Driedimensionale bot extracellulaire Matrix Model voor Osteosarcoom

Summary

Hier is het bot extracellulaire matrix (BEM) model voor Osteosarcoom (OS) gevestigde en getoond. Het kan worden gebruikt als een geschikte steiger voor nabootsen van primaire tumor groei in vitro en bieden een ideaal model voor het bestuderen van de histologische en cytogenic heterogeniteit van OS.

Abstract

Osteosarcoom (OS) is de meest voorkomende en een zeer agressieve primaire bot tumor. Het wordt gekenmerkt met anatomische en histologische varianten samen met diagnostische of prognostische moeilijkheden. OS omvat genotypisch en fenotypische heterogene kankercellen. Bot communicatie elementen blijkt rekening voor de heterogeniteit en ziekte progressie van de tumor. Bot extracellulaire matrix (BEM) behoudt de microstructurele matrices en biochemische onderdelen van inheemse extracellulaire matrix. Dit weefsel-specifieke niche biedt een gunstige en lange steiger voor OS cel zaaien en proliferatie. Dit artikel bevat een protocol voor de bereiding van BEM model en de verdere experimentele toepassing. OS cellen kunnen groeien en differentiëren in meerdere fenotypen consistent met de histopathologische complexiteit van OS klinische monsters. Het model maakt het ook mogelijk visualisatie van uiteenlopende morphologies en hun associatie met genetische veranderingen en onderliggende regulerende mechanismen. Als homoloog aan menselijke OS, kan dit model BEM-OS worden ontwikkeld en toegepast op de pathologie en klinisch onderzoek van OS.

Introduction

Osteosarcoom (OS) treedt meestal op in de actief groeiende gebieden, de metaphysis van lange beenderen, tijdens de adolescentie. Meer dan 80% van de sites die getroffen zijn door OS hebben voorkeur voor de metaphysis van proximale tibia, evenals proximale humerus en zowel de distale als de proximale dijbeen, overeenkomt met de locatie van de groei plaat¹. OS bestaat uit meerdere subtypes van de cel met mesenchymale eigenschappen en aanzienlijke verscheidenheid is in histologische kenmerken en rang. Bewijzen ondersteunen mesenchymale stamcellen (MSCs), botcellen gepleegd precursoren en pericytes als de cellen van oorsprong²

Protocol

Verzorging van de dieren en het gebruik worden uitgevoerd volgens de nationale instituten van gezondheid gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren (NIH publicatie NO.80-23, herzien in 1996) na goedkeuring van het dier ethiek Comité van zon Yat-sen-universiteit.

1. been voorbereiding

1. Verkrijgen van 4 tot 6 weken oude BALB/c muizen (zonder geslacht-specifieke eis). Een muis aseptisch euthanaseren door cervicale dislocatie en afgesneden verse kuitbeen, scheenbeen en het dijbeen van een stuk met een steriele chirurgische schaar. Afschilferen van de epitheelweefsel en Verwijder zo veel van het zachte weefsel mogelijk met behulp ....

Results

Na demineralisatie en decellularization lijkt BEM te zijn doorschijnend met sterkere veerkracht en vasthoudendheid in vergelijking met inheemse muis bot. Een kleine residu van de spier en de ruimte van Wallenberg spouw kunnen duidelijk worden waargenomen (Figuur 1A, B). Om te bepalen van de effectieve decellularization van BEM, is BEM ingesloten in paraffine na fixatie, en vervolgens gesneden in 3 – 5 μm secties voor Haematoxyline-eosine-kleuring (H & E). De grondige verwijd.......

Discussion

In het algemeen, OS kan worden geclassificeerd als osteoblastic, chondroblastic, en fibroblastic subtypen afhankelijk van haar dominante histologische component. De prognose is niet alleen afhankelijk zijn voor histologische parameters maar ook op haar anatomische plaats. Het kan optreden in de botten (in de intramedullaire of intracortical compartiment), op de oppervlakken van botten, en met extraosseous sites¹⁹. Het ontstaan en de heterogeniteit van OS kunnen worden toegelicht als een vervoeging .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
15 mL centrifuge tube	Greiner	188271
50 mL centrifuge tube	Greiner	227270
6 cm cell culture dish	Greiner	628160
6-well plate	Greiner	657160
Ampicillin	Sigma-Aldrich	A9393
C57-BL/6J mouse	Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center
CO2 incubator	SHEL LAB	SCO5A
Dibasic sodium phosphate	Guangzhou Chemical Reagent Factory	BE14-GR-500G
DMEM/F12	Sigma-Aldrich	D0547
Fetal bovine serum	Hyclone	SH30084.03
Hemocytometer	BLAU	717805
Kanamycin	Sigma-Aldrich	PHR1487
MG-63	Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank		Human osteosarcoma cell line
MNNG/HOS	Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank		Human osteosarcoma cell line
Phenol red	Sigma-Aldrich	P4633	A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0.
Potassium chloride	Sangon Biotech	A100395
Potassium Phosphate Monobasic	Sangon Biotech	A501211
Sodium chloride	Sangon Biotech	A501218