Methodenartikel

In Vitro differentiatie Model van menselijke normale B geheugencellen te langlevende plasmacellen

DOI:

10.3791/58929

⸱

20 januari 2019

 ,  ,  ,  , 
1IGH, CNRS, Univ Montpellier, 2Laboratory for Monitoring Innovative Therapies, Department of Biological Hematology, CHU Montpellier, 3UFR de Médecine, Univ Montpellier

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Met behulp van scriptingregel cultuur systemen, wij brengen verslag een in vitro B-cel plasma cel differentiatie model.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Plasmacellen (PCs) grote hoeveelheid antilichamen afscheiden en ontwikkelen van B-cellen die zijn geactiveerd. PC's zijn van zeldzame cellen zich in het beenmerg of de mucosa en zorgen Humorale immuniteit. Vanwege hun lage frequentie en de locatie, de studie van PC's is moeilijk in de mens. We gemeld een B naar PC in-vitro differentiatie model met behulp van geselecteerde combinaties van cytokinen en activering moleculen die toestaan om te reproduceren de sequentiële celdifferentiatie optreedt in vivo. In deze in vitro model geheugen B cellen (MBCs) zal onderscheiden in pre plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs), vroeg PC's en ten slotte in langlevende Kortbij PC's, met een fenotype hun tegenhangers in gezonde individuen. Ook bouwden we een open toegang bioinformatica tools voor het analyseren van de meest prominente informatie van GEP gegevens met betrekking tot differentiatie van de PC. Deze middelen kunnen worden gebruikt voor het bestuderen van de menselijke B PC differentiatie en in de huidige studie, we onderzocht de expressie genregulatie epigenetische factoren tijdens menselijke B naar PC differentiatie.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De differentiatie van B-cellen tot plasmacellen (PCs) is essentieel voor de Humorale immuniteit en beschermen van de host tegen infecties1. B bij PC differentiatie wordt geassocieerd met grote veranderingen in de transcriptie capaciteit en metabolisme geschikt voor tot antilichaam secretie. De transcriptiefactoren waarmee B naar PC differentiatie zijn uitvoerig bestudeerd en geopenbaarde exclusieve netwerken met inbegrip van B - en PC-specifieke transcriptie factoren (TFs)2. In de B-cellen zijn PAX5, BCL6 en BACH2 TFs de hoeders van de B-cel identiteit2,3. Inductie van IRF4, PRDM1 BLIMP1 en XBP1 PC TF-codering zal uitdoven van B-cel genen en veroorzaken een gecoördineerde antilichaam-afscheidende cellen transcriptionele programma3,4,5. Deze gecoördineerde transcriptionele veranderingen worden geassocieerd met de activering van de transcriptie van Ig genen samen met een verschuiving van de membraan-gebonden vorm naar de secreted vorm van de immunoglobuline zware ketting2,3, 4. B bij de differentiatie van de PC is verbonden met inductie van genen betrokken bij endoplasmatisch reticulum en Golgi-apparaat functioneert gelijktijdige met ongevouwen eiwitten reactie (UPR) activering bekend dat spelen een sleutelrol in de PC door tegemoet te komen aan de synthese van uitgescheiden immunoglobulinen6,7. De TF-XBP1 speelt een belangrijke rol in deze cellulaire aanpassing8,9,10.

B-cellen en PC's zijn de hoofdrolspelers van de Humorale immuniteit. Inzicht in de biologische processen die controle de productie en het voortbestaan van normale plasmacellen is cruciaal in therapeutische interventies die moeten zorgen voor efficiënte immuunrespons en autoimmuniteit of immuun-deficiëntie te voorkomen. PC zijn zeldzame cellen met vroege stadia van de differentiatie plaatsvindt in anatomische locaties die volledige biologische karakterisering, met name in de mens belemmeren. Met behulp van scriptingregel cultuur systemen, hebben we een in vitro B gemeld aan PC differentiatie model. Dit model reproduceert de sequentiële celdifferentiatie en rijping die zich voordoen in de verschillende organen in vivo11,12,13. In een eerste stap, geheugencellen B zijn voor het eerst activeerde voor vier dagen door de combinatie van interactie CD40-ligand, oligodeoxynucleotides en cytokine en onderscheid maken in preplasmablasts (PrePBs). In een tweede stap, preplasmablasts om te differentiëren in plasmablasts (PBs) veroorzaakt door het verwijderen van CD40L en oligodeoxynucleotides stimulatie en de combinatie van cytokine te wijzigen. In een derde stap, worden plasmablasts veroorzaakt om te differentiëren in vroege PC's door het veranderen van de cytokine combinatie11,12. Een vierde stap werd geïntroduceerd om volledig volwassen PC's door het kweken van deze vroege PC's met beenmerg stromale cellen geconditioneerd medium of geselecteerde groeifactoren13. Deze volwassen PC's kunnen enkele maanden in vitro overleven en afscheiden van hoge bedragen van immunoglobuline (Figuur 1). Interessant is dat recapituleert ons in vitro model de gecoördineerde transcriptionele veranderingen en het fenotype van de verschillende stadia van de PC die gevonden in vivo11,12,13,14 worden kan B ,15. PC's zijn zeldzame cellen en onze in-vitro differentiatie-model maakt het mogelijk om de studie van de menselijke B naar PC differentiatie.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het protocol volgt de richtsnoeren overeenkomstig de verklaring van Helsinki en de overeenkomst van de Montpellier Universiteit ziekenhuis centrum voor biologische hulpbronnen.

1. in Vitro normaal Plasma cel differentiatie Model

Opmerking: PC's worden gegenereerd door middel van een vier-stappen cultuur11,12,13.

  1. Versterking van de b-cel en differentiatie
    1. Perifere bloedcellen van gezonde vrijwilligers voor geheugen zuivering van de B-cel gebruiken
    2. Verdun 7,5 mL bloed met 24,5 mL van RPMI 1640 medium.
    3. 12,5 mL van kamertemperatuur dichtheid verloop (bijvoorbeeld densiteitgradiënt) toevoegen aan een steriele 50 mL conische buis. Zachtjes bedekken het verloop van de dichtheid met de 32 mL verdunde bloed. Minimaliseer het mengen van de twee fasen.
    4. Centrifugeer 20 min op 500 x g met de rem af. De PBMCs te verzamelen vanuit de kleurovergang verdunde plasma/dichtheid-interface en de cellen in een steriele 50 mL-buis te plaatsen en een volledige tot 45 mL met Henks evenwichtige zoutoplossing.
    5. De cellen gedurende 5 minuten bij 500 x gcentrifugeren. Verwijder het supernatant voorzichtig en houden de pellet.
    6. 45 mL RPMI1640/10% foetaal kalfsserum (FCS) en centrifuge 5 min op 500 x gtoevoegen. Verwijder het supernatant voorzichtig en houden de pellet. Voeg 30 mL PBS/2% FCS.
    7. Het verwijderen van CD2 + cellen met behulp van anti-CD2 magnetische kralen. 4 kralen voor een doelcel toevoegen. Incubeer 30 min bij 4 ° C.
      1. Afzonderlijke cellen van de kraal-gebonden uit niet-afhankelijke cellen met behulp van een magneet voor cel scheiding toepassing. Verzamelen van niet-afhankelijke cellen en de cel pellet met anti CD19 APC en anti-CD27 PE antilichamen Incubeer gedurende 15 minuten bij 4 ° C (2 µL van antilichamen tegen 106 cellen).
      2. Wassen tweemaal in PBS/10% geit serum.
      3. Verwijderen van contaminerende gebeurtenissen op zowel FSC als SSC percelen. Plot onderhemden op FSC-A vs FSC-H en WS-A vs DIE SSC-H percelen te verwijderen van puin en schakel de leukocyten van de totale bevolking. Selecteer geheugencellen B op CD19/CD27 en CD19+CD27+.
      4. Zuiveren MBCs sorteerder van een cel met een zuiverheid van 95%.
    8. Voer alle stappen van de cultuur met behulp van IMDM en 10% FCS, aangevuld met 50 mg/mL menselijke transferrine en 5 mg/mL menselijke insuline.
    9. Plaat gezuiverd MBCs in zes-well cultuur platen (1,5 x 105 MBCs/mL in 5 mL/putje), voor 4 dagen, met IL-2 (20 U/mL), IL-10 (50 ng/mL), en IL-15 (10 ng/mL).
      1. Toevoegen van Phosphorothioate apr ODN 2006, histidine-gelabelde recombinante menselijke oplosbare CD40L (sCD40L; 50 ng/mL) en anti-polyhistidine mAb (5 mg/mL) voor MBCs activering (Figuur 1). Activering door sCD40L of ODN alleen met de dezelfde cytokine cocktail levert aan lagere amplificatie12. De combinatie van activering signalen beschreven hier gelode aan het maximale aantal geactiveerd B-cellen en PrePBs11,12 (Figuur 1).
      2. Voor gen expressie profilering, zuiveren CD38-/CD20- PrePBs, op dag 4, met behulp van een cel sorter (Figuur 2).
  2. Plasmablastic cel generatie
    1. Op dag 4, door de cellen te tellen.
    2. De cellen van de plaat in 12-well cultuur platen op 2.5 x 105/mL in 2 mL/putje.
    3. Induceren van differentiatie door verwijdering van CpG oligonucleotides en sCD40L en de toevoeging van een nieuwe kweekmedium met een nieuwe cytokine cocktail met inbegrip van IL-2 (20 U/mL), IL-6 (50 ng/mL), IL-10 (50 ng/mL) en IL-15 (10 ng/mL) (Figuur 1). Cultuur cellen voor 3 dagen (van dag 4 tot dag 7) bij 37 ° C.
    4. Voor gen expressie profilering, zuiveren CD38+/CD20- PBs, op dag 7, met behulp van een cel sorter (Figuur 2).
  3. Vroege plasma cel generatie
    1. Op dag 7, door de cellen te tellen.
    2. Plaat van de cellen in 12-well cultuur platen op 5 x 10,5/mL in 2 mL/goed.
    3. Onderscheiden van PB in vroege PC's verse kweekmedium met IL-6 (50 ng/mL), IL-15 (10 ng/mL) en IFN-α (500 U/mL) voor 3 dagen bij 37 ° C. Voor gen expressie profilering, zuiveren CD20-/CD38+/CD138+ vroege PC's, op dag 10, met behulp van een cel sorter (Figuur 2).
  4. Langlevende plasma cel generatie
    1. Differentiëren vroege PCs in lang leefde PC's door het veranderen van de cultuuromstandigheden.
    2. Cultuur van de cellen in 12-well cultuur platen op 5 x 10,5/mL in 2 mL/goed of in 24-well cultuur platen in 1 mL/goed bij 37 ° C, met behulp van IL-6 en stromale cellen geconditioneerd medium en APRIL (200 ng/mL).
    3. Verkrijgen stromale cel-geconditioneerd medium door het kweken van stromale cellen voor 5 dagen met kweekmedium. Filter de stromale celcultuur supernatant (0,2 µm) en bevriezen.
    4. Elke week 50% van stromale cel-geconditioneerd media aan PC culturen met vernieuwing toevoegen. Gegenereerde langlevende PCs kunnen worden gehandhaafd voor maanden13. Overleving op lange termijn van PC's zouden kunnen worden verkregen met IL-6 en APRIL alleen als gerapporteerde13.
    5. Maatregel Ig secretie van stroom cytometry gesorteerd op PC's.
    6. PC's op 106 cellen/mL gedurende 24 uur cultuur en oogst supernatant van cultuur. IgG- en IgA met behulp van menselijke enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits11,12,13te meten. De mediane IgG secretie varieerden van 10 pg/cel/dag op dag 10 tot en met 17 pg/cel/dag op dag 6013.

2. moleculaire Atlas van B naar PC differentiatie

Opmerking: We bouwden een handige en open toegang bioinformatica tools om te halen en visualiseren van de meest prominente informatie uit Affymetrix GEP gegevens met betrekking tot PC differentiatie (GenomicScape)15. GEP zijn openbaar uit ArrayExpress database (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/), met inbegrip van gezuiverde MBCs, PrePBs, PBs en Spoon: E-MTAB-1771, E-MEXP-2360 en E-MEXP-3034 en BMPC E-MEXP-236014,15. Genomicscape is een vrij beschikbare webtool.

  1. Selectie van B naar PC dataset
    1. B Selecteer bij PC dataset in het menu Bladeren Data in GenomicScape open toegang bioinformatic tool (http://www.genomicscape.com) genaamd menselijke B cellen tot plasmacellen. Visualisatie van genexpressie profiel van unieke gen of een lijst met genen is beschikbaar met behulp van de Expressie-Coexpression rapportage in de Analysetools beschikbaar in de home page.
  2. Gecontroleerde analyse en voornaamste componenten analyse (PCA)
    1. Selecteer analysehulpmiddelen | webSAM voor het laden van de SAM tool.
    2. Kies de menselijke B cellen tot plasmacellen dataset en Selekteer de groepen van monsters om te vergelijken.
    3. Gebruik de verschillende filters die beschikbaar zijn om toe te passen van de filteropties van belang.
    4. Om te vergelijken gene expressieprofielen met SAM tool, wijzigen de filtering opties met inbegrip van Fold wijzigen, aantal PERMUTATIES, valse ontdekking tarief en het type vergelijking. GenomicScape zal berekenen de analyse en genen differentially uitgedrukte tussen de geselecteerde groepen.
    5. Belangrijkste componenten analyse uitgevoerd door Hoofdcomponentenanalyse in Analysis Tools menu te selecteren.
    6. Kies de menselijke B cellen tot plasmacellen dataset en Selekteer de groepen van belang.
    7. Een lijst van genen van belang of selecteer genen volgens de variantie plakken. Een lijst van genen plakken, selecteert u te analyseren van een lijst van genen/ncRNAs, klik hier... Genomicscape zal berekenen partnerschaps-en samenwerkingsovereenkomst die kon worden gevisualiseerd en gedownload.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De algemene procedure voor in-vitro differentiatie voor normale PC wordt afgebeeld in Figuur 1. Met behulp van het protocol hier gepresenteerd, kunnen wij voldoende hoeveelheid cellen die niet kon worden verkregen met ex vivo menselijke specimens genereren. Hoewel de rol van het complexe netwerk van transcriptiefactoren die betrokken zijn bij PC differentiatie heeft onderzocht, blijven de mechanismen tot regeling van de belangrijkste PC differentiatie transcr...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In de mens zijn PC zeldzame cellen met differentiatie etappes plaatsvinden in anatomische plaatsen die volledige biologische karakterisering in de weg staan. We hebben ontwikkeld, een in vitro B PC differentiatie model met behulp van scriptingregel cultuur systemen waar verschillende combinaties van moleculen van activering en cytokines worden vervolgens toegepast om te reproduceren de sequentiële celdifferentiatie optreedt de verschillende organen/weefsels in vivo11,1...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd gesteund door subsidies van de Franse INCA (Institut National du Cancer) Instituut (PLBIO15-256), ANR (Tie-Skip) en ITMO kanker (MM & TT).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
anti-CD2 magnetische kralenInvitrogen11159D
Anti-CD138-APCBeckman-Coulter B49219
Anti-CD19-APCBD555415
Anti-CD20-PBBeckman-Coulter B49208
Anti-CD27-PEBD555441
Anti-CD38-PEBeckman-Coulter A07779
Anti-histidineR&D SystemsMAB050
CpG ODN(PT)SigmaT*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*
G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T
human TransferinSigma-AldrichT3309
IFN-αMerckIntron A
IMDMGibco31980-022
Recombinant Human CD40L-hiR&D Systems2706-CL
Recombinant Human APRILR&D Systems5860-AP-010
Recombinant Human IL-10R&D Systems217-IL-
Recombinant Human IL-15Peprotech200-15-10ug
Recombinant Human IL-2 ProteinR&D Systems202-IL-
Recombinant Human IL-6Peprotech200-06

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Shapiro-Shelef, M., Calame, K. Regulation of plasma-cell development. Nature Reviews Immunology. 5 (3), 230-242 (2005).
  2. Nutt, S. L., Hodgkin, P. D., Tarlinton, D. M., Corcoran, L. M. The generation of antibody-secreting plasma cells. Nature Reviews Immunology. 15 (3), 160-171 (2015).
  3. Shaffer, A. L., et al. Blimp-1 orchestrates plasma cell differentiation by extinguishing the mature B cell gene expression program. Immunity. 17 (1), 51-62 (2002).
  4. Minnich, M., et al. Multifunctional role of the transcription factor Blimp-1 in coordinating plasma cell differentiation. Nature Immunology. 17 (3), 331-343 (2016).
  5. Klein, U., et al. Transcription factor IRF4 controls plasma cell differentiation and class-switch recombination. Nature Immunology. 7 (7), 773-782 (2006).
  6. Gass, J. N., Gunn, K. E., Sriburi, R., Brewer, J. W. Stressed-out B cells? Plasma-cell differentiation and the unfolded protein response. Trends in Immunology. 25 (1), 17-24 (2004).
  7. Goldfinger, M., Shmuel, M., Benhamron, S., Tirosh, B. Protein synthesis in plasma cells is regulated by crosstalk between endoplasmic reticulum stress and mTOR signaling. European Journal of Immunology. 41 (2), 491-502 (2011).
  8. Yoshida, H., Matsui, T., Yamamoto, A., Okada, T., Mori, K. XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor. Cell. 107 (7), 881-891 (2001).
  9. Shaffer, A. L., et al. XBP1, downstream of Blimp-1, expands the secretory apparatus and other organelles, and increases protein synthesis in plasma cell differentiation. Immunity. 21 (1), 81-93 (2004).
  10. Reimold, A. M., et al. Plasma cell differentiation requires the transcription factor XBP-1. Nature. 412 (6844), 300-307 (2001).
  11. Jourdan, M., et al. Characterization of a transitional preplasmablast population in the process of human B cell to plasma cell differentiation. Journal of Immunology. 187 (8), 3931-3941 (2011).
  12. Jourdan, M., et al. An in vitro model of differentiation of memory B cells into plasmablasts and plasma cells including detailed phenotypic and molecular characterization. Blood. 114 (25), 5173-5181 (2009).
  13. Jourdan, M., et al. IL-6 supports the generation of human long-lived plasma cells in combination with either APRIL or stromal cell-soluble factors. Leukemia. , (2014).
  14. Kassambara, A., et al. Global miRNA expression analysis identifies novel key regulators of plasma cell differentiation and malignant plasma cell. Nucleic Acids Research. 45 (10), 5639-5652 (2017).
  15. Kassambara, A., et al. GenomicScape: an easy-to-use web tool for gene expression data analysis. Application to investigate the molecular events in the differentiation of B cells into plasma cells. PLOS Computational Biology. 11 (1), 1004077(2015).
  16. Miremadi, A., Oestergaard, M. Z., Pharoah, P. D., Caldas, C. Cancer genetics of epigenetic genes. Human Molecular Genetics. 16, Spec No 1 28-49 (2007).
  17. Pei, H., et al. The histone methyltransferase MMSET regulates class switch recombination. Journal of Immunology. 190 (2), 756-763 (2013).
  18. Le Gallou, S., et al. IL-2 requirement for human plasma cell generation: coupling differentiation and proliferation by enhancing MAPK-ERK signaling. Journal of Immunology. 189 (1), 161-173 (2012).
  19. Cocco, M., et al. In vitro generation of long-lived human plasma cells. Journal of Immunology. 189 (12), 5773-5785 (2012).
  20. Leung-Hagesteijn, C., et al. Xbp1s-negative tumor B cells and pre-plasmablasts mediate therapeutic proteasome inhibitor resistance in multiple myeloma. Cancer Cell. 24 (3), 289-304 (2013).
  21. Orlowski, R. Z. Why proteasome inhibitors cannot ERADicate multiple myeloma. Cancer Cell. 24 (3), 275-277 (2013).
  22. Ding, B. B., Bi, E., Chen, H., Yu, J. J., Ye, B. H. IL-21 and CD40L synergistically promote plasma cell differentiation through upregulation of Blimp-1 in human B cells. Journal of Immunology. 190 (4), 1827-1836 (2013).
  23. Tsai, C. M., et al. Galectin-1 promotes immunoglobulin production during plasma cell differentiation. Journal of Immunology. 181 (7), 4570-4579 (2008).
  24. Tsai, C. M., et al. Galectin-1 and galectin-8 have redundant roles in promoting plasma cell formation. Journal of Immunology. 187 (4), 1643-1652 (2011).
  25. Anginot, A., Espeli, M., Chasson, L., Mancini, S. J., Schiff, C. Galectin 1 modulates plasma cell homeostasis and regulates the humoral immune response. Journal of Immunology. 190 (11), 5526-5533 (2013).
  26. Belnoue, E., et al. Homing and adhesion patterns determine the cellular composition of the bone marrow plasma cell niche. Journal of Immunology. 188 (3), 1283-1291 (2012).
  27. Belnoue, E., et al. APRIL is critical for plasmablast survival in the bone marrow and poorly expressed by early-life bone marrow stromal cells. Blood. 111 (5), 2755-2764 (2008).
  28. Huard, B., et al. APRIL secreted by neutrophils binds to heparan sulfate proteoglycans to create plasma cell niches in human mucosa. Journal of Clinical Investigation. 118 (8), 2887-2895 (2008).
  29. Ame-Thomas, P., et al. Human mesenchymal stem cells isolated from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis. Blood. 109 (2), 693-702 (2007).
  30. Ramachandrareddy, H., et al. BCL6 promoter interacts with far upstream sequences with greatly enhanced activating histone modifications in germinal center B cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (26), 11930-11935 (2010).
  31. Li, G., Zan, H., Xu, Z., Casali, P. Epigenetics of the antibody response. Trends in Immunology. 34 (9), 460-470 (2013).
  32. Miles, R. R., Crockett, D. K., Lim, M. S., Elenitoba-Johnson, K. S. Analysis of BCL6-interacting proteins by tandem mass spectrometry. Molecular & Cellular Proteomics. 4 (12), 1898-1909 (2005).
  33. McManus, S., et al. The transcription factor Pax5 regulates its target genes by recruiting chromatin-modifying proteins in committed B cells. The EMBO Journal. 30 (12), 2388-2404 (2011).
  34. Ahmadnejad, M., et al. Elevated expression of DNMT1 is associated with increased expansion and proliferation of hematopoietic stem cells co-cultured with human MSCs. Blood Research. 52 (1), 25-30 (2017).
  35. Beguelin, W., et al. EZH2 is required for germinal center formation and somatic EZH2 mutations promote lymphoid transformation. Cancer Cell. 23 (5), 677-692 (2013).
  36. Herviou, L., Cavalli, G., Cartron, G., Klein, B., Moreaux, J. EZH2 in normal hematopoiesis and hematological malignancies. Oncotarget. 7 (3), 2284-2296 (2016).
  37. Beguelin, W., et al. EZH2 enables germinal centre formation through epigenetic silencing of CDKN1A and an Rb-E2F1 feedback loop. Nature Communications. 8 (1), 877(2017).
  38. Herviou, L., et al. PRC2 targeting is a therapeutic strategy for EZ score defined high-risk multiple myeloma patients and overcome resistance to IMiDs. Clinical Epigenetics. 10 (1), 121(2018).
  39. Asangani, I. A., et al. Characterization of the EZH2-MMSET histone methyltransferase regulatory axis in cancer. Molecular Cell. 49 (1), 80-93 (2013).
  40. Pei, H., et al. MMSET regulates histone H4K20 methylation and 53BP1 accumulation at DNA damage sites. Nature. 470 (7332), 124-128 (2011).
  41. Cui, J., et al. EHMT2 inhibitor BIX-01294 induces apoptosis through PMAIP1-USP9X-MCL1 axis in human bladder cancer cells. Cancer Cell International. 15 (1), 4(2015).
  42. Santo, L., et al. Preclinical activity, pharmacodynamic, and pharmacokinetic properties of a selective HDAC6 inhibitor, ACY-1215, in combination with bortezomib in multiple myeloma. Blood. 119 (11), 2579-2589 (2012).
  43. Amengual, J. E., et al. Dual Targeting of Protein Degradation Pathways with the Selective HDAC6 Inhibitor ACY-1215 and Bortezomib Is Synergistic in Lymphoma. Clinical Cancer Research. 21 (20), 4663-4675 (2015).
  44. Schoenhals, M., et al. Forced KLF4 expression increases the generation of mature plasma cells and uncovers a network linked with plasma cell stage. Cell Cycle. 15 (14), 1919-1928 (2016).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Differentiatie van plasmacellencelzuiveringflowcytometriecytokinen cocktailgenexpressieprofileringepigenetische factorengeconditioneerd medium van stromale cellenimmunoglobulinesecretie

Gerelateerde artikelen