Methodenartikel

Vastleggen van klein molecuul communicatie tussen de weefsels en cellen met behulp van Imaging massaspectrometrie

DOI:

10.3791/59490

⸱

3 april 2019

 ,  ,  , 
1Department of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago, 2Department of Animal Science, University of Illinois at Urbana-Champaign

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een nieuwe methode voor de bereiding van de monsters werd ontwikkeld zodat de cel- en weefseltransplantaties coculture op te sporen klein molecuul uitwisseling met behulp van spectrometrie van de massa van de beeldvorming.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Imaging massaspectrometrie (IMS) is routinematig toegepast op drie soorten monsters: weefselsecties, spheroïden en microbiële kolonies. Deze types van monster hebben zijn geanalyseerd met behulp van laser matrix-bijgewoonde desorptie/ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (MALDI-TOF MS) te visualiseren van de verdeling van eiwitten, lipiden en metabolieten in de biologische steekproef van belang. We hebben een nieuwe steekproef voorbereiding methode die de sterke punten van de drie vorige toepassingen aan te pakken een underexplored benadering combineert voor de identificatie van chemische communicatie bij kanker, door het zaaien van zoogdiercellen culturen in agarose in ontwikkeld coculture met gezonde weefsels gevolgd door uitdroging van het monster. Zoogdieren weefsels en cellen zijn cocultured in de nabijheid waardoor chemische communicatie via verspreiding tussen de weefsels en cellen. Op specifieke tijdstippen, wordt het monster agarose gebaseerde gedroogd op dezelfde wijze als microbiële kolonies IMS analyse voorbereid. Onze methode is ontwikkeld om de communicatie tussen hoogwaardige sereuze eierstokkanker afgeleid van de eileider, zoals deze met het ovarium tijdens metastase samenwerkt model. Optimalisatie van de bereiding van de monsters resulteerde in de identificatie van noradrenaline als een belangrijke chemische component in de eierstokken communicatie. Deze nieuw ontwikkelde methode kan worden toegepast op andere biologische systemen die een goed begrip van chemische communicatie tussen aangrenzende cellen of weefsels vereisen.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Imaging massaspectrometrie (IMS) is geoptimaliseerd voor het karakteriseren van de ruimtelijke spreiding van moleculaire kenmerken in drie veelgebruikte toepassingen: weefsel segmenten, spheroïden en microbiële kolonies1,2,3. Weefsel segmenten kunnen worden gebruikt om te evalueren van de lokalisatie van metabolieten in de context van biologische omstandigheden in een host, ofwel gerichte of een ongerichte binnen een specifieke waaier van de massa. Verschillen tussen moleculaire functies zijn echter de meest belangrijke en duidelijk wanneer een gezond weefsel wordt vergeleken met een zieke aandoening, bijvoorbeeld een tumor. Deze IMS-benadering is vooral aangepast aan opsporing van ziekte biomarkers, echter het verwerven van weefselmonsters in discrete stadia in de progressie van de ziekte (zoals tumor rangen) zich verzet tegen de identificatie van signalen die belangrijk voor de inleiding van zijn kunnen de ziekte. De uitwisseling van informatie door de ruimte is een alomtegenwoordige functie van veel biologische systemen, en weefsel segmenten kunnen niet vangen dit dynamische chemische estafette. Een techniek die kan visualiseren van chemische uitwisseling en verspreiding is IMS van microbiële kolonies geteeld op agar platen; kleine moleculen kunnen te verspreiden door en over de agar en via laser matrix-bijgewoonde (MALDI-TOF) desorptie/ionisatie massaspectrometrie4kunnen worden vastgelegd. Deze groei setup kan worden gebruikt voor het identificeren van moleculen uitgewisseld tussen discrete biologische entiteiten (kolonies) en gerichtheid van de metaboliet productie ook kunt bepalen. Het platform oorspronkelijk ontworpen voor microbiële kolonie groei werd aangepast aan het verkennen van het primaire metabolisme van weefsel explantaten gegroeid met zoogdiercellen en IMS werd gebruikt voor het evalueren van de dynamische chemische uitwisseling in een in vitro zoogdieren systeem.

In de afgelopen jaren, duidelijk geworden dat hoogwaardige sereuze eierstokkanker (HGSOC) vaak in de eileider epitheel (VTE ontspringt) en klik vervolgens metastasizes naar het vruchtbeginsel tijdens de vroege ziekte ontwikkeling5,6, 7 , 8. de reden dat tumorigene FTE verspreiding naar de eierstok cellen, waar grote tumoren uiteindelijk vormen en verder metastaseren, is nog onduidelijk. Eerder onderzoek heeft zich gericht op de rol van ovariële eiwitten in primaire metastase aan de eierstokken; echter, onlangs is gebleken dat de overgang van een gezonde naar een tumorigene weefsel in massale verstoring van cellulaire metabolisme resulteert en verandert van de productie van kleine molecules9,10,11. Dus veronderstelde we dat kleine moleculen die worden uitgewisseld tussen de FTE en de eierstok medeverantwoordelijk voor primaire metastase van HGSOC kunnen worden.

Met onze nieuw ontwikkelde IMS-procedure, hebben wij vastgesteld dat coculture van tumorigene FTE en gezonde eierstokweefsel de productie van noradrenaline uit de eierstok induceert. Andere celtypes of normale FTE cellen deed dit effect echter niet uitlokken. Een buitengewone voordeel van deze methode is dat de moleculaire productie en een uitwisseling van signalen waarmee echte moleculen kunnen worden gevisualiseerd, dus zelfs in een coculture is het mogelijk om de bron van een signaal te bepalen. Dit is een voordeel ten opzichte van de analyse van monsters van gehomogeniseerde, waar alle ruimtelijke informatie verloren gaat. In ons modelsysteem konden we duidelijk de productie van noradrenaline toewijzen in de eierstok. Noradrenaline is gekoppeld aan de metastase en chemoresistance van ovariële kanker, en onze opsporing van dit molecuul heeft gevalideerd, dat de nieuwe IMS-methode biologisch relevante moleculen12,13, ontdekken kan 14. deze validatie laat ons voorstellen dat deze nieuwe toepassing van IMS bijzonder nuttig zijn kan om onderzoeksgroepen die probeert om te identificeren van kleine molecules in coculture omgevingen en om te begrijpen van de vroege gebeurtenissen die van invloed zijn Celtransformatie en metastase. Het algemene doel van deze methode is het ophelderen van de identiteit en de ruimtelijke spreiding van de kleine moleculen tijdens uitwisseling tussen weefsels en organen, vertegenwoordigd door in vitro 3D celculturen of ex vivo weefsel.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alle dierlijke procedures werden overeenkomstig de nationale instituten van gezondheid richtsnoeren voor de verzorging en het gebruik van proefdieren en goedgekeurd door het Comité van het institutionele dier gebruik en zorg (IACUC) aan de Universiteit van Illinois te Chicago.

1. bereiding van reagentia

  1. Handhaven lymfkliertest oviductal epitheel (MOE) cellen bij 37° C met 5% CO2 in een bevochtigde incubator in alpha Minimum essentiële Medium (αMEM) media aangevuld met 10% foetale runderserum (FBS), 2 mM L-glutamine, 10 mg/mL insuline, transferrine, selenium (ITS) , 1.8 ng/mL epidermale groeifactor (EGF), 100 U/mL penicilline-streptomycine, 1 mg/mL gentamycine en estradiol-17β 18.2 ng/mL. Passeren van de cellen om 3-4 dagen, ervoor te zorgen zijn er genoeg cellen op dezelfde dag de muizen zullen worden opgeofferd.
  2. Bereid 2% agarose door het mengen van 1 g van lage-smelten agarose met 50 mL gedestilleerd water. Autoclaaf de agarose, laat afkoelen en vervolgens aliquot (1 mL) in 2 mL tubes (Zie Tabel van materialen) voordat agarose stolt. Agarose kan voor onbepaalde tijd bij-20 ° C worden bewaard.
  3. Bereiden van ten minste 2 mL 1 x Dulbecco bewerkt Eagle's Medium (DMEM) media.
  4. Voor de matrix voor MALDI-TOF MS, bereiden 5 mg/mL 10 mL 1:1 alpha-cyano-4-hyroxycinnamic zuur (CHCA): dihydroxybenzoic zuur (DHB) (Zie Tabel van materialen) in 90:10 ACN:H2O + 0,1% trifluorazijnzuur (TFA). Bewerk ultrasone trillingen ten oplossing tot matrix is opgelost.

2. muis kolonie en eierstok verwijdering

  1. Fok paren van CD-1 muizen met behulp van standaard behuizing procedures te handhaven. In de buurt van de dag van de bevalling, check de muizen elke dag zodat de ouderdom van de pups is bekend.
  2. Euthanaseren pups op de leeftijd van 16 tot 18 dagen na inademing CO2 per NIH richtsnoeren. Leveren van CO2 (100%) in een flow tarief van 10%-20% volume per minuut kamer en blijven gedurende twee minuten na ademhaling was gestopt. Bevestig euthanasie door cervicale dislocatie.
  3. Desinfecteer alle chirurgische apparatuur door dompelen in 70% ethanol. Warm Leibovitz van L-15 media met 1 x penicilline-streptomycine tot 37 ° C.
  4. De abdominale oppervlak met 70% ethanol te desinfecteren van het gebied en Minimaliseer verontreiniging met haar natte. Greep de huid die betrekking hebben op de buikwand met behulp van botte chirurgische schaar Tang en gebruik te maken een grote V-vorm gesneden door de huid en de buikwand, bloot de interne organen.
  5. De inwendige organen verplaatsen naar de kant met behulp van de verlostang. Individueel grijpen elke baarmoeder hoorn met een fijne Tang en een lift iets.
  6. Zoek de eierstok, die aan het einde van de baarmoeder-hoorn, direct onder de nier zullen. Heelkundige schaar te ontleden de eierstok gratis bindweefsel gebruiken Snij vervolgens de ovariële hoorn doormidden.
  7. Verplaatsen van het ovarium oviduct en ongeveer één helft van elke baarmoeder claxon voorverwarmde Leibovitz van L-15 media.
  8. Verplaats onder een ontleden Microscoop zorgvuldig elke eierstok uit de omliggende bursa, het bevrijden van het oviduct, bursa en eventuele adipeus weefsel. Elke eierstok verplaatsen naar een nieuwe schotel van Leibovitz van L-15 media.
  9. Elke eierstok axiaal in tweeën gesneden. Houd de ovariële stukken (nu genoemd explantaten) bewaard bij 37 ° C tot beplating van agarose.

3. het opzetten van en het broeden van de ITO-behandelde dia voor Cocultures

  1. Onverdeelde cocultures
    1. Uitvloeien, de agarose bij 70 ° C op een hete plaat.
    2. Plaats de scheidingslijn van de 8-well bovenop de indium tinoxide (ITO)-behandelde dia (figuur 1A). De rubberen onderkant op de scheidingslijn helpt bij hechting op de dia, maar zorg ervoor dat continu zachte neerwaartse druk uitoefenen tijdens agarose beplating om ervoor te zorgen geen lekken of mengen tussen putten.
    3. Verzamelen van cellen in een conische tube van 15 mL, centrifuge (5 min op 800 rpm) en resuspendeer tot 50k cellen per 150 µL in 1 x DMEM media. Als de dichtheid van een andere cel optimaal is, zorg ervoor dat bij deze stap de celsuspensie 2 x de laatste dichtheid gewenst is (bijvoorbeeld voor een eindconcentratie van 50.000 cellen in 300 µL, celdichtheid bij deze stap is 50.000 cellen in 150 µL).
    4. Voeg voordat plating celcultuur, ovariële explant te midden van goed (figuur 1B).
    5. Agarose toevoegen aan elke celcultuur in individuele 2 mL buizen net voordat plating. Voor elk putje, combineren 200 µL celsuspensie en 200 µL van vloeibaar agarose in een tube van 2 mL. Bijvoorbeeld, voor vier putten, combineren 800 µL celsuspensie en 800 µL van 2% agarose. Sommige mengsel blijft, maar iets meer dan noodzakelijk maken voorkomt luchtbellen tijdens pipetteren.
      1. Voeg agarose aan individuele celculturen onmiddellijk voordat plating dat cultuur van de cel. De agarose zal afkoelen in minder dan een minuut, dus wees bereid te snel plaat.
    6. Voeg onmiddellijk 300 µL van het mengsel van cel/agarose toe aan elk putje (Figuur 1 c). Figuur 1 c toont drie cel voorwaarden en een media voorwaarde, dat elk verguld met en zonder een eierstok.
    7. Incubeer bij 37 ° C en 5% CO2 in een bevochtigde incubator dia.
  2. Verdeelde Cocultures.
    1. Verlagen dividers van dunne, soepele plastic (figuur 2A).
      Opmerking: Dit experiment wordt gebruikgemaakt van de zijden van een steriele wegwerp media bekken omdat ze plat en dun zijn. Snij ze net breed genoeg om te passen zonder speling in de schuine zijde van de put (~ 13 mm).
    2. Uitvloeien, de agarose bij 70 ° C op een hete plaat.
    3. Plaats de scheidingslijn van de 8-well op de top van de ITO-behandelde dia (figuur 2B). De rubberen onderkant op de scheidingslijn helpt bij hechting op de dia, maar zorg ervoor dat continu zachte neerwaartse druk uitoefenen tijdens agarose beplating om ervoor te zorgen geen lekken of mengen tussen putten.
    4. Verzamelen van cellen in een conische tube van 15 mL, centrifuge (5 min op 800 rpm) en resuspendeer tot 50k cellen per 150 µL in 1 x DMEM media. Als de dichtheid van een andere cel optimaal is, ervoor te zorgen dat bij deze stap de celsuspensie 2 x de laatste dichtheid gewenst is (bijvoorbeeld voor een eindconcentratie van 50.000 cellen in 300 µL, celdichtheid bij deze stap is 50.000 cellen in 150 µL).
    5. Kunststof verdelers diagonaal in putten (figuur 2C) invoegen.
    6. Agarose aan elke celsuspensie één op een moment net voordat plating toevoegen. Voor elk putje, combineren 100 µL celsuspensie en 100 µL van vloeibaar agarose in een tube van 2 mL. Bijvoorbeeld, voor vier putten, combineren 400 µL van celkweek en 400 µL van 2% agarose. Enkele cel/agarose mengsel overblijft zal worden maar dat iets meer dan noodzakelijk voorkomt luchtbellen tijdens pipetteren.
      1. Voeg agarose aan individuele celculturen onmiddellijk voordat plating dat cultuur van de cel. De agarose zal afkoelen in minder dan een minuut, dus wees bereid te snel plaat.
    7. Aan de ene kant van de scheidingslijn, plaat 150 µL van cel/agarose mengsel. Toestaan agarose afkoelen en stollen (ongeveer één min) en verwijder de scheidingslijn (figuur 2D).
    8. Eierstok explant plaatsen in het midden van de lege helft van de put. Plaats 150 µL media/agarose mengsel over de bovenkant van de eierstok, en alleen met de juiste kant van de put (figuur 2E).
    9. Incubeer bij 37 ° C en 5% CO2 in een bevochtigde incubator dia.

4. het drogen van dia en voorbereiding van de MALDI-TOF MS

  1. Na vier dagen (of een voorkeurstijd punt), de kamer scheidingslijn verwijderen uit de agarose stekkers en de dia (Figuur 1 d). Voorzichtig losmaken van de zijkanten van het agarose de zaal uit met een platte spatel en trek voorzichtig de kamer naar boven, dat evenwel niet tot het verplaatsen van een agarose stekkers. Als ze bewegen zich, verplaatsen ze zachtjes zodat ze elkaar niet raken.
  2. Plaats de dia in een oven van 37 ° C gedurende ongeveer 4 uur, roteren 90° elke h.
    Opmerking: De rotatie van de dia is belangrijk om ervoor te zorgen zelfs warmteverdeling in het monster.
  3. Eenmaal droog, verwijder de dia uit de oven (figuur 1E).
  4. Toepassing van matrix oplossing met behulp van de spuitmachine (figuur 1F), met de volgende parameters: temperatuur = 30 ° C, debiet = 0,2 mL/min, aantal stadia = 8, richting = CC en mondstuk afstand = 40 mm.
    Opmerking: In plaats van een sproeier van matrix, een artistieke airbrush kan worden gebruikt om toe te passen van vloeibare matrix. Dezelfde matrix oplossing kan worden gebruikt om te spuiten, maar ongeveer tweemaal zoveel oplossing is vereist. Spuiten met de dia geklemd zodat deze verticaal hangt, de dia van een 90° hoek van ongeveer één voet weg (aangepast van Hoffmann15) tot de matrix laag is zichtbaar.
  5. Voeg 1 µL van kalibrant (fosfor rood voor doelen < 500 Da, een peptide-mengsel (Zie Tabel of Materials) voor doelstellingen < 5.000 Da) aan heldere vlek op dia. Fosfor Red vereist geen mengen met matrix, maar het mengsel peptide vereist 1:1-mengsel met matrix op de steun van ionisatie. Wachten op kalibrant om te drogen.
  6. Tekenen van een X in elke hoek van de dia met behulp van een permanent marker en een optische beeld met behulp van een camera of een scanner op 1.200 dpi nemen.

5. beeldvorming massaspectrometrie Data-acquisitie

  1. Openen van een nieuwe reeks op de analysesoftware van de IMS-gegevens (Zie Tabel van materialen). Stel de breedte van het raster op gewenste ruimtelijke resolutie, ten minste 50 µm.
  2. Upload het optische beeld van de dia naar de analysesoftware en set drie leren punten met behulp van de snijpunten in de X'en getekend in elke hoek.
  3. Aanwijzen van de regio's van belang voor beeldvorming in de acquisitie software en dienovereenkomstig een naam geven.
  4. Kalibreren van het instrument met behulp van de data-acquisitie software (Zie Tabel van materialen) binnen 5 ppm fout.
  5. Sla de geoptimaliseerde methode en run beginnen. Dit experiment geoptimaliseerd de volgende parameters: polariteit = positief, Detector = Reflectron, Laser grootte = 2, Laser macht = 50%, Reflector modus detector winst = 3 x.

6. verwerking van de IMS-gegevens

  1. Import .mis bestand in statistische software (Zie Tabel of Materials) voor analyse van betekenis.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een optimaal gedroogde ITO dia zal resulteren in een platte gedroogde monster met minimale tot geen rimpels over het oppervlak van het agarose en agarose stukken die handhaven van ruimtelijke scheiding op de dia (Figuur 3). Figuur 3A geeft optimale drogen, terwijl figuur 3B toont de rimpels die moeten worden vermeden. Deze optimalisatie vereist zorgvuldige controle van de dia in de oven, aangezien de...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Er is een groeiend lichaam van bewijsmateriaal dat noradrenaline de rol in HGSOC12,17,18 impliceert, en deze techniek meer mechanistische informatie heeft bijgedragen. Met ten minste acht biologische omstandigheden aanwezig op dezelfde dia, kan de methode goed zijn voor biologische besturingselementen zoals gen, evenals cel specificiteit en controles van de media in een enkele IMS uitvoeren. Terwijl de methode is geoptimaliseerd...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Financiering werd verstrekt door het Consortium Chicago biomedische met steun van de fondsen van de Searle op The Chicago Gemeenschap Trust (C-076) (L.M.S.); Universiteit van Illinois te Chicago opstarten middelen (L.M.S.); Subsidie 543296 van de ovariële kanker onderzoek Fonds Alliantie (M.D.); en UG3 ES029073 (J.E.B.) en door het National Center for Advancing translationeel Sciences, National Institute of Health, door middel van subsidie UL1TR002003 (JEB & LMS).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
15 mL Falcon tubesDenvilleC1017-OOm cellen te verzamelen
8-well chamber (Millipore EZ-slide chamber)MilliporePEZGS0816Hergebruikt vanuit Millipore Millicell EZ-slide kamerslide
AcetonitrileSigma-Aldrich34998-4LSolvent voor gespoten matrix
Alpha Minimum Essential Medium (αMEM)Fisher10-022-CVCelcultuur media
Autoflex speed MALDI-TOF LRFBrukerVoor IMS data-analyse
CentrifugeEppendorf5810 ROm cellen te verzamelen en supernatant te verwijderen
CHCA MatrixBruker Daltonic8201344Matrix gespoten op droge slide
DHB MatrixBruker Daltonic8201346Matrix gespoten op droge slide
Disposable ScalpelsFisher22-079-707Voor het verwijderen van de eierstokken
Dissecting ScissorsFisher13-804-6Voor het verwijderen van de eierstokken
DMEM MediaGibco11995-065Media gemengd met agarose
epidermal growth factorPeprotech Inc.100-15Celcultuur media supplement
Eppendorf tubesGenesee Scientific22-282Voor agarose aliquots
Estradiol-17βSimga-AldrichE2758Celcultuur media supplement
Fetal Bovine SerumDenvillefb5001Celcultuur media supplement
FlexControl 3.4Bruker DaltonicIMS dataverzameling software
FlexImaging 4.1Bruker DaltonicIMS data-analyse software
Forceps (fine)Fsiher22-327379Voor het verwijderen van de eierstokken
GentamycinCellgro30-005-CRCelcultuur media supplement
Insulin, Transferrin, Selenium (ITS)Sigma-Aldrich11074547001Celcultuur media supplement
ITO-coated slideBruker8237001Platform voor co-cultuur incubatie
Leibovitz's L-15 MediumGibco11415064Media gebruikt tijdens weefseldissectie
L-glutamineGibco25030-081Celcultuur media supplement
Low-melting agaroseSigma-AldrichA9414-10GGemengd met media voor plateren
Media basinCorning4870Gebruikt om plastic verdelers voor verdeelde kamers te snijden
Penicillin-streptomycinGibco15140-122Celcultuur media supplement
Peptide Calibration StandardBruker Daltonic8206195Calibrant voor medium massabereik
Phophorus redSigma-Aldrich343-242-5GCalibrant voor laag massabereik
SCiLS Lab 2015Bruker DaltonicIMS data statistische analyse
Surgical Forceps (blunt)Fisher08-875-8BVoor het verwijderen van de eierstokken
TFAFisher TechnologiesA116-50Toegevoegd aan matrixoplossing
TM SprayerHTX TechnologiesVoor het aanbrengen van matrix

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paine, M. R., et al. Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model. PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).
  2. Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C. Translating Metabolic Exchange with Imaging Mass Spectrometry. Nature Chemical Biology. 5 (12), 885-887 (2009).
  3. Li, H., Hummon, A. B. Imaging Mass Spectrometry of Three-Dimensional Cell Culture Systems. Analytical Chemistry. 83 (22), 8794-8801 (2011).
  4. Yang, J. Y., et al. Primer on Agar-Based Microbial Imaging Mass Spectrometry. Journal of Bacteriology. 194 (22), 6023-6028 (2012).
  5. Coscia, F., et al. Integrative Proteomic Profiling of Ovarian Cancer Cell Lines Reveals Precursor Cell Associated Proteins and Functional Status. Nature Communications. 7, 12645(2016).
  6. Labidi-Galy, S. I., et al. High Grade Serous Ovarian Carcinomas Originate in the Fallopian Tube. Nature Communications. 8 (1), (2018).
  7. Klinkebiel, D., Zhang, W., Akers, S. N., Odunsi, K., Karpf, A. R. DNA Methylome Analyses Implicate Fallopian Tube Epithelia as the Origin for High-Grade Serous Ovarian Cancer. Molecular Cancer Research. 14 (9), 787-794 (2016).
  8. Falconer, H., Yin, L., Gronberg, H., Altman, D. Ovarian Cancer Risk After Salpingectomy: A Nationwide Population-Based Study. JNCI Journal of the National Cancer Institute. 107 (2), dju410(2015).
  9. Dean, M., Davis, D. A., Burdette, J. E. Activin A Stimulates Migration of the Fallopian Tube Epithelium, an Origin of High-Grade Serous Ovarian Cancer, through Non-Canonical Signaling. Cancer Letters. 391, 114-124 (2017).
  10. King, S. M., Burdette, J. E. Evaluating the Progenitor Cells of Ovarian Cancer: Analysis of Current Animal Models. BMB Reports. 44 (7), 435(2011).
  11. Reznik, E., et al. Landscape of Metabolic Variation across Tumor Types. Cell Systems. 6 (3), 301-313 (2018).
  12. Watkins, J. L., et al. Clinical Impact of Selective and Nonselective Beta-Blockers on Survival in Patients with Ovarian Cancer: Beta-Blockers and Ovarian Cancer Survival. Cancer. 121 (19), 3444-3451 (2015).
  13. Lutgendorf, S. K., et al. Stress-Related Mediators Stimulate Vascular Endothelial Growth Factor Secretion by Two Ovarian Cancer Cell Lines. Clinical Cancer Research. 9 (12), 4514-4521 (2003).
  14. Sood, A. K. Stress Hormone-Mediated Invasion of Ovarian Cancer Cells. Clinical Cancer Research. 12 (2), 369-375 (2006).
  15. Hoffmann, T., Dorrestein, P. C. Homogeneous Matrix Deposition on Dried Agar for MALDI Imaging Mass Spectrometry of Microbial Cultures. Journal of The American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1959-1962 (2015).
  16. Zink, K. E., Dean, M., Burdette, J. E., Sanchez, L. M. Imaging Mass Spectrometry Reveals Crosstalk between the Fallopian Tube and the Ovary That Drives Primary Metastasis of Ovarian Cancer. ACS Central Science. 4 (10), 1360-1370 (2018).
  17. Armaiz-Pena, G. N., et al. Src Activation by β-Adrenoreceptors Is a Key Switch for Tumour Metastasis. Nature Communications. 4, 1403(2013).
  18. Choi, M. J., et al. HTERT Mediates Norepinephrine-Induced Slug Expression and Ovarian Cancer Aggressiveness. Oncogene. 34 (26), 3402(2015).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Imaging Mass SpectrometryMALDI TOF MSSmall Molecule CommunicationOvarian Cancer MetastasisAgarose CocultureTissue Cell CocultureSample Preparation MethodDesiccation ProcessSpatial IntegrityLabel Free Analysis

Gerelateerde artikelen