Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Bereiding van Gushukang (GSK) granulaat voor in vivo en in vitro experimenten

7K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/59171

⸱

9 mei 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Spine Institute, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education, 4School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

In dit artikel

Samenvatting

Dit artikel bevat een gedetailleerd protocol voor de voorbereiding van een werkoplossing van Gushukang granulaat voor dierproeven en GSK-submodule die serum voor in vitro experimenten bevat. Dit protocol kan worden toegepast op farmacologische onderzoeken van kruidengeneesmiddelen, alsmede op recepten voor zowel in vivo als in vitro experimenten.

Samenvatting

Traditionele Chinese kruidengeneeskunde speelt een rol als een alternatieve methode bij de behandeling van vele ziekten, zoals postmenopauzale osteoporose (POP). Gushukang (GSK) korrels, een op de markt gebrachte recept in China, hebben bot-beschermende effecten in de behandeling van POP. Vóór toediening aan het lichaam, een standaard voorbereidingsprocedure is vaak nodig, die tot doel heeft de vrijlating van actieve bestanddelen van rauwe kruiden bevorderen en verbeteren van de farmacologische effecten, alsmede therapeutische uitkomsten. In deze studie wordt een gedetailleerd protocol voorgesteld voor het gebruik van GSK-korrels in in-vivo-en in-vitro-experimentele testen. De auteurs geven eerst een gedetailleerd protocol voor het berekenen van de dier geschikte doseringen van korrels voor in vivo onderzoek: wegen, oplossen, opslag en administratie. Ten tweede worden in dit artikel de protocollen voor micro-CT-scans en de meting van botparameters beschreven. Monstervoorbereiding, protocollen voor het uitvoeren van de micro-CT-machine en kwantificering van botparameters werden geëvalueerd. Ten derde worden serum bevattende GSK-korrels bereid en wordt het geneesmiddel bevattende serum geëxtraheerd voor in vitro osteoclastogenese en osteoblastogenese. GSK-korrels werden gedurende drie opeenvolgende dagen tweemaal per dag intragastrisch toegediend aan ratten. Vervolgens werd bloed verzameld, gecentrifugeerd, geïnactiveerd en gefilterd. Ten slotte werd serum verdund en gebruikt voor het uitvoeren van osteoclastogenese en osteoblastogenese. Het hier beschreven protocol kan worden beschouwd als een referentie voor farmacologische onderzoeken van geneesmiddelen op kruiden voorschrift, zoals korrels.

Inleiding

Traditionele Chinese geneeskunde (TCM) is een van de belangrijke complementaire en alternatieve benaderingen voor de behandeling van osteoporose1,2. Water afkooksel is de basis en meest gebruikte vorm van de formule3. Echter, nadelen bestaan ook: slechte smaak, ongemak voor het vervoer, korte houdbaarheid en inconsistente protocollen, beperken van het gebruik, evenals de curatieve effecten. Om te voorkomen dat de bovenstaande nadelen en om te streven naar betere effecten, korrels werden ontwikkeld en zijn op grote schaal gebruikt4. Hoewel veel studies hebben onderzocht de farmacologische mechanismen van een of meer effectieve componenten uit de korrels5,6,7, de exacte mechanismen en onderliggende farmacologische processen zijn nog steeds moeilijk te identificeren. Dit komt doordat te veel effectieve componenten uit één korrel gelijktijdig vergelijkbare of tegengestelde effecten4kunnen uitoefenen. Daarom zou de ontwikkeling van een standaardprotocol om de korrels voor te bereiden voordat het aan het lichaam wordt gegeven, niet alleen een grote invloed hebben op de therapeutische resultaten, maar is het ook nodig voor zowel in vivo als in vitro testen.

Bovendien zijn de curatieve effecten van granulaat in de kliniek moeilijk te bevestigen en exact te identificeren met behulp van in vitro-of ex vivo-studies, wat een uitdaging creëert omdat de farmacologische mechanismen te complex zijn. Om dit op te lossen, de voorbereiding van drug-bevattende serum werd voor het eerst voorgesteld door Tashino in de jaren 19808. Vanaf dat moment, talrijke onderzoekers toegepast drug-bevattende serum aan kruidengeneeskunde, met inbegrip van korrels9,10,11. Momenteel wordt de keuze van het medicijn bevattende serum voor in-vitro onderzoeken beschouwd als één strategie die de fysiologische omstandigheden nauwlettend nabootst.

Gushukang (GSK) granulaat werd ontwikkeld om postmenopauzale osteoporose (POP) te behandelen op basis van de klinische praktijk in het licht van de theorie van de TCM. GSK-korrels voorkomen botverlies bij muizen met ovariectomized (OVX) in vivo, remmen osteoclastische botresorptie en stimuleren osteoblastische botvorming4. Bijgevolg constateerden Li et al.12 dat GSK-korrels botbeschermende effecten in ovx-muizen hebben door de activiteiten van de calcium receptor te verbeteren om botvorming te stimuleren. Om de botbeschermende effecten en de farmacologische effecten van GSK-korrels te bevestigen, bieden de auteurs hier een gedetailleerde procedure voor de bereiding van werkoplossingen en geneesmiddelen (GSK-granule) die serum bevatten. Bovendien beschrijft dit artikel de toepassing van GSK-korrels in een OVX-geïnduceerde osteoporotische Mouse-model en GSK-granule-bevattende serum voor in vitro osteoclastogenese/osteoblastogenese.

GSK korrels zijn samengesteld uit verschillende kruiden13,14 en kunnen volledig worden opgelost in zoutoplossing gemakkelijk. Daarom dient Saline als het voertuig. Sham-bediende muizen (Sham) en OVX-muizen werden dezelfde hoeveelheid zoutoplossing toegediend als de met korrels toegediende muizen. De equivalente doses van GSK korrels voor de muis werden berekend op basis van de Meeh-Rubner vergelijking15. Deze vergelijking heeft niet alleen het voordeel van het verkrijgen van veilige doseringen, maar garandeert ook farmacologische effecten15. De drie doseringen van GSK-korrels werden als volgt gegenereerd: (1) GSKL: OVX + low-dose GSK granulaat, 2 g/kg/dag. (2) GSKM: OVX + middel-dosis GSK korrels, 4 g/kg/dag. (3) GSKH: OVX + hoge dosis GSK-korrels, 8 g/kg/dag. Muizen in de GSKL-, GSKM-en GSKH-groepen waren intragastrisch toegediende GSK-korrels. Calcium carbonaat (600 mg/tablet) met vitamine D3 (125 internationale eenheid/Tablet), bijvoorbeeld in een volwassen en op de markt gebracht product (bijvoorbeeld Caltraat [CAL]) voor de behandeling en preventie van osteoporose, werd gebruikt als een positieve controle.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd met de goedkeuring van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité van de Shanghai Universiteit van TCM (SZY201604005).

1. voorbereiding en toediening van de werkoplossing van GSK

  1. Bereken de equivalente doses van GSK granulaat voor muis.
    1. Bereken het lichaamsoppervlak op basis van de Meeh-Rubner vergelijking15: lichaamsoppervlak = K x (lichaamsgewicht2/3)/1000, waarbij de K-waarden 10,6 zijn voor de mens en 9,1 voor de muis. Uitgaande van een menselijk lichaamsgewicht van 70 kg, dan is het menselijk lichaamsoppervlak (m2) = 10,6 x (702/3)/1000 = 1,8 m2. Uitgaande van een muis lichaamsgewicht van 20 g (0,02 kg; bijv., 1 maand oud, vrouwelijk, C57/BL6), dan is het lichaamsoppervlak van de muis (m2) = 9,1 x (0,022/3)/1000 = 0,0067 m2.
    2. Bereken op basis van het berekende lichaamsoppervlak de lichaams transformatie ratio voor mens en muis. Menselijk: 70 kg/1.8 m2 = 39. Muis: 0,02 kg/0.0067 m2 = 3. GSK-submodule = 20 g/70 kg x 39/3 = 3,72 g/kg ≈ 4 g/kg.
    3. Bereken op basis van een lichaamsgewicht van 20 g per muis de equivalente dosering voor de muis: 4 g/kg x 0,02 kg = 0,08 g.
    4. Bereken drie equivalente doses GSK-korrels op basis van 20 muizen per groep en een tussenkomst van 3 maanden (90 dagen): (1) GSKL (OVX + low-dose GSK-korrels [2 g/kg/dag]): 0,04 g muis/dag x 20 muizen x 90 dagen = 72 g. (2) GSKM (OVX + middel-dosis GSK korrels [4 g/kg/ dag]): 0,08 g muis/dag x 20 muizen x 90 dagen = 144 g. (3) GSKH (OVX + hoge dosis GSK korrels [8 g/kg/dag]): 0,12 g muis/dag x 20 muizen x 90 dagen = 216 g.
      Opmerking: bereid 20% van de GSK-korrels in de praktijk voor om het verlies te compenseren.
  2. Bereken het volume van de GSK-korrel per muis op basis van het lichaamsgewicht15: bijvoorbeeld volume (V) = 0,24 ml/muis/dag.
    Opmerking: het volume voor intragastrische toediening voor de muis is 0,12 mL/10 g.
  3. Weeg 10 dagen aan drie doses GSK-korrels af. Weeg 8 g, 16 g en 24 g GSK-korrels af en dienen respectievelijk als GSKL, GSKM en GSKH.
  4. Bereken de equivalente dosis calciumcarbonaat met vitamine D3 (CAL) voor de muis op basis van de Meeh-Rubner vergelijking15 zoals in de stappen 1.1.1 en 1.1.2: CAL dosering = 2 Tablet/70 kg x 39/3 = 0,372 Tablet/kg ≈ 0,4 Tablet/kg.
  5. Op basis van een lichaamsgewicht van 20 g per muis (bijv. 1 maand oud, vrouwelijk, C57/BL6), bereken de equivalente dosering van CAL voor muis: 0,4 Tablet/kg x 0,02 kg = 0,008 Tablet. Bereken vervolgens de equivalente dosis CAL op basis van 20 muizen per groep en een tussenkomst van 3 maanden (90 dagen): 0,008 Tablet x 20 x 90 = 14,4 tabletten. Weeg 10 dagen aan CAL (1,6 tabletten).
  6. Ontbinding
    1. Plaats 8 g GSK-korrels in een buis van 50 mL. Voeg 48 mL zoutoplossing en schud buis toe om volledig op te lossen.
      Opmerking: de standaard voor volledige ontbinding is de afwezigheid van sediment. Volledige ontbinding kan verder worden bevestigd als een maagsonde de werkoplossing kan opstellen en deze vervolgens soepel uitzetten.
    2. Herhaal stap 1.5.1 met 16 g en 24 g GSK-korrels.
    3. Plaats 1,6 tabletten (10-dagen ' Worth) CAL in een tube van 50 mL. Voeg 48 mL zoutoplossing en schud buis toe om volledig op te lossen.
      Opmerking: de werkoplossingen kunnen bij-4 °C worden bewaard en elke 10 dagen worden klaargemaakt.
  7. Intragastrische toediening
    1. Pak de achterkant van de muis (1 maand oud, vrouwelijk, C57/BL6) met de muis naar voren gericht en zorg ervoor dat deze stevig in die positie blijft. Houd de muis 2 − 3 minuten voor toediening kalm.
      Opmerking: Zorg ervoor dat de onderzoeker duidelijk de voorkant van de muis kan zien. Draag handschoenen om muis beten te voorkomen, met name voor nieuwe onderzoekers.
    2. Plaats de maagsonde naald (grootte: #12, 40 mm) in de werkoplossing van GSK-korrels en trek 0,24 ml van de werkoplossing.
    3. Plaats de maagsonde naald in de muis door één kant van de mond totdat de maag met de maagsonde naald is bereikt.
      Opmerking: om te bevestigen dat de naald van de maagsonde de buik heeft bereikt: (1) de maagsonde naald stuit op het gevoel van weerstand. Ondertussen, de muis toont de actie van slikken voordat de sonde naald passeert de fysieke vernauwing van de slokdarm. (2) Injecteer ongeveer 0,5 mL van de werkoplossing in de muis en wacht 1 minuut. Als er geen oplossing komt uit de muis, betekent dit dat de maagsonde naald de maag heeft bereikt.
    4. Injecteer de werkoplossing van GSK-korrel (0,24 ml/muis) in de maag en trek vervolgens de naald van de maagsonde op. Keer de muis in de kooi.
    5. Herhaal stap 1.6.4 met de CAL-oplossing en Injecteer 0,24 mL CAL-oplossing per muis.
      Opmerking: het volume van de CAL-oplossing wordt berekend zoals in stap 1,2.

2. micro-CT Scanning

  1. T ibia oogsten en voorbereiding
    1. Intraperitoneaal verdoven muis met 300 ml/100 g van 80 mg/kg ketamine de dag na de interventie van de 90 dag. Gebruik een naald knijpen van de tenen om te bevestigen of de muis volledig verdoof. Geen reactie duidt op succesvolle anesthesie. Dan dood de muis met cervicale dislocatie.
    2. Bevestig de muis met de armen en benen op schuim met kopspijkers.
    3. Knip de huid af met een schaar (maat: 8,5 cm) en pincet (grootte: 10 cm) van de benen van de proximale tot het distale uiteinde en oogst vervolgens tibias.
    4. Zet de scheen onmiddellijk in 70% ethylalcohol en was 3 keer.
  2. Wikkel de linker Tibia van de muis met spons schuim en zet het in een monsterbuis (35 mm diameter, 140 mm lengte).
    Opmerking: de lange as van het preparaat moet samen met die van de monsterbuis zijn. Zorg ervoor dat het proximale uiteinde van de Tibia punten omhoog is.
  3. De micro-CT 80 scan machine uitvoeren
    1. Start de micro-CT 80 scan machine bij kamertemperatuur.
    2. Stel de sample tube in micro-CT 80 en start cross-section scanning met de volgende Scanparameters: pixelgrootte 15,6 μm, buis spanning 55 kV, buis stroom 72 μA, integratie tijd 200 MS, ruimtelijke resolutie 15,6 μm, pixel resolutie 15,6 μm, en afbeeldings matrix 2048 x 2048.
      Opmerking: het geporeuze bot onderscheidt zich van het corticale bot door vooraf te scannen. Het scangebied van de tibia wordt gedefinieerd als het poreuze botgebied vanaf 5 mm onder het tibiale plateau tot aan het distale uiteinde.
  4. Kwantificering van de botparameter
    1. Na het voltooien van cross-section Scanning, het verkrijgen van de afbeeldingen van de linker tibias.
    2. Stel de dichtheids drempel in op 245 − 1000. Gebruik het micro-CT-evaluatieprogramma V 6.6 om de volgende botparameters te meten: botmineraal dichtheden (BMD), botvolume over totaal volume (BV/TV), Trabeculair botnummer (TB. N), trabeculaire botdikte (Tb.Th), evenals bot trabeculaire botscheiding ( TB. SP).

3. bereiding van het bloed serum voor in vitro experimenten

  1. Berekening
    1. Op basis van een rat lichaamsgewicht van 0,2 kg (1 maand oud, vrouwelijk, Sprague-Dawley), bereken de dosering van GSK-submodule: humane dosering/dag x lichaamsgewicht van humane x K/lichaamsgewicht van Rat = 20 g/70 kg/dag x 70 kg x K (K = 0,018)/0,2 kg = 2 g/kg/dag.
      Opmerking: K is de farmacologische transformatie coëfficiënt tussen mens en muis15 (k = 0,018).
    2. Herhaal stap 3.1.1 en bereken de volgende doseringen.
      1. Bereken de dosering van GSKL: 10 g/70 kg/dag x 70 kg x K/0.2 kg = 1 g/kg/dag.
      2. Bereken de dosering van GSKM: 20 g/70 kg/dag x 70 kg x K/0.2 kg = 2 g/kg/dag.
      3. Bereken de dosering van GSKL: 40 g/70 kg/dag x 70 kg x K/0.2 kg = 4 g/kg/dag.
      4. Bereken de dosering van CAL: 2 Tablet/70 kg/dag x 70 kg x K/0.2 kg = 0,2 Tablet/kg/dag.
    3. Bereken de totale dosering van GSK-submodule en CAL.
      1. Bereken de totale dosering voor GSKL: 1 g/kg/dag x 0,2 kg x 6 ratten x 3 dagen = 3,6 g.
      2. Bereken de totale dosering voor GSKM: 2 g/kg/dag x 0,2 kg x 6 ratten x 3 dagen = 7,2 g.
      3. Bereken de totale dosering voor GSKH: 4 g/kg/dag x 0,2 kg x 6 ratten x 3 dagen = 14,4 g.
      4. Bereken de CAL-dosering = 0,2 Tablet/kg/dag x 0,2 kg x 6 ratten x 3 dagen = 0,72 Tablet.
        NB: er is in totaal 10 mL GSK-granule-bevattende serum nodig om 100 mL kweekmedium (20% GSK granule-bevattende serum) te bereiden. Er wordt verwacht dat elke rat (6 ratten/groep) na centrifugeren 1,5 − 2 mL GSK-granule-bevattende serum levert.
    4. Bereken het volume van de GSK-korrels die per rat zijn toegepast op basis van het lichaamsgewicht15: bv. volume (V) = 2 ml/rat/dag.
      Opmerking: het volume voor intragastrische toediening voor rat is 0,1 mL/10 g.
  2. Weeg 3-dagen aan drie doses GSK-korrels af. Weeg 3,6 g, 7,2 g en 14,4 g van GSK-korrels af en dienen respectievelijk als GSKL, GSKM en GSKH. Weeg 0,72 Tablet af voor de CAL-groep.
  3. Plaats 7,2 g GSK-korrels in een buis van 50 mL. Voeg 36 mL zoutoplossing en schud buis toe om volledig op te lossen. Herhaal dit met 3,6 g en 14,4 g GSK-korrels.
  4. Herhaal paragraaf 1,6 voor intragastrische toediening met 2 mL van de werkoplossing van GSK.
    Opmerking: dien hetzelfde volume zoutoplossing (2 mL per rat) toe om serum te bereiden en dient als een blanco controlegroep voor in vitro assays.
  5. Bereiding van het GSK-bevattende serum
    1. Intraperitoneaal anesthetiseren de ratten met 300 mL/100 g van 80 mg/kg ketamine 1 h na de laatste toediening van GSK granulaat. Gebruik een naald knijpen van de tenen om te bevestigen of de rat volledig anesthetized is. Geen reactie duidt op succesvolle anesthesie.
    2. Bloot de buik aan de onderkant van de thorax van ratten met behulp van rechte schaar na het gebeuren van de huid en peritoneum.
      Opmerking: het chirurgische instrument moet vóór gebruik gesteriliseerd worden bij hoge temperaturen en hoge drukken. Het chirurgische gebied moet worden gesteriliseerd met 70% ethanol tijdens het verzamelen van bloed.
    3. Verwijder het bindweefsel van de abdominale aorta met tissuepapier om het vat duidelijk te blootstellen.
    4. Trek bloed uit de abdominale aorta met behulp van een 10 mL, 22 G spuit. Verwijder vervolgens de naald en breng het bloed over in een steriele buis van 15 mL. Gewoonlijk kan 6 − 8 mL bloed worden verkregen van één rat.
      Opmerking: elke rat moet levend worden gehouden bij het tekenen van bloed. Een indicator is dat de abdominale aorta pulseert wanneer de rat leeft. De rat is dood na bloed loting.
    5. Houd de buis gedurende 30 − 60 minuten rechtop bij kamertemperatuur totdat het bloed in de buis is geclopt. Centrifugeer vervolgens de buis op 500 − 600 x g gedurende 20 min. Breng alle supernatant (serum) van de ene groep (6 ratten) naar 1 50 ml steriele buis en schud om te mengen.
    6. Het serum inactiveren door gedurende 30 minuten in een waterbad van 56 °c te incuberen. Filtreer het serum met een 0,22-μm-Pore-formaat hydrofiele polyethersulfon spuit filter. Bewaren bij-80 °C voor langdurig gebruik (minder dan 1 jaar).
      Opmerking: het gefilterde serum kan worden gebruikt voor in vitro osteoclastogenese en osteoblastogenese.
  6. Toepassing
    1. In vitro osteoclastogenese
      1. Verdun de drie doseringen van het GSK-bevattende serum (GSKL, GSKM, GSKH) met een verhouding van 1:4 met minimaal Eagle's medium (α-MEM) met L-glutamine, ribonucleosides en deoxyribonucleosides.
        Let op: Zorg ervoor dat de uiteindelijke concentratie van het serum dat GSK bevat voor in vitro osteoclastogenese en osteoblastogenese 20% is.
      2. Voeg het verdunde GSK-bevattende serum (200 μL/goed) toe van stap 3.6.1.1 tot het beenmerg macrofagen (BMMs) van 4 − 6 weken oude C57BL/6 muizen voor osteoclastogenese en stimuleer BMMs met macrofaag kolonie-stimulerende factor (M-CSF, 10 ng/mL) en receptor Activator voor nucleaire factor-κB ligand (RANKL, 100 ng/mL) zoals eerder beschreven2.
    2. In vitro osteoblastogenese
      1. Herhaal stap 3.6.1.1.
      2. Voeg het verdunde GSK-bevattende serum (2 mL/put) toe aan botmesenchymale stamcellen (BMSCs) van 4 − 6 weken oude C57BL/6 muizen om osteoblast te genereren zoals eerder beschreven16.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Micro-CT-scanresultaten gaven aan dat de OVX-muizen significant botverlies vertoonden in vergelijking met zout bestrijdings muizen (Figuur 1a). De interventie (90 dagen) van GSK-korrels heeft de BMD sterk verhoogd, met name in de GSKM-groep (Figuur 1b). De parameters van de botstructuur, zoals BMD, BV/TV, TB. N en Tb.Th, werden gekwantificeerd. De submodules van GSK leidden tot verhoogde BMD, BV/TV, TB. N en Tb.Th, maar daalden m...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Korrels van TCM agenten zijn uitgegroeid tot een van de gemeenschappelijke keuzes voor formuleringen of recepten. GSK-korrels zijn samengesteld uit verschillende kruidengeneesmiddelen op basis van klinische ervaringen of de TCM-theorie, en ze oefenen betere curatieve effecten uit met minder bijwerkingen4. Vergeleken met water afkooksel hebben de korrels deze voordelen: goede smaak, gemak van levering, lange termijn opslag, standaardprotocol en consistente curatieve effecten, evenals een hogere pro...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

Deze studie werd gesteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (81804116, 81673991, 81770107, 81603643 en 81330085), het programma voor innovatief team, ministerie van Wetenschappen en technologie van China (2015RA4002 naar WYJ), het programma voor Innovatief team, ministerie van onderwijs van China (IRT1270 naar WYJ), Shanghai TCM Medical Center van chronische ziekte (2017ZZ01010 naar WYJ), drie jaar actie om de ontwikkeling van de traditionele Chinese geneeskunde plan (ZY (2018-2020)-CCCX-3003 naar WYJ) te versnellen, en nationale belangrijke onderzoeks-ontwikkelingsprojecten (2018YFC1704302).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
α-MEMHyclone
laboratories		SH30265.018Voor celkweek
β-GlycerofosfaatSigmaG5422Osteoblastogenese
Caltrate (CAL)WyethL96625Dierinterventie
C57BL/6 muizenSLAC Laboratory
Animal Co. Ltd.		RandomDierdiervoorbereiding
DexamethsonSigmaD4902
DimethylsulfoxideSigmaD2438Cel ingevroren
Ethyleen diamine tetra-azijnzuur (EDTA)Sangon Biotech60-00-4Behandeling van monsters
Foetaal bovien serumGibcoFL-24562Voor celkweek
Gushukang granulaatKangcheng bedrijf in ChinaZ20003255Kruidenrecept
LichtmicroscoopOlympus BX50Olympus BX50Afbeeldingen voor osteoclastogenese
L-Ascorbinezuur 2-fosfaat sesquinatriumzouthydraatSigmaA8960-5GOsteoblastogenese
MicroscoopLeicaDMI300BBeeldvorming van osteoclasten en osteoblasten
M-CSFPeprotechAF-300-25-10Osteoclastogenese
μicro-CTScanco
Medical AG		μCT80 radiograaf microtomograafBotstructuuranalyse
RANKLPeprotech11682-HNCHFOsteoclastogenese
Sprague DawleySLAC Laboratory
Animal Co. Ltd.		RandomVerzameling bloedserum
Tartrate-resistente zure fosfatasekitSigma-Aldrich387A-1KTTRAP-kleuring

Referenties

  1. Shu, B., Shi, Q., Wang, Y. J. Shen (Kidney)-tonifying principle for primary osteoporosis: to treat both the disease and the Chinese medicine syndrome. Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (9), 656-661 (2015).
  2. Zhao, D., et al. The naturally derived small compound Osthole inhibits osteoclastogenesis to prevent ovariectomy-induced bone loss in mice. Menopause. 25 (12), 1459-1469 (2018).
  3. Liu, S. F., Sun, Y. L., Li, J., Dong, J. C., Bian, Q. Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In vivo and In vitro Experiments. Journal of Visualized Experiments. (123), e55654(2017).
  4. Wang, Q., et al. The systemic bone protective effects of Gushukang granules in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis and stimulating osteoblastogenesis. Journal of Pharmacological Sciences. 136 (3), 155-164 (2018).
  5. Bian, Q., et al. Oleanolic acid exerts an osteoprotective effect in ovariectomy-induced osteoporotic rats and stimulates the osteoblastic differentiation of bone mesenchymal stem cells in vitro. Menopause. 19 (2), 225-233 (2012).
  6. Zhao, D., et al. Oleanolic acid exerts bone protective effects in ovariectomized mice by inhibiting osteoclastogenesis. Journal of Pharmacological Sciences. 137 (1), 76-85 (2018).
  7. Tang, D. Z., et al. Osthole Stimulates Osteoblast Differentiation and Bone Formation by Activation of β-Catenin-BMP Signaling. Journal of Bone and Mineral Research. 25 (6), 1234-1245 (2010).
  8. Tashino, S. "Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Therapeutic Drug Monitoring Research. 5, 54-64 (1988).
  9. Fu, L., et al. Ex vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum. Evidence Based Complement Alternative Medicine. , 7380439(2016).
  10. Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway. Experimental and Therapeutic. 8 (3), 998-1004 (2014).
  11. Chen, X., et al. Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine. Chinese Journal of Integrative Medicine. 20 (6), 450-455 (2014).
  12. Li, X. L., Wang, L., Bi, X. L., Chen, B. B., Zhang, Y. Gushukang exerts osteopreserve effects by regulating Vitamin D and Calcium metabolism in ovariectomized mice. Journal of Bone Mineral Metabolism. , 1-11 (2018).
  13. Cui, S. Q., et al. Mechanistic study of Shen (Kidney)tonifying prescription Gushukang in Preventing and Treating Primary Osteoporosis. Journal of Chinese Medical University. 30 (16), 351-354 (2001).
  14. Wang, Y., Shang, K., Li, Y. K., Tao, X. L. Effect of gushukang on osteoclast cultured from type I diabetic rat in vitro-a preliminary study. Chinese Journal of Bone Tumor and Bone Disease. 3 (12), 22-24 (2004).
  15. Zhang, Y. P. Pharmacology Experiment. , 2nd edition, People’s medical publishing house. Beijing, China. (1996).
  16. Zhao, D. F., et al. Cyclophosphamide causes osteoporosis in C57BL/6 male mice: suppressive effects of cyclophosphamide on osteoblastogenesis and osteoclastogenesis. Oncotarget. 8 (58), 98163-98183 (2017).
  17. Zhong, L. L., et al. A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women. Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).
  18. Zhang, D. Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).
  19. Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human). Journal of Basic and Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).
  20. Xu, X., et al. Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. International Journal of Clinical and Experiments Medicine. 8 (2), 1768-1779 (2015).
  21. Jiang, Y. R., et al. Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells. Chinese Journal of Integrative Medicine. 18 (1), 30-33 (2012).
  22. Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).
  23. Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).
  24. Li, Y. K. Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263(1999).
  25. Zhang, L., et al. A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254(2002).
  26. Pacifici, R. Estrogen, cytokines, and pathogenesis of postmenopausal osteoporosis. Journal. Bone Mineral Research. 11, 1043-1051 (1996).
  27. Ammann, P., et al. Transgenic mice expressing soluble tumor necrosis factor-receptor are protected against bone loss caused by estrogen deficiency. Journal Clinical Investigation. 99, 1699-1703 (1997).
  28. Kimble, R. B., et al. Simultaneous block of interleukin-1 and tumor necrosis factor is required to completely prevent bone loss in the early postovariectomy period. Endocrinology. 136, 3054-3061 (1995).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Gushukang-granulain vivo-experimentenmicro-CT-scanningmeting van botparametersserumvoorbereidingosteoclastogenese-assayosteoblastogenese-assaytoediening via sondebloedafname
Bereiding van Gushukang (GSK) granulaat voor in vivo en in vitro experimenten
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.