.7-cellijnCell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, ChinaTCM13
Weefselkweekplaten (6-well)Corning3516
Weefselkweekschotels (10 cm)Corning430167
RNase-vrije buizen (1,5 ml)AXYGENMCT-150-C
Centrifugatubes (15 ml)Corning430791
TrypsineGibco25200-056
Wistar-rattenShanghai Experimental Animal Center of Chinese
Academy of Sciences
Bacillus Calmette–Guérin gevriesdroogd poederNational
Institutes for Food and Drug Control, China		voor het induceren van adjuvant artritis bij ratten
siRNAGenePharma (Shanghai, China)
Cy3-siRNARiboBio (Guangzhou, China)
Polyethyleenimidee (10 kDa)Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.E107079
AmmoniakwaterAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.A112077
OleaanzuurAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.O108484
DimethylsulfoxideAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D103272
FeSO4•7H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10012118
FeCl3•6H2OSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10011918
Dimercapto-succininezuurAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.D107254
UltrafiltratiebuisMilliporeUFC910096
TetramethylammoniumhydroxideoplossingAladdin Chemical Reagent Co., Ltd.T100882
Deeltjesgrootte en zetapotentiaal analyzerMalvern, EngelandNano ZS90

Referenties

  1. Murray, P. J., Wynn, T. A. Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723(2011).
  2. Maeß, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection. Journal of Visualized Experiments. (91), e51960(2014).
  3. Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. M. The Expression of Exogenous Genes in Macrophages: Obstacles and Opportunities. Macrophages and Dendritic Cells. , Springer. 123-143 (2009).
  4. Zhang, M., Gao, Y., Caja, K., Zhao, B., Kim, J. A. Non-viral nanoparticle delivers small interfering RNA to macrophages in vitro and in vivo. PLoS ONE. 10 (3), e0118472(2015).
  5. Davignon, J. -L., et al. Targeting monocytes/macrophages in the treatment of rheumatoid arthritis. Rheumatology. 52 (4), 590-598 (2012).
  6. Brown, J. M., Recht, L., Strober, S. The promise of targeting macrophages in cancer therapy. Clinical Cancer Research. 23 (13), 3241-3250 (2017).
  7. Karunakaran, D., et al. Targeting macrophage necroptosis for therapeutic and diagnostic interventions in atherosclerosis. Science Advances. 2 (7), e1600224(2016).
  8. Prosperi, D., Colombo, M., Zanoni, I., Granucci, F. Drug nanocarriers to treat autoimmunity and chronis inflammatory diseases. Seminars in Immunology. 34, 61-67 (2017).
  9. Höbel, S., Aigner, A. Polyethylenimines for siRNA and miRNA delivery in vivo. Wiley Interdisciplinary Reviews: Nanomedicine and Nanobiotechnology. 5 (5), 484-501 (2013).
  10. Whitehead, K. A., Langer, R., Anderson, D. G. Knocking down barriers: advances in siRNA delivery. Nature Reviews Drug Discovery. 8 (2), 129(2009).
  11. Liu, G., et al. N-Alkyl-PEI-functionalized iron oxide nanoclusters for efficient siRNA delivery. Small. 7 (19), 2742-2749 (2011).
  12. Weissleder, R., Nahrendorf, M., Pittet, M. J. Imaging macrophages with nanoparticles. Nature Materials. 13 (2), 125(2014).
  13. Magro, M., et al. Covalently bound DNA on naked iron oxide nanoparticles: Intelligent colloidal nano-vector for cell transfection. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-General Subjects. 1861 (11), 2802-2810 (2017).
  14. Abdelrahman, M., et al. siRNA delivery system based on magnetic nanovectors: Characterization and stability evaluation. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 106, 287-293 (2017).
  15. Zhang, H., Lee, M. -Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles. ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).
  16. Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice. Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).
  17. Harvey, A. E. Jr, Smart, J. A., Amis, E. Simultaneous spectrophotometric determination of iron (II) and total iron with 1, 10-phenanthroline. Analytical Chemistry. 27 (1), 26-29 (1955).
  18. Duan, J., et al. Polyethyleneimine-functionalized iron oxide nanoparticles for systemic siRNA delivery in experimental arthritis. Nanomedicine. 9 (6), 789-801 (2014).
  19. Fröhlich, E. The role of surface charge in cellular uptake and cytotoxicity of medical nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 7, 5577(2012).
  20. Wu, Y., et al. Ultra-small particles of iron oxide as peroxidase for immunohistochemical detection. Nanotechnology. 22 (22), 225703(2011).
  21. Xia, T., et al. Polyethyleneimine coating enhances the cellular uptake of mesoporous silica nanoparticles and allows safe delivery of siRNA and DNA constructs. ACS Nano. 3 (10), 3273-3286 (2009).
  22. Mocellin, S., Provenzano, M. RNA interference: learning gene knock-down from cell physiology. Journal of Translational Medicine. 2 (1), 39(2004).
  23. Courties, G., et al. et al.In vivo RNAi-mediated silencing of TAK1 decreases inflammatory Th1 and Th17 cells through targeting of myeloid cells. Blood. 116 (18), 3505-3516 (2010).
  24. Zolnik, B. S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. Minireview: nanoparticles and the immune system. Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).
  25. Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., Pérez-Yagüe, S., Morales, M. P., Barber, D. F. Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics. Biomaterials. 52, 494-506 (2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Tags

Aflevering van klein interfererend RNATransfectie van macrofagenIn vitro siRNA-afleveringIn vivo siRNA-afleveringSynthese van nanodeeltjesMagnetische scheidingFlowcytometrie-analyseGene silencing-assayBeoordeling van cellevensvatbaarheid
Ijzeroxide Polyethyleneimine-gecoate nanodeeltjes als een voertuig voor de levering van kleine Mengend RNA aan macrofagen In Vitro en In Vivo
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.