Dit artikel presenteert een protocol voor de vaststelling van een ligatuur-geïnduceerde model van de parodontitis Murine met meerdere maxillaire Molars, resulterend in grotere gebieden van de betrokken gingivale weefsel en bot voor latere analyse, alsmede verminderde dierlijke gebruik. Een techniek om orale neutrofielen te beoordelen op een manier die analoog is aan menselijke proefpersonen wordt ook beschreven.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Robuust, ligatuur-geïnduceerde model van lymfklier-periodontitis voor de evaluatie van orale neutrofielen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
De belangrijkste voordelen van het bestuderen van de pathofysiologie van parodontale ziekte met behulp van Murine-modellen zijn de verlaagde kosten van dieren, array van genetisch gemodificeerde stammen, het enorme aantal analyses dat kan worden uitgevoerd op geoogste zachte en harde weefsels. Veel van deze systemen zijn echter onderhevig aan procedurele kritieken. Als alternatief, het ligatuur-geïnduceerde model van parodontale ziekte, gedreven door de gelokaliseerde ontwikkeling en het behoud van een dysbiotische orale microbiome, kan worden gebruikt, die snel wordt geïnduceerd en relatief betrouwbaar. Helaas zijn de varianten van het ligatuur-geïnduceerde Murine parodontitis protocol geïsoleerd tot de focale gebieden van het parodontium en onderhevig aan voortijdige avulsie van de geïnstalleerde ligatuur. Dit minimaliseert de hoeveelheid weefsel die beschikbaar is voor latere analyses en verhoogt het aantal dieren dat nodig is voor onderzoek. Dit protocol beschrijft de precieze manipulaties die nodig zijn om verlengde molaire ligaturen te plaatsen met een verbeterde retentie en het gebruik van een nieuwe Spoeltechniek om orale neutrofielen bij muizen te herstellen met een alternatieve aanpak die de bovengenoemde technische uitdagingen.
Inleiding
Periodontale ziekte (PD) is een osteolytische aandoening die gepaard gaat met een significante gastheer morbiditeit en economische last, die zich manifesteert door gingivale ontsteking en verlies van zowel zachte weefsel gehechtheid als osseeuze steun voor de aangetaste tandheelkunde1,2,3,4. Dit proces wordt beheerst door interacties tussen de mondelinge microbiota en aangeboren immuunsysteem van de gastheer. Het wordt ook geassocieerd met exacerbatie van andere systemische ontstekingsziekten, waaronder diabetes, hart-en vaatziekten, en kank....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle onderzoeken van Murine voldeden aan de relevante ethische voorschriften en werden goedgekeurd door de Dierenzorg Commissie van de Universiteit van Toronto en de Raad voor onderzoek ethiek (protocol 20011930).
1. ligatuur installatie
Opmerking: dit is een niet-steriele chirurgische ingreep die kan worden uitgevoerd in een standaard operatie theater. Het gebruik van kiemvrije dieren (hier niet gedekt) is een mandaat voor de behandeling binnen een bioveiligheidskast, het gebruik van steriele instrumenten en de inoculatie van de mondholte met parodontitis om de klinische manifestaties van parodonticus te veroorzak....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Representatieve stroom cytometrie gegevens uit orale spoeling monsters van een naïeve (Figuur 3a) en ontstoken (Figuur 3B) Murine mondholte secundair aan de ligatuur-geïnduceerde parodontitis. De terugwinning van Pmn's uit een geïnstalleerde ligatuur is ook aangetoond (Figuur 3C). Flow cytometer kanaal spanningen werden handmatig gekalibreerd en compensatie werd uitgevoerd met enkel.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het meest kritische element in verband met het gebruik van het muriene ligatuur-geïnduceerde model van parodontitis is gecentreerd rond het vasthouden van de ligatuur tot het moment van opoffering of opzettelijke verwijdering. De geïnstalleerde biofilm-retentive ligatuur is in staat om een significant verlies van alveolaire bothoogte te induceren in slechts 6 dagen, met een en tussen de 11 – 16 dagen periode39. De beslissing om dierlijke proefpersonen op te offeren vóór de maximale periode van bot.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
J. W. C. wordt ondersteund door de Canadian Institutes of Health Research (CIHR). De auteurs willen Dr. Chunxiang Sun bedanken voor haar hulp bij het uitvoeren van de trypan Blue-kleuring.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Anti-mouse F4/80 Antibody | BioLegend | 123131 | BV421, Clone BM8 |
| Anti-mouse Ly6G Antibody | BD | 560602 | PerCP-Cy5.5, Clone 1A8 |
| C57BL/6 Male Mice | Charles River | 8 tot 12 weken oud | |
| Conical Centrifuge Tube | FroggaBio | TB15-500 | 15 mL |
| Conical Centrifuge Tube | FroggaBio | TB50-500 | 50 mL |
| FACS Buffer | Multiple | 1% BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco) | |
| FACSDiva | BD | v8.0.1 | |
| Fibre-Lite | Dolan-Jenner | Model 180 | |
| FlowJo | Tree Star | v10.0.8r1 | |
| Heat Therapy Pump | Hallowell | HTP-1500 | |
| Hot Glass Bead Sterilizer | Electron Microscopy Sciences | 66118-10 | Germinator 500 |
| Iris Scissors | Almedic | 7602-A8-684 | Recht |
| Ketamine | Vetoquinol | 100mg/mL | |
| LSRFortessa | BD | X-20 | |
| Mouse Serum | Sigma | M5905-5ML | |
| Nylon Mesh Filter | Fisher Scientific | 22-363-547 | 40 µm |
| Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 28908 | 16% (w/v), Methanol Vrij |
| Phosphate-buffered Saline | Sigma | D1408-500ML | Zonder CaCl2 en MgCl2, 10x |
| Plastic Disposable Syringes | BD | 309659 | 1 mL |
| Rat Serum | Sigma | R9759-5ML | |
| Silk Suture | Covidien | SS652 | C13 USP 5-0 |
| Splinter Forceps | Almedic | 7726-A10-700 | #1 |
| Splinter Forceps | Almedic | 7727-A10-704 | #5 |
| Stereo Dissecting Microscope | Carl Zeiss | 28865 | Photo-Zusatz |
| Sterile Hypodemic Needle | BD | 305111 | 26G X 1/2" |
| Syringe | BD | 309659 | 1 mL |
| Xylazine | Rompun | 20mg/mL |
Referenties
- Hajishengallis, G. Immunomicrobial pathogenesis of periodontitis: keystones, pathobionts, and host response. Trends in Immunology. 35 (1), 3-11 (2014).
- Pihlstrom, B. L., Michalowicz, B. S., Johnson, N. W. Periodontal diseases. Lancet. 366 (9499), 1809-1820 (2005). <....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
